第十一章經(jīng)典液相色譜法與檢測(cè)技術(shù)

1、全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌1第十一章第十一章 經(jīng)典液相色譜法與檢測(cè)技術(shù)經(jīng)典液相色譜法與檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)目的 知識(shí)要求知識(shí)要求 能力要求能力要求 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)目的2u通過學(xué)習(xí)色譜法基本概念、基本類型、分離機(jī)通過學(xué)習(xí)色譜法基本概念、基本類型、分離機(jī)制制以以及各種經(jīng)典液相色譜法的固定相、流動(dòng)相及其選擇及各種經(jīng)典液相色譜法的固定相、

2、流動(dòng)相及其選擇等相關(guān)知識(shí)等相關(guān)知識(shí)。u了解色譜法的特點(diǎn)及其應(yīng)用，會(huì)利用吸附色譜、分了解色譜法的特點(diǎn)及其應(yīng)用，會(huì)利用吸附色譜、分配色譜等經(jīng)典柱色譜法和薄層色譜法對(duì)試樣進(jìn)行分配色譜等經(jīng)典柱色譜法和薄層色譜法對(duì)試樣進(jìn)行分離分析。為氣相色譜法和高效液相色譜法的學(xué)習(xí)奠離分析。為氣相色譜法和高效液相色譜法的學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為定基礎(chǔ)，同時(shí)也為學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)藥物分析、天然藥物化學(xué)、藥物分析、天然藥物化學(xué)、藥物分離檢測(cè)技術(shù)等專業(yè)課程藥物分離檢測(cè)技術(shù)等專業(yè)課程奠定奠定基礎(chǔ)?；A(chǔ)。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李

3、維斌李維斌知識(shí)要求知識(shí)要求31.1.掌握色譜法的基本概念，吸附色譜法和分配色譜法掌握色譜法的基本概念，吸附色譜法和分配色譜法的分離機(jī)制，薄層色譜法的基本原理及其應(yīng)用。的分離機(jī)制，薄層色譜法的基本原理及其應(yīng)用。 2 2. .熟悉色譜法的分類，離子交換色譜法和凝膠色譜法熟悉色譜法的分類，離子交換色譜法和凝膠色譜法的分離機(jī)制，各種經(jīng)典的柱色譜法基本原理及其應(yīng)的分離機(jī)制，各種經(jīng)典的柱色譜法基本原理及其應(yīng)用。用。 3 3. .了解色譜法的由來和發(fā)展。了解色譜法的由來和發(fā)展。 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝

4、慶娟 李維斌李維斌能力要求能力要求u熟練掌握薄層色譜法、柱色譜法的操作技術(shù)，熟練掌握薄層色譜法、柱色譜法的操作技術(shù)，學(xué)會(huì)應(yīng)用薄層色譜法等對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定。學(xué)會(huì)應(yīng)用薄層色譜法等對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定。 4 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌案例導(dǎo)入案例導(dǎo)入為什么采用這種方法可以使得這些性質(zhì)相似的物質(zhì)得以分離？固定相（布或紙片）和不斷加入的溶液對(duì)組分的分離起到什么作用，兩者如何選擇？分離后的各組分怎樣定性和準(zhǔn)確檢出？5古羅馬時(shí)代人們將一滴含有混合色素的溶液滴到一塊布(或紙片)上，隨著

5、溶液的擴(kuò)展，在布（或紙片）上會(huì)呈現(xiàn)一個(gè)一個(gè)的同心圓環(huán)，人們通過觀察這些同心圓環(huán)的差異來分析染料和色素。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述 u色譜法（色譜法（chromatographychromatography）是一種根據(jù)物質(zhì)的物理或物）是一種根據(jù)物質(zhì)的物理或物理化學(xué)性質(zhì)不同而進(jìn)行分離分析的方法理化學(xué)性質(zhì)不同而進(jìn)行分離分析的方法。 6色譜法和其他方法相比較具有下列特點(diǎn)：色譜法和其他方法相比較具有下列特點(diǎn)：1. 1. 分離效能高分離效能高2. 2. 靈敏度高靈敏度高3.

