土壤中淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

1、第24卷 第3期沈 陽(yáng) 化 工 大 學(xué) 學(xué) 報(bào)JOURNALOFSHENYANGUNIVERSITYOFCHEMICALTECHNOLOGY2010.09Vo.l24 No.3Sep.2010文章編號(hào): 1004-4639(2010)03-0203-06土壤中淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化雷曉燕(沈陽(yáng)化工大學(xué)環(huán)境與生物工程學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110142)摘 要: 為篩選淀粉酶的高產(chǎn)菌株,利用淀粉水解圈作為篩選模型,從淀粉廠附近土壤中篩選得到產(chǎn)淀粉酶能力較強(qiáng)的細(xì)菌B5.對(duì)其產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化,最終得到最佳碳源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2 0%的淀粉,最佳氮源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 5%的酵母膏加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 5%的蛋白胨

2、,最適初始pH值為6 0,最適培養(yǎng)溫度為37 ,最適溶氧量為50mL搖瓶裝15mL培養(yǎng)基,最佳產(chǎn)酶時(shí)間為48h,培養(yǎng)基中同時(shí)補(bǔ)充質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 05%的MgSO4、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 05%的CaCl2和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 005%的FeSO4時(shí)可大幅提高酶活力.菌株B5液體發(fā)酵產(chǎn)酶活力最高可達(dá)158 89U/g,該淀粉酶最適反應(yīng)溫度為42 ,最適反應(yīng)pH值為5 0.關(guān)鍵詞: 淀粉酶; 水解圈; 酶活力中圖分類號(hào): Q939 9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A淀粉酶(Amylase)是水解淀粉和糖原的酶類的總稱,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中,是最早實(shí)現(xiàn)工業(yè)生產(chǎn)并且迄今為止用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑品種1但適合商業(yè)生產(chǎn)需要的

3、菌株仍然很少,在淀粉酶生產(chǎn)過(guò)程中選擇適合的菌株是最重要的前提條件.本文以土壤作為原料,從中篩選出具有產(chǎn)淀粉酶能力的出發(fā)菌株,并對(duì)所得的出發(fā)菌株進(jìn)行產(chǎn)酶條件的考察和優(yōu)化,進(jìn)一步提高其產(chǎn)酶能力,為使其最終能應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)、帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益做大量的準(zhǔn)備工作.特別是20世紀(jì)60年代以來(lái),由于酶法生產(chǎn)葡萄糖,以及用葡萄糖生產(chǎn)異構(gòu)糖漿的大規(guī)模工業(yè)化,淀粉酶的需要量越來(lái)越大,幾乎占整個(gè)酶制劑總產(chǎn)量的50%以上2.淀粉酶根據(jù)其作用方式可分為 淀粉酶(EC3 2 1 1)與 淀粉酶(EC3 2 1 2). 淀粉酶廣泛分布于動(dòng)物(唾液、胰臟等)、植物(麥芽、山萮菜)及微生物中31 實(shí)驗(yàn)材料與方法1 1 材 料1 1

4、1 菌種細(xì)菌B5,由沈陽(yáng)某淀粉廠附近土壤中篩選得到.1 1 2 培養(yǎng)基(1)斜面培養(yǎng)基:可溶性淀粉,質(zhì)量分?jǐn)?shù)2 0%;蛋白胨,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;NaC,l質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;KH2PO4,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 1%;KNO3,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 1%;瓊脂,質(zhì)量分?jǐn)?shù)2 0%;水100mL;pH值6 0.(2)分離平板培養(yǎng)基:可溶性淀粉,質(zhì)量分.微生物的許多種類都能產(chǎn)生淀粉酶,Buchanan和Tamuri等人描述了數(shù)百種嗜熱真菌和上千種細(xì)菌可產(chǎn)生淀粉酶,僅Bacillus屬48個(gè)種中就有32個(gè)種能產(chǎn)生 淀粉酶.淀粉酶種類繁多,特點(diǎn)各異,可應(yīng)用于造紙、印染、釀造、果汁和食品加工、醫(yī)藥、洗滌劑、工業(yè)副產(chǎn)品及廢料的處理

