細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色生計(jì)ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌的簡單染色和細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色革蘭氏染色細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色l 一 目的要求l 二 根本原理l 三 實(shí)驗(yàn)資料l 四 無菌操作過程l 五 操作步驟l 六 實(shí)驗(yàn)報(bào)告l 七 思索題一一 目的要求目的要求1 1 學(xué)習(xí)制染色片技術(shù)，學(xué)習(xí)簡單染色學(xué)習(xí)制染色片技術(shù)，學(xué)習(xí)簡單染色 革蘭氏染色原理，革蘭氏染色原理，了解著色機(jī)理。了解著色機(jī)理。學(xué)習(xí)并掌握無菌操作的技術(shù)。學(xué)習(xí)并掌握無菌操作的技術(shù)。3 3 掌握簡單染色掌握簡單染色 革蘭氏染色的方法，并能正確染色革蘭氏染色的方法，并能正確染色4 4 穩(wěn)定顯微鏡油鏡的運(yùn)用方法。穩(wěn)定顯微鏡油鏡的運(yùn)用方法。一細(xì)菌的簡

2、單染色原一細(xì)菌的簡單染色原理理二革蘭氏染色根本原二革蘭氏染色根本原理理二二 根本原理根本原理l細(xì)菌細(xì)胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無色透明，不易察看，細(xì)菌細(xì)胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無色透明，不易察看，所以必需進(jìn)展染色處置，使細(xì)胞著色，便于察看。所以必需進(jìn)展染色處置，使細(xì)胞著色，便于察看。l簡單染色是運(yùn)用單一染料染色，可用于察看細(xì)菌形狀、大小、及陳列方式簡單染色是運(yùn)用單一染料染色，可用于察看細(xì)菌形狀、大小、及陳列方式. .l染色前普通要將細(xì)胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘附于玻片上，還可染色前普通要將細(xì)胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘附于玻片上，還可以加強(qiáng)菌體的著色才干

3、。固定有加熱法和化學(xué)法兩種，無論采用何種方法均以加強(qiáng)菌體的著色才干。固定有加熱法和化學(xué)法兩種，無論采用何種方法均應(yīng)維持細(xì)胞原有形狀。應(yīng)維持細(xì)胞原有形狀。 一細(xì)菌的簡單染色原理一細(xì)菌的簡單染色原理二革蘭氏染色根本原理二革蘭氏染色根本原理 革蘭氏染色是用于細(xì)菌鑒別的一種重要染色方法。它是革蘭氏染色是用于細(xì)菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細(xì)菌、陰性細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造、組成的不同而根據(jù)革蘭氏陽性細(xì)菌、陰性細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造、組成的不同而運(yùn)用一系列的染色處置使之差別顯色。其染色方法是先將細(xì)運(yùn)用一系列的染色處置使之差別顯色。其染色方法是先將細(xì)菌分別用結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復(fù)染劑菌分別用

4、結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復(fù)染劑復(fù)染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細(xì)菌；被染成紫色的復(fù)染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細(xì)菌；被染成紫色的是革蘭氏陽性細(xì)菌。是革蘭氏陽性細(xì)菌。v革蘭氏染色原理：革蘭氏染色原理：v第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色v第二步：碘和結(jié)晶紫構(gòu)成大分子復(fù)合物，分子大，能第二步：碘和結(jié)晶紫構(gòu)成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)。被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)。v第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反響。同的反響。vG+ G+ 菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙菌：細(xì)胞壁厚，肽

5、聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑減少，故結(jié)晶紫醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑減少，故結(jié)晶紫- -碘復(fù)碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。vGG菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其構(gòu)造收縮，因其含脂量高構(gòu)造收縮，因其含脂量高, ,乙醇將脂溶解，縫隙加大，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫結(jié)晶紫- -碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，蕃紅復(fù)染后呈紅色。無色，蕃紅復(fù)染后呈紅色。1234？三三 實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料大腸桿菌大

6、腸桿菌24 h 24 h 培育斜面菌種培育斜面菌種枯草桿菌枯草桿菌16 h 16 h 培育斜面菌種培育斜面菌種四四 無菌操作過程無菌操作過程無菌操作：不讓除我們接種的微生物以無菌操作：不讓除我們接種的微生物以外外 其它微生物侵入的技術(shù)。其它微生物侵入的技術(shù)。一一 簡單染色操作步驟簡單染色操作步驟l涂片：載玻片涂片：載玻片l 無菌水無菌水l 斜面菌斜面菌種種l 無菌操無菌操作作l 均勻的均勻的薄層薄層l2 2 枯燥：枯燥： l3 3固定：加熱固固定：加熱固定定五五 操作步驟操作步驟4染色：結(jié)晶紫染染色：結(jié)晶紫染1min 或蕃紅染或蕃紅染2-3min 或石炭酸復(fù)紅或石炭酸復(fù)紅 染染1min。5水洗

7、：水洗： 6 枯燥：枯燥：7鏡檢：低倍鏡察看以確定目的鏡檢：低倍鏡察看以確定目的和范圍，再換用油鏡察看繪圖。和范圍，再換用油鏡察看繪圖。 二革蘭氏染色操作步驟二革蘭氏染色操作步驟1 1涂片：方法同單染色，然后枯燥、固定。涂片：方法同單染色，然后枯燥、固定。2 2初染：滴加結(jié)晶紫染色初染：滴加結(jié)晶紫染色1min1min，后用水沖洗。，后用水沖洗。3 3媒染：滴加碘液染色媒染：滴加碘液染色1-2min1-2min，后用水沖洗，甩，后用水沖洗，甩盡剩余水盡剩余水4 4脫色：用脫色：用95%95%乙醇沖洗乙醇沖洗3030秒需求嚴(yán)厲控制時(shí)間秒需求嚴(yán)厲控制時(shí)間和濃度，和濃度， 然后立刻用水沖洗。然后立刻用

8、水沖洗。5 5復(fù)染：用蕃紅或石炭酸復(fù)紅覆蓋涂片進(jìn)展復(fù)染，復(fù)染：用蕃紅或石炭酸復(fù)紅覆蓋涂片進(jìn)展復(fù)染，蕃紅染蕃紅染 2-3min 2-3min，假設(shè)石炭酸復(fù)紅染，假設(shè)石炭酸復(fù)紅染1min1min。水洗，。水洗，晾干。晾干。6 6鏡檢：先用低倍鏡察看，后用油鏡察看鏡檢：先用低倍鏡察看，后用油鏡察看陽性菌陽性菌陰性菌陰性菌1234六六 實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫出實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶懗鰧?shí)驗(yàn)?zāi)康? 寫出簡單染色、革蘭氏染色的根本原理寫出簡單染色、革蘭氏染色的根本原理根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪出簡單染色和革蘭氏染色的結(jié)果圖。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪出簡單染色和革蘭氏染色的結(jié)果圖。思索題：思索題：A假設(shè)對一未知菌進(jìn)展革蘭氏染色，如何能確假設(shè)對一未知菌進(jìn)展革蘭氏染色，如何能確證染色結(jié)果正確可靠？證染色結(jié)果正確可靠？ C為什么說為什么說95%酒精脫色是革蘭氏染色的關(guān)鍵步酒精脫色是革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟？驟？ 下次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：下次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)