苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動學及生物等效性評價

1、苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥動學及生物等效性評價    論文論文參考網(wǎng)                                         

2、60;      作者：張琰，楊蕾，劉梅，覃華，陳笑艷，張逸凡，鐘大放【關鍵詞】  苯磺酸氨氯Assessment of pharmacokinetics and bioequivalence of amlodipine besylate in healthy volunteers【Abstract】 AIM: To study the pharmacokinetics parameters and bioavailability of amlodipine besylate tablets. METHODS:  An op

3、en, randomized and twoperiod crossover study with a twoweek washout interval was performed in 18 healthy volunteers. Concentrations of amlodipine besylate in plasma were assayed by liquid chromatographicmassmass spectrometric method after a single oral dose of 10 mg of the tested or the referenced t

4、ablets. The pharmacokinetics parameters, AUC, Tmax and Cmax were analyzed by two oneside t test and (12) 90%. RESULTS:  The main pharmacokinetics of the tested and referenced tablets were: Tmax: (8.9±2.5) and (8.2±2.2)  h; Cmax: (5.1±2.3) and (5.0±2.2) g/L; T1/2: (45

5、77;10) and (48±24) h; AUC（0-120 h）: (191±69) and (196±53) g/（Lh）. The relative bioavailiability of amlodipine besylate was (99±23)%. CONCLUSION:  The results of the statistical analysis show that the two formulations are bioequivalent.【Keywords】 amlodipine besylate;  ph

6、armacokinetics;  biological availability; liquid chromatography; spectrum analysis, mass【摘要】  目的： 研究苯磺酸氨氯地平片在健康人體的藥代動力學特征及其生物等效性評價. 方法： 18名健康志愿受試者，口服苯磺酸氨氯地平試驗品和參比品10 mg，用標準二階段交叉設計自身對照試驗方法，以液相色譜質譜質譜聯(lián)用法測定服藥后120 h內(nèi)不同時刻的血藥濃度，計算主要藥動學參數(shù)，并采用方差分析和雙單側t檢驗（12）90%置信區(qū)間進行生物等效性評價. 結果： 受試者分別口服受試品和參比品后，其主要

7、藥動學參數(shù)Tmax, Cmax, t1/2和AUC（0-120 h）分別為： （8.9±2.5）和（8.2±2.2） h；（5.1±2.3）和（5.0±2.2）  g/L；（45±10）和（48±24）  h；（191±69）和（196±53）  g/(Lh). 受試品的相對生物利用度為 (99±23)%. 結論： 結果表明，兩種制劑具有生物等效性. 【關鍵詞】 苯磺酸氨氯地平片；藥代動力學；生物利用度；液相色譜；光譜分析，質量0引言   苯磺酸

8、氨氯地平片（Amlodipine besylate），臨床上主要用于高血壓和心絞痛的治療1. 與同類型的其他藥物相比，該藥有服藥量低、藥效維持時間長等特點. 由于氨氯地平的血藥濃度低，我們采用精確度和靈敏度更高的液相質譜聯(lián)用法測定血漿中氨氯地平濃度.為確保用藥質量，我們評價苯磺酸氨氯地平在人體內(nèi)的生物效應，并對苯磺酸氨氯地平片和絡活喜片在健康志愿者體內(nèi)的藥物代謝動力學和生物等效度進行了比較，旨在為臨床合理用藥2-5提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料1.1.1儀器TSQ型液相色譜質譜質譜聯(lián)用儀，配有大氣壓化學電離源（APCI源）以及Xcalibur 1.4數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，Surveyor輸液泵（

9、美國Finnigan公司）. 色譜柱ZorbaxXBDC18柱，5 m粒徑，150×4.6 mmI.D（美國Agilent公司）.1.1.2藥品和試劑受試制劑： 苯磺酸氨氯地平片（陜西正康醫(yī)藥化工有限公司，批號 20030819， 5 mg/片）；參比制劑： 絡活喜片(輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號 45805012， 5 mg/片)；苯磺酸氨氯地平對照品（寧波大紅鷹藥業(yè)，含量>99.0%）；內(nèi)標為鹽酸苯海拉明（中國藥品生物制品檢定所，含量>99.4%）；甲酸（分析純，天津市博迪化工有限公司）和乙腈（色譜純，天津康科德科技有限公司）；二氯甲烷和乙醚（分析純，天津市博迪化工有限