5、、青貯飼料及微生態(tài)制劑等多種領(lǐng)域54.因?yàn)榈矸勖傅挠猛緩V泛,各國(guó)在對(duì)淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選方面都做了大量的研6-8究工作,目前所得淀粉酶活力最高可達(dá)到260U/mL左右.雖然不少微生物能產(chǎn)生淀粉酶,收稿日期: 2009-02-09作者簡(jiǎn)介: 雷曉燕(1972-),女,陜西綏德人,講師,碩士,主要從事生物技術(shù)教學(xué)和科研工作.204沈 陽(yáng) 化 工 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2010年數(shù)2 0%;酵母膏,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;蛋白胨,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;NaC,l質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;KH2PO4,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 1%;瓊脂,質(zhì)量分?jǐn)?shù)2 0%;水100mL;pH值6 0.(3)種子培養(yǎng)基:可溶性淀粉,質(zhì)量分?jǐn)?shù)2 0%;酵母膏,

6、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;蛋白胨,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;NaC,l質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;KH2PO4,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 1%;水100mL;pH值6 0.(4)產(chǎn)酶液體培養(yǎng)基:可溶性淀粉,質(zhì)量分?jǐn)?shù)2 0%;酵母膏,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;蛋白胨,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;NaC,l質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%;KH2PO4,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 1%;CaCl2 2H2O,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 05%;MgSO4 7H2O,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 05%;FeSO4 7H2O,質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 005%;水100mL;pH值6 0.1 1 3 主要試劑培養(yǎng)基成分為市售分析純和生化試劑.1 1 4 主要儀器DHP 420電熱恒溫培養(yǎng)箱(光明醫(yī)療儀器廠),LDZX 40B!型立式自

7、動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠),ZD 85氣浴恒溫振蕩器(常州國(guó)華電器有限公司),WD900微波爐(順德市格藍(lán)仕電器實(shí)業(yè)有限公司),HNP 1水平流形超凈工作臺(tái)(南通滬南科學(xué)儀器有限公司),101 2A型數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱(上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司),FA1104分析天平(上海精科天平有限公司),BC/BD 428A臥式冷藏冷凍轉(zhuǎn)換柜(青島海爾特種電冰柜有限公司),SP 2000722型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海萊奧光學(xué)儀器有限公司).1 2 方法1 2 1 菌種篩選初篩:從沈陽(yáng)某淀粉廠附近采集土樣,稱取5g土樣,放入裝有45mL無(wú)菌水的三角瓶中,震蕩20min后靜置5min,然后進(jìn)行

8、濃度梯度稀釋-6-4-5-6到10,分別在10、10、10濃度下各取1mL土壤稀釋液制成混菌平板,將培養(yǎng)皿放入37 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h.取出培養(yǎng)好的平皿,在長(zhǎng)出的菌落上滴加碘液,菌落周?chē)缬袩o(wú)色透明圈出現(xiàn),說(shuō)明淀粉被水解,即該菌株能產(chǎn)生淀粉酶,編號(hào)保存.復(fù)篩:從冰箱中取出所有初篩得到的菌株,轉(zhuǎn)接試管斜面活化,37 下恒溫培養(yǎng)24h.將所有菌種分別點(diǎn)種到分離培養(yǎng)基平板上進(jìn)行培養(yǎng),待菌落長(zhǎng)成后向菌落上滴加碘液,比較淀粉水解圈大小,挑取d0/d1(d0為水解圈直徑,d1為菌落直徑)較大的菌株連續(xù)進(jìn)行3次平板點(diǎn)種培養(yǎng),選取d0/d1值最大的菌株作為本實(shí)驗(yàn)出發(fā)菌株.1 2 2 淀粉酶活力的測(cè)定9發(fā)酵液4

