HPV亞型與艾拉光動力治療后復發(fā)率的相關性分析

1、HPV亞型與艾拉光動力治療后復發(fā)率的相關性分析茅漢欣尖銳濕疣是由HPV感染所產(chǎn)生的一種常見性傳播疾病，目前臨床常見治療方法分為激光手術；外用藥物以及近年來新發(fā)展起來的艾拉光動力治療幾種。治療后疣體的去除率一般較好，但存在較高的復發(fā)率，即使以目前治療復發(fā)率最低的光動力(PDT)來講，一般文獻數(shù)據(jù)仍高達10.7727.9412，我們嘗試從HPV感染亞型的角度來分析其與復發(fā)率的相應關系，以便為今后進一步進行研究做好準備。1. 資料與方法1.1病例收集選取2007年12月2009年12月在上海新華醫(yī)院集團堡鎮(zhèn)人民醫(yī)院性病門診就診病人；臨床確診為尖銳濕疣；選用艾拉光動力治療；同時檢測HPV亞型為陽性者共

2、95例，全部為男性，初發(fā)者68例，年齡21-55歲，病程2周2月，平均1.5月。復發(fā)者27例，年齡25-62歲，病程3月-12月，平均6月。部位：肛周6例，尿道口37例，包皮系帶、冠狀溝52例。所有患者均檢測RPR和HIVAb，結果陰性。1.2主要儀器和試劑XD635AB型光動力激光治療儀（桂林興達光電醫(yī)療器械有限公司）?；驍U增儀（美國MJ.OPTICON ，Research INC）。凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀（潮州凱普生物化學有限公司）。微量移液器（EPPENDORF）。TGL16G型高速離心機（上海博通）。電熱恒溫水浴箱（上海博迅實業(yè)有限公司）。微量恒溫器（紹興衛(wèi)星醫(yī)療設備制造有限公司

3、）。5氨基酮戊酸（5ALA，商品名：艾拉，上海復旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司）。HPV分型試劑盒（潮州凱普生物化學有限公司）。1.3方法1.3.1艾拉光動力治療：常規(guī)消毒疣體及周圍組織，新鮮配制105氨基酮戊酸溶液涂抹疣體及周圍皮膚粘膜，膠帶封包，避光，3小時后，去除外包膠帶，抹去剩余藥液，使用光動力儀照射。治療儀總能量314.2J，能量密度100.0（J/CM2）輸出功率261（MV），波長635（nm），照射距離1015cm，照射時間20min /部位，每周一次，共3周為一療程。療程結束后隨訪三個月。1.3.2HPV分型1.3.2.1PCR提取取500ul樣本，以14000rpm離心5min

4、，棄上清；加400ul溶液（先45水浴預熱），混勻后沸水中煮15min；冷卻后加入400ul溶液，混勻，室溫靜置2min,14000rpm離心5min;去上清；室溫2min，加600ul溶液充分溶解，取1ul作PCR擴增。1.3.2.2PCR擴增取1ulDNA樣本加24ulPremix和Taq酶混合液加入反應管中，95 9min；按照95 20s55 30s72 30s循環(huán)44；72 5min。1.3.2.3PCR雜交捕獲PCR擴增產(chǎn)物95變性5min；放置雜交膜，加0.5ml預熱45的雜交液，加入PCR產(chǎn)物：45雜交10min，排盡雜交液；雜交液0.8ml沖洗三次，排盡雜交液；降溫至25，加

5、0.5ml封阻液，封閉5min，排盡封阻液；加0.5ml酶標液，蓋板溫育3.5min,排盡酶標液；加溫至36，用0.8ml溶液A沖洗雜交膜3次，排盡溶液A；加0.5mlNBT/BCIP,蓋板顯色；顯色510min；排盡NBT/BCIP,加1ml溶液B，沖洗3次，排盡溶液B；加1ml蒸餾水沖洗雜交膜，排盡蒸餾水，1h內結果判讀，2. 結果2.1光動力治療結果 95例病例，經(jīng)一個療程治療后，有81例經(jīng)三個月隨訪，尚未見復發(fā)，判別為痊愈。14例經(jīng)一個療程治療后出現(xiàn)復發(fā)，再進行第二個療程治療，其中13例經(jīng)三月隨訪，未見再次復發(fā)；另外1例經(jīng)四個療程（共十二次治療），仍出現(xiàn)復發(fā)，經(jīng)激光治療后，正隨訪中。2