6、 3. 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌色譜法色譜法起源起源真正意義真正意義的色譜實(shí)驗(yàn)的色譜實(shí)驗(yàn)u色譜法的創(chuàng)始人是俄國(guó)植物學(xué)家色譜法的創(chuàng)始人是俄國(guó)植物學(xué)家TsweetTsweet。 一、色譜法產(chǎn)生與發(fā)展流動(dòng)相流動(dòng)相固定相固定相被分離后，被分離后，代表了不同代表了不同組分的色帶組分的色帶色譜柱色譜柱第一節(jié) 概 述 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌色譜法

7、色譜法發(fā)展發(fā)展u柱色譜柱色譜20世紀(jì)初；世紀(jì)初；趨勢(shì)：新型固定相和檢測(cè)器及各種檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)用趨勢(shì)：新型固定相和檢測(cè)器及各種檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)用u薄層、紙色譜薄層、紙色譜20世紀(jì)世紀(jì)3040年代；年代；u氣相色譜氣相色譜20世紀(jì)世紀(jì)5060年代；年代；u高效液相色譜高效液相色譜20世紀(jì)世紀(jì)70年代；年代；u超臨界流體色譜法超臨界流體色譜法 u毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳法20世紀(jì)世紀(jì)80年代初年代初第一節(jié)概 述 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述（一）按兩相的分子聚集狀態(tài)分類（一）按

8、兩相的分子聚集狀態(tài)分類 9色譜總稱色譜總稱流動(dòng)相流動(dòng)相固定相固定相色譜名稱色譜名稱液相色譜法液相色譜法（LCLC）液體液體固體固體液液固色譜法（固色譜法（LSCLSC）液體液體液液液色譜法（液色譜法（LLCLLC）化學(xué)鍵合相化學(xué)鍵合相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法（BPCBPC）氣相色譜法氣相色譜法（GCGC）氣體氣體固體固體氣氣固色譜法（固色譜法（GSCGSC）液體液體氣氣液色譜法（液色譜法（GLCGLC）超臨界流體超臨界流體色譜法（色譜法（SFCSFC）超臨界流體超臨界流體固體或化學(xué)鍵合相固體或化學(xué)鍵合相二、色譜法的分類二、色譜法的分類 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)

9、衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述10（二）按操作形式分類（二）按操作形式分類 色譜名色譜名稱稱柱色譜（柱色譜（CC）平面色譜平面色譜填充柱色譜法填充柱色譜法毛細(xì)管柱色譜法毛細(xì)管柱色譜法 薄層色譜法（薄層色譜法（TLC）紙色譜法（紙色譜法（PC）固定相固定相形式形式填充柱填充柱毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱薄層板薄層板紙紙?jiān)诓ＡЩ蚪饘俟茉诓ＡЩ蚪饘俟軆?nèi)填充或涂覆滿內(nèi)填充或涂覆滿固定相固定相在彈性石英或玻在彈性石英或玻璃毛細(xì)管內(nèi)壁覆璃毛細(xì)管內(nèi)壁覆有吸附劑薄層或有吸附劑薄層或固定液固定液在玻璃或金屬板上涂在玻璃或金屬板上涂布吸附劑等固定

10、相布吸附劑等固定相具有多孔和強(qiáng)滲具有多孔和強(qiáng)滲透能力的濾紙或透能力的濾紙或纖維素薄膜纖維素薄膜色譜過色譜過程程流動(dòng)相由柱頭向柱尾不間斷沖洗流動(dòng)相由柱頭向柱尾不間斷沖洗流動(dòng)相從板或紙的一端向另一端擴(kuò)展流動(dòng)相從板或紙的一端向另一端擴(kuò)展二、色譜法的分類二、色譜法的分類 第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述11（三）按色譜過程的分離機(jī)制分類（三）按色譜過程的分離機(jī)制分類 u吸附色譜法（吸附色譜法（AC）u分配色譜法（分配色譜法（DC）u離子交換色譜法（離子交換色譜法（