9、000r/min離心20min,取上清液,即為粗酶液.取5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 5%的可溶性淀粉溶液,在37 水浴中預(yù)熱10min,加入適當(dāng)稀釋的酶液0 5mL,準(zhǔn)確反應(yīng)5min后,用5mL濃度為0 1mol/L的HCl終止反應(yīng).取0 5mL反應(yīng)液與5mL稀碘液顯色,在620nm處測(cè)吸光度.以0 5mL蒸餾水代替0 5mL反應(yīng)液為空白,以不加酶液(加同體積的緩沖液)的管為對(duì)照.酶活定義:在37 、pH=6 0條件下,5min內(nèi)水解1mg淀粉的酶量為一個(gè)活力單位.酶活力根據(jù)以下公式計(jì)算:酶活=(R0-R)/R050D4.式中,R0、R分別表示對(duì)照和反應(yīng)液的光密度,D為粗酶液的稀釋倍數(shù).調(diào)整D使(R0

10、-R)/R在0 20 7之間,4為轉(zhuǎn)換系數(shù),無(wú)單位.1 2 3 最佳碳源的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),于24h后分別取1mL培養(yǎng)液,加入到2 0%淀粉,2 0%麥芽糖,2 0%乳糖,2 0%蔗糖,2 0%葡萄糖5種不同碳源的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,于37 搖床培養(yǎng)48h.分別離心收集粗酶液,測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳碳源.1 2 4 最佳氮源的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),于24h后分別取1mL培養(yǎng)液,加入到氮源分別為0 5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)牛肉膏,0 5%酵母膏,0 5%蛋白胨,0 5%牛肉膏+0 5%蛋白胨,0 5%酵母膏+0 5%蛋白

11、胨5種不同氮源的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中.于37 搖床培養(yǎng)48h.分別離心收集粗酶液,測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳氮源.第3期 雷曉燕:土壤中淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化 2051 2 5 最佳培養(yǎng)基初始pH值的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),24h后分別取1mL培養(yǎng)液,加入到pH值分別為5 0、6 0、7 0、8 0、9 0,碳源和氮源已優(yōu)化的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,37 下培養(yǎng)48h.分別離心收集粗酶液,測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳培養(yǎng)基的初始pH值.1 2 6 最佳培養(yǎng)溫度的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),24h后分別取1mL培養(yǎng)液,加入

12、碳源、氮源和pH值已優(yōu)化的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中,分別于33 、35 、37 、39 、41 下培養(yǎng)48h.分別離心收集粗酶液,測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳培養(yǎng)溫度.1 2 7 最佳溶氧量的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),24h后分別取1mL培養(yǎng)液,接入已優(yōu)化碳源、氮源和pH值的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中培養(yǎng),產(chǎn)酶培養(yǎng)基的裝液量分別為10mL、15mL、20mL、25mL、30mL,37 下培養(yǎng)48h,分別離心收集粗酶液,測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳溶氧量.1 2 8 最佳產(chǎn)酶時(shí)間的確定取出發(fā)菌株活化,然后取一環(huán)接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),24h后分別取1mL培養(yǎng)液,接入已優(yōu)

13、化碳源、氮源和pH值的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中培養(yǎng),分別于0h,12h,24h,36h,48h,60h取樣,測(cè)定發(fā)酵液的酶活力,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳產(chǎn)酶時(shí)間.1 2 9 離子對(duì)產(chǎn)酶的影響通過(guò)向培養(yǎng)基中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 05%的MgSO4、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 05%的CaCl2和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 005%的FeSO4等不同離子進(jìn)行產(chǎn)酶實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)48h,測(cè)定酶活力,根據(jù)測(cè)定結(jié)果確定最適添加的離子.1 2 10 酶反應(yīng)最適pH值的確定分別用pH值為4 0、5 0、6 0、7 0、8 0、9 0的緩沖溶液配制可溶性淀粉液,將在最適條件下培養(yǎng)獲得的粗酶液分別在以上各種pH值條件下測(cè)定其淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)得的結(jié)果確定淀粉