10、公司）；磷酸鈉（分析純，沈陽化學試劑廠）；空白人血漿（沈陽中心血站）.1.1.3色譜條件流動相為乙腈水甲酸（80200.5, V/V/V）,流速為 0.5 mL/min,柱溫為室溫.1.1.4質譜條件檢測方式為正離子檢測，離子源為APCI源；電暈放電電流4.0 A；加熱毛細管溫度為280；氣化室溫度450；鞘氣（N2）壓力30 Arb；輔助氣（N2）流量3 Arb；碰撞氣（Ar）壓力1.5 mTorr；碰撞誘導解離（CID）電壓分別為15 eV（氨氯地平）和25 eV（苯海拉明）；掃描方式為選擇反應監(jiān)測（SRM），用于定量分析的離子反應分別為 m/z 409m/z 238（氨氯地平）和m/z

11、256m/z 167（內(nèi)標苯海拉明）；掃描時間為0.3 s.1.2方法1.2.1研究對象與給藥方案以標準二階段交叉自身實驗法，將18名健康男性志愿者隨機分為兩組. 試驗第一階段第一組口服受試制劑10 mg，第二組口服參比制劑10 mg. 經(jīng)2 wk清洗期后，兩組交換服藥品種進行第二階段試驗. 受試者于每次試驗前日20：00開始禁食，于試驗當日07：00空腹按規(guī)定的劑量及方法給藥，服藥后4 h 和10 h進食統(tǒng)一標準午餐.服藥前抽取空白血樣4 mL，服藥后2， 4， 6， 8， 10， 14， 24， 36， 48， 72， 96和120 h采集靜脈血4 mL, 立即移入經(jīng)肝素處理的試管中離心1

12、0 min,分離血漿,置于無菌干燥塑料管中, 于-20冰箱保存待測. 由于氨氯地平對光不穩(wěn)定,因而采血過程避光操作，血漿樣品均避光保存.1.2.2血漿樣品的處理與測定取血漿1.0 mL,加甲醇水（5050， V/V）100 L,內(nèi)標溶液（200 g/L鹽酸苯海拉明）100 L，磷酸鈉緩沖液（10 mmol/L,  pH 12）500  L,混勻；加提取試劑乙醚二氯甲烷（21， v/v）3.0 mL,渦流1 min,往復振蕩10 min, 離心5 min,取上層有機相于40空氣流下吹干，殘留物于100 L流動相中溶解，取20 L進行LC/MS/MS 分析.1.2.3標準曲線的

13、制備取空白血漿1.0 mL，加氨氯地平標準系列溶液100 L，配制成相當于濃度為0.2， 0.5， 1.6， 4.0， 8.0和16.0 g/L的血漿樣品，每種濃度做兩份樣品，按1.2.2操作，記錄各色譜峰的峰面積. 以待測物濃度為橫坐標，待測物與內(nèi)標物的峰面積比值為縱坐標，用加權最小二乘法6進行回歸運算，求得標準曲線回歸方程，氨氯地平的線性范圍為0.216.0 g/L.論文參考網(wǎng) 1.2.4方法的精密度與準確度取空白血漿加入適量氨氯地平標準溶液，分別配制成0.2， 4.0， 16.0 g/L的低、中、高三個濃度的質量控制（QC）樣品各兩份，在1日內(nèi)測3次，并以同法配制濃度連續(xù)測定3 d，1次

14、/d，并與標準曲線同時進行，與配制溶液對照，求得本法的日內(nèi)精密度和日間精密度.1.2.5提取回收率取空白血漿3份，加入適量氨氯地平標準溶液，分別配制成0.2， 4.0， 16.0 g/L的低、中、高3個濃度的樣品，按樣品測定法各測定含量6次，種濃度下樣品的提取回收率分別為： 84.0%， 77.2% 和81.2%.1.2.6穩(wěn)定性試驗文獻7-8報道，氨氯地平血漿樣品-20避光放置6 mo穩(wěn)定，日照4 h，即有30%以上的分解產(chǎn)物. 所以，全部試驗過程均要求避光操作. 本試驗考察了經(jīng)液液萃取處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24 h以及血漿樣品經(jīng)歷3 次冷凍解凍循環(huán)的穩(wěn)定性. 每一種儲存條件的穩(wěn)定