11、IEC）u凝膠色譜法（凝膠色譜法（SEC） u二、色譜法的分類二、色譜法的分類 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌色譜法分類小結(jié)12全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌13課堂互動(dòng)課堂互動(dòng) 請(qǐng)您闡述色譜法的分類方法，及各種色譜請(qǐng)您闡述色譜法的分類方法，及各種色譜法的特點(diǎn)？法的特點(diǎn)？第一節(jié)概 述第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二

12、五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述（一）分配系數(shù)和容量因子（一）分配系數(shù)和容量因子 u1. 分配系數(shù)（分配系數(shù)（K） 14u2. 容量因子（容量因子（k） )msCCK（組分在流動(dòng)相中的濃度（組分在固定相中的濃度)msmmk（組分在流動(dòng)相中的質(zhì)量（組分在固定相中的質(zhì)量三、色譜法的基本原理三、色譜法的基本原理第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述15u3. 分配系數(shù)與容量因子的關(guān)系分配系數(shù)與容量因子的關(guān)系=

13、ssssmmmmmc VVKKmc VV 稱為相比，在一定色譜條件下為定值；稱為相比，在一定色譜條件下為定值； Vm 為柱中流為柱中流動(dòng)相體積（近似等于第十二章中提及的死體積）；動(dòng)相體積（近似等于第十二章中提及的死體積）；Vs 是柱中是柱中固定相（或固定液）的體積；固定相（或固定液）的體積；值隨值隨 和和K 的變化而變化。的變化而變化。=msVV（一）分配系數(shù)和容量因子（一）分配系數(shù)和容量因子 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述分配系數(shù)（或容量因子）越小，組分的遷移速度

14、越快，分配系數(shù)（或容量因子）越小，組分的遷移速度越快，保留時(shí)間越短，即先流出色譜柱；反之亦然。保留時(shí)間越短，即先流出色譜柱；反之亦然。 分配系數(shù)（或容量因子）不等是組分分離的前提。分配系數(shù)（或容量因子）不等是組分分離的前提。 16u4.4.分配系數(shù)、容量因子與保留值的關(guān)系分配系數(shù)、容量因子與保留值的關(guān)系 課堂互動(dòng)課堂互動(dòng)請(qǐng)您分析：組分的分配系數(shù)請(qǐng)您分析：組分的分配系數(shù) ，與組分在固定相，與組分在固定相中的停留時(shí)間之間存在什么關(guān)系？中的停留時(shí)間之間存在什么關(guān)系？第一節(jié)概 述（一）分配系數(shù)和容量因子（一）分配系數(shù)和容量因子 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)

15、劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（二）色譜過程的分離機(jī)制（二）色譜過程的分離機(jī)制u組分不斷被吸附、解吸附，如組分不斷被吸附、解吸附，如此反復(fù)多次的過程。此反復(fù)多次的過程。u組分的吸附平衡常數(shù)越大，越組分的吸附平衡常數(shù)越大，越容易被吸附，遷移速度就越慢容易被吸附，遷移速度就越慢。 u吸附平衡常數(shù)吸附平衡常數(shù)17)()msCCK組分在流動(dòng)相中的濃度度（組分在吸附劑表面的濃圖11-2 吸附色譜分離機(jī)制示意圖吸附劑 組分分子 流動(dòng)相分子被解吸的組分分子被解吸的流動(dòng)相分子1. 1. 吸附色譜法分離機(jī)制吸附色譜法分離機(jī)制第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)

16、高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（二）色譜過程的分離機(jī)制（二）色譜過程的分離機(jī)制18u流動(dòng)相攜帶樣品流經(jīng)固定相時(shí)，流動(dòng)相攜帶樣品流經(jīng)固定相時(shí)，各組分在兩相間不斷地進(jìn)行溶解、各組分在兩相間不斷地進(jìn)行溶解、萃取，再溶解、再萃取的過程萃取，再溶解、再萃取的過程u分配系數(shù)大的組分移動(dòng)速度慢，分配系數(shù)大的組分移動(dòng)速度慢，分配系數(shù)小的組分移動(dòng)速度快。分配系數(shù)小的組分移動(dòng)速度快。 進(jìn)入固定相的組分分子進(jìn)入流動(dòng)相的組分分子固定相2.2.分配色譜法分離機(jī)制分配色譜法分離機(jī)制 圖11-3 分配色譜分離機(jī)制示意圖第一節(jié)概 述全國(guó)高職