6、.2 HPV分型結果95例中，HPV-6 41例；HPV11 39例；HPV-16 1例；HPV-52 1例；HPV-53 3例；HPV-66 1例；HPV-6和HPV-11混合型 6例；HPV-11和HPVcp8304混合型2例； HPV-42 -52 -53 混合型1例。2.3 光動力治療后復發(fā)與HPV亞型相關結果（詳見表1）表1 HPV亞型感染與復發(fā)相關表HPV亞型感染例數(shù)復發(fā)例數(shù)HPV-6416HPV-11393HPV-161HPV-521HPV-5333（1）HPV-661HPV-6 -116HPV-11 - cp830421HPV-42 -52 -5311合計9514 14例復發(fā)病

7、例中，HPV-6 6例；HPV-11 3例；HPV-53 3例；HPV-11 cp8304混合型1例；HPV-42 -52 -53 混合型 1例。其中1例HPV-53 經(jīng)四個療程（共十二次治療）仍有復發(fā)，現(xiàn)臨床隨訪中。3討論 HPV作為性傳播疾病尖銳濕疣的病原，對于其亞型型別的研究受到廣泛的重視。大量的研究3456均顯示尖銳濕疣感染者檢測出的HPV亞型以低危型（HPV 6/11）為主，其感染率遠高于高危型（HPV16/18等）。這與我們此次實驗的結果完全吻合，在我們的實驗中，HPV低危型的檢出比例高達80以上，占絕大多數(shù)，說明此項結果具有普遍性。關于復發(fā)性尖銳濕疣的HPV檢測，國內有學者應用P

8、CR結合核酸斑點雜交技術，進行研究后認為HPV多型別混合感染可能存在臨床意義。7在我們此次試驗中得出的結果，尚不能得出支持此項觀點的結論。 5氨基酮戊酸（5ALA）光動力療法是近年來新發(fā)展起來治療尖銳濕疣的一種治療方法，具有治愈率高，復發(fā)率低的特點。8而進一步降低尖銳濕疣復發(fā)率，則成為大家關注的焦點。國內有學者研究HPV型別與復發(fā)時間的關系，提出觀點認為HPV低危型亞型較早復發(fā)，高危型亞型要待較長時間復發(fā)。9我們通過進一步實驗發(fā)現(xiàn),HPV的某一特定亞型（HPV53）與尖銳濕疣的復發(fā)可能存在密切相關性。在我們的實驗中，共檢出4例HPV-53型病例，（3例單獨感染，1例混合感染HPV42 52 5

9、3）全部復發(fā)，其中一例更是反復復發(fā)（12次治療）仍處臨床隨訪中。HPV-53被認為是中國人特有HPV亞型，其相關研究仍較為缺乏，而此次出現(xiàn)的與尖銳濕疣復發(fā)相關性，其中是否有值得我們進一步關注的意義呢？因此次實驗樣本數(shù)相對仍較少，缺乏進一步的代表性，我們考慮如有可能，將進一步把工作作下去，期待從中發(fā)現(xiàn)一些的臨床有價值的結果。參考文獻1涂平，鄭和義，顧恒等.外用鹽酸氨酮戊酸光動力療法治療尖銳濕疣多中心隨機對照臨床試驗.中華皮膚科雜志 , 2007,.40 (2) :67-70.2王秀麗，徐世正，張春榮.ALA光動力療法聯(lián)合微波治療復發(fā)性尖銳濕疣療效觀察.中國麻風皮膚病雜志，2002，18（1）：2021. 3趙俊郁，岳學蘋，王愛平.474例尖銳濕疣患者HPV檢測分型.中國麻風皮膚病雜志，23（1）：80. 4蔓小紅，王家壁，劉耀華，等.導致外生殖器表皮腫瘤皮損中HPVDNA的檢測和分型.中華皮膚科雜志，2004，37（5）：280282. 5唐旭，許愛娥，董小平.杭州地區(qū)性病門診男性就診者HPV感染的流行病學檢查.中華實驗和臨床病毒學雜志，2006，20(1):4. 6趙敏，董漢生，陳雷.尖銳濕疣組織HPV基因芯片分型及型別分析.中國皮膚性病學雜志，2006，20(8):490-491. 7林霖霖，陳云琴，李智銘，等.復發(fā)性外陰尖銳濕疣HPV的檢測及型別分析