藥敏紙片的制備

1、32.2.2配制方法A.按抗菌藥物原液中藥物百分含量的要求，計算出純抗菌藥物的重量，方法是：抗菌藥物終濃度終體積。例：要配制mg/mL的慶大霉素毫升，所需要的純抗菌藥物質量為mgB.根據純抗菌藥物的重量和抗菌藥物原粉的百分比計算出所需抗菌藥物原粉的重量，方法是：純抗菌藥物的質量抗菌藥物原粉的百分含量。如:某慶大霉素原粉的含水量為4.19，則需要慶大霉素原粉的質量為64000（14.19）6.68104mg=66.8mg=0.0668gC.各種抗菌藥物按上述表進行溶解后定容。D.無菌條件下過濾，4保存?zhèn)溆谩?.3藥敏紙片的制備2.3.1空白紙片的制備用打孔機將制作直徑為6毫米左右的圓形濾紙，按5

2、0張一份，將制作好的濾紙分裝到小西林瓶里，用牛皮紙封瓶口進行高壓（121，15min）,烘干備用。2.3.2抗菌藥紙片的制備不同細菌對不同抗菌藥紙片的藥物含量要求標準菌種抗微生物藥紙片含藥量（mg）腸桿菌科氨芐西林10美洛西林75哌拉西林100替卡西林75頭孢唑啉30頭孢噻吩30慶大霉素10阿米卡星30卡那霉素30奈替米星30鏈霉素10四環(huán)素30多西環(huán)素304米諾環(huán)素30環(huán)丙沙星或左氧氟沙星5吉米沙星5諾氟沙星10氧氟沙星5西諾沙星100奈啶酸30磺胺藥250或300甲氧芐啶5A.根據不同藥物藥敏紙片的藥物含量要求，計算出50片藥敏紙片需要的藥物總含量，方法是：每張藥敏紙片的含藥量。如：制備一

3、份（片）含藥量為mg的慶大霉素，所需的抗菌藥物總質量為5mgB.藥物總含量除以抗菌藥物原液的濃度，得出50片藥敏紙片需要的抗菌藥物原液的總體積，抗菌藥物總質量抗菌藥物原液濃度。如：制備一份慶大霉素藥敏紙片所需的抗菌藥物原液的體積是5390625m即390.625mC.在無菌條件下，將各抗菌原液加入裝有紙片的小西林瓶中，用紙密封瓶口。D.置西林瓶37烘箱，將含藥物的紙片烘干。E.在無菌條件下，取一片烘干后的藥敏紙片加入到滅菌的肉湯中，檢查是否有細菌污染，并用西林瓶蓋將西林瓶密封，并置4保存。F.16小時后觀察是否有細菌污染，將有污染的藥敏紙片剔除，并重新再做；無污染的可用作紙片擴散法。3.注意事

4、項配抗菌藥物原液前要清楚抗菌藥物原粉的百分含量、批號和生產廠家。配制抗菌藥物原液時，可能會遇到抗菌藥物難溶的現象，這就要求用相應的助溶劑溶解?？咕幬镌旱慕K體積要用容量瓶定容。單位的換算（如強力霉素，含量887IU/mg，計算配制mg/mL的強力霉素毫升，需要多少克強力霉素原粉？）抗生素的效價通常以重量或國際單位（IU)來表示。青霉鈉1mg=1667IU或1IU0.6mg5青霉素鉀1mg=1559IU或1IU0.625mg制霉菌素1mg=3700IU其他抗生素多以重量為單位或1mg=1000IU抗菌藥物原液的終濃度可增大到5120mg/mL，這可縮減加入紙片中的抗菌藥物原液的體積。根據標準，

5、有時要求紙片的抗菌藥物含量較低，加入的抗菌藥物原液的量過少，不足以將50片紙片全部潤濕時，應將抗菌藥物原液用相應的滅菌PBS稀釋到0.5mL，混勻后再加入西林瓶內。制作紙片時，要多做幾份進行高壓，以備試驗失敗重做時，節(jié)約時間。藥敏紙片在37烘干，可能需要一到兩天的時間，切勿將紙片放入高溫中烘干，以防藥物失效。密封紙片后，可放入4冰箱保存或置陰暗干燥處保存，切勿受潮。二.藥敏試驗方法常用的藥物敏感試驗有紙片法，試管法、挖洞法、挖溝法、瓊脂稀釋法和泡沫塑料片法，紙片法是生產中常用的藥敏試驗方法，具有簡便、易行、出結果快的特點，適合于基層實驗室開展。1材料普通瓊脂、營養(yǎng)肉湯、藥敏紙片（自制）、滅菌試

6、管、滅菌棉拭和鑷子、被試細菌、滅菌生理鹽水2方法A.挑取單菌落接種于3mL營養(yǎng)肉湯中，37培養(yǎng)16小時。B.用無菌生理鹽水將培養(yǎng)好的菌液做1:20稀釋。C.用無菌棉拭蘸取稀釋過的菌液，在試管壁上擠去多余液體，涂于營養(yǎng)瓊脂表面，每次旋轉平板60度，共涂3次，使整個平板涂布均勻，分別涂布兩塊平板。D.平板放置35分鐘后，用無菌鑷子取藥敏紙片，貼于一平板表面，并輕壓一下紙片，使6其貼平，紙片間相距3mm左右。E.于另一平板上，平均劃分為6個區(qū)域，并在每個區(qū)域中貼同樣的藥敏紙片。F.37培養(yǎng)1618小時，用尺子量取抑菌圈的直徑3次，計算其平均值即為試驗結果。另一方面，量取貼有同樣紙片的平板上的抑菌圈的

7、直徑，看直徑大小是否一致，檢查所做的藥敏紙片的含藥量是否一致。3結果判斷結果判定可參照以下標準抗微生物藥抑菌圈直徑（mm）耐藥中介敏感氨芐西林1314-1617美洛西林1718-2021哌拉西林1718-2021替卡西林1415-1920頭孢唑啉1415-1718頭孢噻吩1415-1718慶大霉素1213-1415阿米卡星1415-1617卡那霉素1314-1718奈替米星1213-1415鏈霉素1112-1415四環(huán)素1415-1819多西環(huán)素1213-1516米諾環(huán)素1415-1819左氧氟沙星1314-1617環(huán)丙沙星1516-2021吉米沙星1516-1920諾氟沙星1213-1617氧氟沙星1213-1516西諾沙星1415-18197奈啶酸1314-1819磺胺藥1213-1617甲氧芐啶1011-15164.注意事項嚴格控制細菌培養(yǎng)的時間，以防過多的細菌而影響試驗結果的可靠性。涂布已