17、高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（二）色譜過程的分離機(jī)制（二）色譜過程的分離機(jī)制3. 3. 離子交換色譜法分離機(jī)制離子交換色譜法分離機(jī)制19u被分離的離子隨流動(dòng)相流經(jīng)離被分離的離子隨流動(dòng)相流經(jīng)離子交換樹脂時(shí)，與離子交換樹脂子交換樹脂時(shí)，與離子交換樹脂上可被交換的離子連續(xù)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)上可被交換的離子連續(xù)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)交換，交換，u交換能力弱的離子，遷移速度交換能力弱的離子，遷移速度快，保留時(shí)間短，先流出色譜柱?？?，保留時(shí)間短，先流出色譜柱。 離子交換劑 固定離子組分離子 可交換陽(yáng)離子 圖11-4 陽(yáng)

18、離子交換色譜分離機(jī)制示意圖第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第一節(jié)概 述u以陽(yáng)離子為例，離子交換反應(yīng)的通式用下式表示：以陽(yáng)離子為例，離子交換反應(yīng)的通式用下式表示：20u選擇性系數(shù)選擇性系數(shù)K KA/BA/B 用于衡量離子對(duì)樹脂的親和能力。用于衡量離子對(duì)樹脂的親和能力。uK KA/BA/B越大（越大（K KA/BA/B11），說明），說明A A的交換能力大，保留時(shí)間的交換能力大，保留時(shí)間長(zhǎng)，則長(zhǎng)，則A A比比B B后流出色譜柱；反之亦然。后流出色譜柱；反之亦然。 /ABR

19、ABKRBA u離子交換達(dá)到平衡時(shí)以濃度表示的平衡常數(shù)為：離子交換達(dá)到平衡時(shí)以濃度表示的平衡常數(shù)為：3. 3. 離子交換色譜法分離機(jī)制離子交換色譜法分離機(jī)制全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（二）色譜過程的分離機(jī)制（二）色譜過程的分離機(jī)制4. 4. 凝膠色譜法分離機(jī)制凝膠色譜法分離機(jī)制21凝膠色譜分離機(jī)制示意圖凝膠色譜分離機(jī)制示意圖O：凝膠顆粒：凝膠顆粒o：大分子組分：大分子組分：小分子組分：小分子組分u組分的分離取決于凝膠顆粒組分的分離取決于凝膠顆粒的孔徑大小和被分離物質(zhì)分的孔徑

20、大小和被分離物質(zhì)分子的大小。子的大小。u出柱順序：首先是大分子，其出柱順序：首先是大分子，其次是中等大小的分子，最后是次是中等大小的分子，最后是小分子。小分子。第一節(jié)概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌1. 角度不同，對(duì)色譜法的分類不同。角度不同，對(duì)色譜法的分類不同。2. 色譜法中色譜法中 分配系數(shù)（或容量因子）不等是組分分分配系數(shù)（或容量因子）不等是組分分離的前提。中離的前提。中 分配系數(shù)（或容量因子）分配系數(shù)（或容量因子） 越大，組越大，組分在固定相中的保留時(shí)間越長(zhǎng)；反之亦

21、然。分在固定相中的保留時(shí)間越長(zhǎng)；反之亦然。3. 凝膠色譜法中分子的尺寸（分子量）越小在固定凝膠色譜法中分子的尺寸（分子量）越小在固定相中的保留時(shí)間越長(zhǎng)；反之亦然。相中的保留時(shí)間越長(zhǎng)；反之亦然。點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累22第一節(jié) 概 述全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌23第二節(jié) 柱色譜法柱色譜法是指將固定相填覆在玻柱色譜法是指將固定相填覆在玻璃管或不銹鋼管柱中的色譜法。璃管或不銹鋼管柱中的色譜法。經(jīng)典柱色譜法的流動(dòng)相是液體，經(jīng)典柱色譜法的流動(dòng)相是液體，固定相可以是吸附劑、液體，也可固定相可