14、酶反應(yīng)的最適pH值.1 2 11 酶反應(yīng)最適溫度的確定將在最適條件下培養(yǎng)獲得的粗酶液分別在27 、32 、37 、42 、47 、52 等各種不同溫度下測(cè)定淀粉酶活力,根據(jù)所測(cè)得的結(jié)果確定淀粉酶反應(yīng)的最適溫度.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2 1 初篩結(jié)果土樣經(jīng)稀釋并在淀粉培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)后,共挑選出24株能水解淀粉的細(xì)菌,分別將24株細(xì)菌接種到斜面培養(yǎng)基上,編號(hào)為B1B24,菌株產(chǎn)生水解圈的情況如圖1所示.圖1 淀粉酶產(chǎn)生菌產(chǎn)生的淀粉水解圈Fig.1 Hydrolysiscircleofstarchproducedbyastrainwhichcanproduceamylase2 2 復(fù)篩結(jié)果將所有初篩得到的菌

15、種分別點(diǎn)種到淀粉培養(yǎng)基平板上進(jìn)行培養(yǎng),待菌落長(zhǎng)成后向菌落上滴加碘液,比較淀粉水解圈大小,挑取d0/d1(d0為水解圈直徑,d1為菌落直徑)較大的5株菌株連續(xù)進(jìn)行3次平板點(diǎn)種培養(yǎng),最終選取d0/d1值最大的菌株B5作為本實(shí)驗(yàn)出發(fā)菌株.將B5菌株接多支斜面,經(jīng)培養(yǎng)后于低溫保存.復(fù)篩結(jié)果見(jiàn)表1.表1 復(fù)篩結(jié)果Table1 Resultsofre screening編號(hào)12345水解圈直徑d0/cm2 402 901 701 901 90菌落直徑d1/cm1 301 801 001 200 60d0/d11 851 611 701 583 17206沈 陽(yáng) 化 工 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2010年2 3菌株

16、產(chǎn)酶條件的優(yōu)化發(fā)酵過(guò)程中影響菌株生長(zhǎng)、產(chǎn)酶的主要因素為:碳源、氮源、發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值、發(fā)酵溫度、溶氧量、金屬離子及產(chǎn)酶時(shí)間.對(duì)上述因素進(jìn)行全面考察,以確定菌株的最佳產(chǎn)酶條件.2.3.1 碳源對(duì)細(xì)菌B5產(chǎn)酶能力的影響分別在5種含不同碳源的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌B5,37 搖床培養(yǎng)48h.經(jīng)過(guò)對(duì)發(fā)酵液中淀粉酶活力的測(cè)定,可知碳源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2 0%的淀粉時(shí)細(xì)菌B5產(chǎn)酶活力最高,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2.37 下培養(yǎng)48h,測(cè)定不同pH值下淀粉酶活力,結(jié)果見(jiàn)圖4,根據(jù)所測(cè)定的結(jié)果確定最佳培養(yǎng)基的初始pH值為6 0.圖4 培養(yǎng)基初始pH值對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響Fig.4 Theimpactofinitia

17、lpHonBacteriumB5inproducingamylase2 3 4 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響將出發(fā)菌株B5分別在5種不同溫度下進(jìn)行培養(yǎng),48h后離心收集粗酶液,測(cè)定淀粉酶活力,結(jié)果見(jiàn)圖5.由圖5結(jié)果可以看出,37 培養(yǎng)時(shí)菌株B5產(chǎn)酶能力最強(qiáng).圖2 碳源對(duì)細(xì)菌B5產(chǎn)酶的影響Fig.2 TheimpactofcarbonsourceonBacteriumB5inproducingamylase2 3 2 氮源對(duì)細(xì)菌B5產(chǎn)酶能力的影響分別在含5種不同氮源的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌B5,37 搖床培養(yǎng)48h.經(jīng)過(guò)對(duì)發(fā)酵液中淀粉酶活力的測(cè)定,可知氮源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%酵母膏+質(zhì)量分?jǐn)?shù)0