15、性考察時，取空白血漿1.0 mL，配制氨氯地平低、高兩濃度的血漿樣品，每一濃度進行三樣本分析，采用LC/MS/MS法測定，結果表明處理后的氨氯地平血漿樣品室溫放置24 h穩(wěn)定（RE為±6.3%）；經(jīng)過3次冷凍解凍循環(huán)后穩(wěn)定（RE為±12.7%）.    統(tǒng)計學處理:  Tmax, Cmax采用實測值，以消除相血藥濃度對數(shù)與對應點時間的線性進行回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)消除半衰期，采用梯形法計算AUC（0-120 h）和AUC(0-)， 得到兩制劑的主要藥代動力學參數(shù).  將AUC和Cmax參數(shù)進行對數(shù)轉換后，以雙單側t檢驗

16、和（12）%置信區(qū)間法評價兩種苯磺酸氨氯地平制劑在人體內(nèi)的相對生物等效性.2結果2.1方法的專屬性色譜圖見圖1. 在本試驗所采用的色譜質譜條件下，氨氯地平和內(nèi)標的保留時間為2.67, 2.70 min,氨氯地平和內(nèi)標的峰形良好，無雜質干擾，基線平穩(wěn)，可確保分析的專一性.2.2方法的日內(nèi)、日間精密度見表1.表1血中苯磺酸氨氯地平測定方法的日內(nèi)、日間精密度(略)2.3藥代動力學Tmax, Cmax采用實測值，以消除相血藥濃度對數(shù)與對應點時間的線性回歸求算苯磺酸氨氯地平的體內(nèi)消除半衰期，采用梯形法計算AUC（0-120 h）,  AUC(0-), 所得的兩制劑的主要藥代動力學參數(shù)見表2.表

17、2分別口服苯磺酸氨氯地平兩制劑（10 mg）后的藥代動力學參數(shù)比較(略)2.4生物等效性的評價 兩種制劑中氨氯地平的AUC（0-120 h）, Cmax, Tmax和T1/2  ke無差異(表3). 進一步采用雙單側t檢驗和（12）置信區(qū)間法分析，AUC（0-120 h）, AUC(0-), Cmax均拒絕不等效假設(P<0.05，表4). 兩種分析方法表明，兩種制劑具有生物等效性.表318名受試者口服苯磺酸氨氯地平兩制劑后氨氯地平主要藥代動力學參數(shù)方差分析結果（略）表418名受試者口服苯磺酸氨氯地平兩制劑后氨氯地平主要藥代動力學參數(shù)雙單側t檢驗（12）90%置信區(qū)間檢驗結果（

18、略）3討論國內(nèi)外關于氨氯地平含量測定的方法多采用HPLCUV，但其靈敏度較低，而本研究采用的液相色譜質譜聯(lián)用法檢測的線性范圍達到0.216.0 g/L. 其具有高度的檢驗靈敏性，操作簡便，可確保測定血漿中的微量氨氯地平濃度的準確性和可靠性.在流動相的選擇上，選用乙腈水甲酸，甲酸為有機酸，可增加氨氯地平的溶解.從氨氯地平血藥濃度的測定結果可見，18例受試者服用受試制劑和參比制劑后，兩組之間各參數(shù)間均無顯著性差異，說明兩種苯磺酸氨氯地平片在18例健康受試者體內(nèi)的處置情況較為相似. 從兩種苯磺酸氨氯地平片的生物等效性分析結果可見，兩種苯磺酸氨氯地平片的Tmax（實測值）、Cmax（實測值）和以梯形法求得的AUC（0-120 h）間的配對雙單側t檢驗和采用（12）置信區(qū)間法分析，結果均表明，兩種苯磺酸氨氯地平片在人體內(nèi)具有生物等效性，受試制劑相對于參比制劑的相對生物利用度為（98.6±23.3）%，兩種制劑在人體內(nèi)具有生物等效性.【參考文獻】1Meredith PA, Eilliott HL. Clinical pharmacokinetics of amlodipine J. ClinPharm, 1992,22(1):22-31.2文愛東，黃熙，蔣永培，等. 心力衰竭對地高