22、以是吸附劑、液體，也可以是離子交換樹脂、凝膠等。以是離子交換樹脂、凝膠等。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法24第二節(jié) 柱色譜法固定相固定相 ：吸附劑，：吸附劑，是一些多孔性微粒物質(zhì)，具有較是一些多孔性微粒物質(zhì)，具有較大的比表面積和多個(gè)吸附中心，其吸附性能取決于吸大的比表面積和多個(gè)吸附中心，其吸附性能取決于吸附中心的多少及其吸附能力的大小。附中心的多少及其吸附能力的大小。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、聚酰胺、大孔吸附常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、

23、聚酰胺、大孔吸附樹脂、活性炭等。樹脂、活性炭等。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法1.固定相固定相 （1）硅膠（）硅膠（SiO2XH2O）25硅膠的吸附活性與含水量有關(guān)。硅膠的吸附活性與含水量有關(guān)。 第二節(jié) 柱色譜法硅膠含水量（硅膠含水量（%）活性級(jí)數(shù)活性級(jí)數(shù)活性活性氧化鋁含水量（氧化鋁含水量（%）0高低05315625103815表表11-3硅膠和氧化鋁的活性與含水量的關(guān)系硅膠和氧化鋁的活性與含水量的關(guān)系 硅膠呈微酸性，主要用于分離酸性和中

24、性化合物。硅膠呈微酸性，主要用于分離酸性和中性化合物。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌硅膠活性級(jí)數(shù)和活性及吸附能力間的關(guān)系硅膠活性級(jí)數(shù)和活性及吸附能力間的關(guān)系： 硅膠的活性級(jí)數(shù)是根據(jù)其含水量高低確定硅膠的活性級(jí)數(shù)是根據(jù)其含水量高低確定。 硅膠的活性是根據(jù)其吸附能力強(qiáng)弱確定硅膠的活性是根據(jù)其吸附能力強(qiáng)弱確定。 硅膠的含水量越高，活性級(jí)數(shù)越高，越多的硅膠的含水量越高，活性級(jí)數(shù)越高，越多的硅醇基因?yàn)樾纬伤瞎璐蓟沟霉枘z吸硅醇基因?yàn)樾纬伤瞎璐蓟?，而使得硅膠吸附其他物質(zhì)的能力下降，

25、即硅膠的吸附性能附其他物質(zhì)的能力下降，即硅膠的吸附性能下降，活性低下降，活性低。26難點(diǎn)釋疑難點(diǎn)釋疑第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌27（2 2）氧化鋁：吸附能力略高于硅膠，分離能力強(qiáng)，活）氧化鋁：吸附能力略高于硅膠，分離能力強(qiáng)，活性可以控制。氧化鋁的吸附活性與其含水量密切相關(guān)。性可以控制。氧化鋁的吸附活性與其含水量密切相關(guān)。一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法1. 1. 固定相固定相氧化鋁可分為酸性、中性、和堿性三種，其中中性氧化鋁可分為酸性、中性、和堿性三

26、種，其中中性氧化鋁應(yīng)用廣泛。氧化鋁應(yīng)用廣泛。第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌酸性氧化鋁（酸性氧化鋁（pH45）用于分離酸性化合物以及對(duì)酸）用于分離酸性化合物以及對(duì)酸穩(wěn)定的中性化合物。穩(wěn)定的中性化合物。堿性氧化鋁（堿性氧化鋁（pH910）用于分離堿性和中性化合物。）用于分離堿性和中性化合物。中性氧化鋁（中性氧化鋁（pH7.5）凡是酸性、堿性氧化鋁上能分）凡是酸性、堿性氧化鋁上能分離的化合物，中性氧化鋁都能分離。離的化合物，中性氧化鋁都能分離。28一、液一、液固吸附柱