18、5%蛋白胨時(shí)細(xì)菌B5產(chǎn)酶活力最高,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3.圖5 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響Fig.5 TheimpactofculturetemperatureonBacteriumB5inproducingamylase2 3 5 溶氧量對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響將菌株B5在不同溶氧情況下進(jìn)行培養(yǎng),48h后離心收集粗酶液,測(cè)定淀粉酶活力,結(jié)果見(jiàn)圖6.由圖6可以看出,50mL搖瓶中裝液量為15mL時(shí)為最佳溶氧量.圖3 氮源對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響Fig.3 TheimpactofnitrogensourceonBacteriumB5inproducingamylase圖6 溶氧對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的

19、影響Fig.6 TheimpactofdissolvedoxygenonBacteriumB5inproducingamylase2 3 3 培養(yǎng)基初始pH值對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力的影響將碳源和氮源已優(yōu)化的產(chǎn)酶培養(yǎng)基pH值7892 3 6 最佳產(chǎn)酶時(shí)間的確定B5在不第3期 雷曉燕:土壤中淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化 207同時(shí)間點(diǎn)取樣測(cè)定酶活力,結(jié)果如圖7所示.由圖7可見(jiàn)以看出,菌株B5的最佳產(chǎn)酶時(shí)間是48h.由圖9可以看出,pH值為5 0時(shí)淀粉酶活力最強(qiáng).2 4 2 酶反應(yīng)最適溫度的確定分別在各種不同溫度下測(cè)定菌株B5所產(chǎn)淀粉酶的酶活力,結(jié)果見(jiàn)圖10.由圖10可以看出,在42 時(shí)酶活力最強(qiáng),

20、此時(shí)酶活力可達(dá)158 9U/mL.圖7 菌株B5淀粉酶最佳產(chǎn)生時(shí)間的確定結(jié)果Fig.7 ThedeterminationofoptimaltimeinproducingamylasebyBacteriumB52 3 7 離子對(duì)產(chǎn)酶的影響2+2+2+Mg、Ca、Fe是很多種酶的激活劑并且可以提高酶活力,為測(cè)定這幾種離子對(duì)菌株B5所產(chǎn)淀粉酶是否有提高酶活力的作用,向培養(yǎng)基中單一或混合添加幾種離子進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶實(shí)驗(yàn),酶活測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖8.由圖8可以看出,同時(shí)添加3種離子對(duì)菌株B5產(chǎn)酶能力有較大的影響.圖10 酶反應(yīng)最適溫度的測(cè)定結(jié)果Fig.10 Thedeterminationofoptimalreac

21、tiontemperatureofamylase在最適條件下菌株B5所產(chǎn)淀粉酶活力從最初的92 6U/mL提高到158 9U/mL,酶活力提高效果明顯.3 結(jié) 論實(shí)驗(yàn)中篩選出的細(xì)菌B5具有產(chǎn)淀粉酶的能力,菌株產(chǎn)酶能力通常會(huì)受到菌株培養(yǎng)時(shí)碳源、氮源、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)溫度、溶氧、離子等許多因素的影響,另外菌株所產(chǎn)酶的活力也圖8 離子對(duì)菌株B5產(chǎn)酶的影響Fig.8 TheimpactofiononBacteriumB5inproducingamylase會(huì)受到酶發(fā)揮作用時(shí)最適溫度和最適pH值的影響.綜合考察以上各種影響因素對(duì)酶活力的影響后,確定菌株B5產(chǎn)淀粉酶的最適培養(yǎng)條件以及淀粉酶發(fā)揮作用時(shí)

22、的最適條件.以淀粉廠附近土樣為原料,通過(guò)淀粉水解圈篩選模型篩選得到一株產(chǎn)淀粉酶活力較強(qiáng)的細(xì)菌B5.通過(guò)對(duì)B5產(chǎn)酶條件的考察得出:培養(yǎng)基中最佳碳源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的淀粉,最佳氮源為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%的酵母膏加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 5%的蛋白胨,最適初始pH值為6 0,最適培養(yǎng)溫度為37 ,最適溶氧量為50mL搖瓶裝15mL培養(yǎng)基,最佳產(chǎn)酶時(shí)間是48h,培養(yǎng)基中同時(shí)補(bǔ)充質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 05%的MgSO4、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 05%的CaCl2和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0 005%的FeSO4時(shí)可大幅提高酶活力.該淀粉酶最適反應(yīng)溫度為42 ,最適反應(yīng)pH值為5 0.菌株B5液2 4 菌株B5所產(chǎn)淀粉酶酶學(xué)性質(zhì)的研究2 4 1 酶反應(yīng)最適pH

23、值的確定分別用不同pH值的緩沖溶液配制可溶性淀粉液,測(cè)定淀粉酶活力,結(jié)果見(jiàn)圖9.圖9 酶反應(yīng)最適pH值的確定結(jié)果Fig.9 ThedeterminationofoptmialreactionpHofamylase體發(fā)酵產(chǎn)酶活力最高可達(dá)158 9U/mL,該菌株如果再進(jìn)一步進(jìn)行誘變處理酶活力還有提升空208沈 陽(yáng) 化 工 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2010年6 ShojiH,SugimotoT,HosoiK,eta.lSimultaneous間.本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、直觀,可快速、高效地篩選出淀粉酶產(chǎn)生菌.ProductionofGlucoamylaseandAcidStable am ylaseUsingNo

24、velSubmergedCultureofAspergillusKawachiiNBRC4308J.JournalofBioscienceandBioengineering,2007,103(2):203-205.7 NagamineK,MurashimaK,KatoT,eta.lModeofamylaseProductionbytheShochuKojiMoldAs pergillusKawachiiJ.Bioscience,BiotechnologyandBiochemistry,2003,67(10):2194-2202.8 SivaramakrishnanS,GangadharanD,

25、NampoothiriKM,eta.l AmylasefromMicrobialSources#AnOverviewonRecentDevelopmentsJ.FoodTech nolBiotechno,l2006,44(2):173-184.9 沈萍.微生物學(xué)M.2版.北京:高等教育出版社,2002:63-65.參考文獻(xiàn):1 谷軍. 淀粉酶的生產(chǎn)與應(yīng)用J.生物技術(shù),1994,4(3):1-5.2 白坤,于德貴,周冬穎. 淀粉酶的性質(zhì)及其液化作用J.中國(guó)釀造,1995(5):1-5.3 張強(qiáng),劉成君,蔣芳,等.耐高溫 淀粉酶產(chǎn)生菌的分離鑒定及發(fā)酵條件與酶性質(zhì)研究J.食品與發(fā)酵工業(yè),2005,3

26、1(2):34-37.4 羅志剛,楊景峰,羅發(fā)興. 淀粉酶的性質(zhì)及應(yīng)用J.食品研究與研發(fā),2007,28(8):1-18.5 張麗蘋(píng),徐巖,金建中.酸性 淀粉酶的研究與應(yīng)用J.釀酒,2002,29(3):4-15.ScreeningofBacteriumProducingAmylasefromtheSoilandOptmiizationoftheConditionforEnzymeProductionLEIXiao yan(ShenyangUniversityofChemicalTechnology,Shenyang110142,China)Abstrac:t Inordertoscreenabacteriumw