27、色譜法固吸附柱色譜法（2 2）氧化鋁）氧化鋁第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（3）聚酰胺：是一類由酰胺聚合而成的高分子化合物，）聚酰胺：是一類由酰胺聚合而成的高分子化合物，常用的是聚己內(nèi)酰胺。常用的是聚己內(nèi)酰胺。 聚酰胺主要通過分子中的酰氨基或羰基與化合物質(zhì)子聚酰胺主要通過分子中的酰氨基或羰基與化合物質(zhì)子給予體形成氫鍵而對(duì)被分離組分產(chǎn)生吸附。給予體形成氫鍵而對(duì)被分離組分產(chǎn)生吸附。聚酰胺在天然藥物有效成分的分離方面應(yīng)用廣泛。聚酰胺在天然藥物有效成分的分離方面應(yīng)用廣泛

28、。29一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法1. 1. 固定相固定相第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（4）大孔吸附樹脂：是一種不含交換基團(tuán)，但具有大孔）大孔吸附樹脂：是一種不含交換基團(tuán)，但具有大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。通過范德華引力或產(chǎn)生氫鍵對(duì)被分離物質(zhì)產(chǎn)生吸附。通過范德華引力或產(chǎn)生氫鍵對(duì)被分離物質(zhì)產(chǎn)生吸附。 大孔吸附樹脂的選擇性由多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)所決定。大孔吸附樹脂的選擇性由多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)所決定。大孔吸附樹脂主要用于水溶性化合物的分離及

29、純化。大孔吸附樹脂主要用于水溶性化合物的分離及純化。30一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法1.1.固定相固定相第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法2. 被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)31不同類型的化合物極性由小到大的順序?yàn)椋翰煌愋偷幕衔飿O性由小到大的順序?yàn)椋和闊N烯烴醚類硝基化合物酯類酮類醛類烷烴烯烴醚類硝基化合物酯類酮類醛類硫醇胺類醇類酚類羧酸類硫醇胺類醇類酚類羧酸類一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生

30、部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法u判斷物質(zhì)極性強(qiáng)弱時(shí)，可以參考以下規(guī)律：判斷物質(zhì)極性強(qiáng)弱時(shí)，可以參考以下規(guī)律：基本母核相同，分子中極性基團(tuán)的極性越大、極基本母核相同，分子中極性基團(tuán)的極性越大、極性基團(tuán)越多，則分子的極性就越大；性基團(tuán)越多，則分子的極性就越大；分子中雙鍵越多、共軛雙鍵鏈越長(zhǎng)，極性越大；分子中雙鍵越多、共軛雙鍵鏈越長(zhǎng)，極性越大；分子式相同，能形成分子內(nèi)氫鍵的分子極性要弱；分子式相同，能形成分子內(nèi)氫鍵的分子極性要弱；在同系物中，分子量越大，分子的極性越小。在同系物中，分子量越大，

31、分子的極性越小。32 2. 2. 被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法3. 3. 流動(dòng)相性質(zhì)流動(dòng)相性質(zhì)常用溶劑的極性由小到大的順序?yàn)椋撼Ｓ萌軇┑臉O性由小到大的順序?yàn)椋菏兔循h(huán)己烷四氯化碳苯甲苯乙醚三氯石油醚環(huán)己烷四氯化碳苯甲苯乙醚三氯甲烷乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水甲烷乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水33一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)

32、衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法（1）吸附劑的選擇吸附劑的選擇：分離極性大的物質(zhì)，一般選用吸：分離極性大的物質(zhì)，一般選用吸附活性小的吸附劑；附活性小的吸附劑；反之亦然反之亦然。即使得吸附劑與被分。即使得吸附劑與被分離物質(zhì)間存在適宜強(qiáng)度的吸附作用力。離物質(zhì)間存在適宜強(qiáng)度的吸附作用力。344. 吸附劑和流動(dòng)相的選擇吸附劑和流動(dòng)相的選擇一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法（2 2）流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇： “ “相似相溶相似相溶”原則進(jìn)行選擇。原則進(jìn)行選擇。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部

33、“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法35被測(cè)物質(zhì)的極性、吸附劑活性和流動(dòng)相極性之間的關(guān)系示意圖被測(cè)物質(zhì)的極性、吸附劑活性和流動(dòng)相極性之間的關(guān)系示意圖 一、液一、液固吸附柱色譜法固吸附柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌一般用親水性吸附劑（如：硅膠）作色譜分離時(shí)，一般用親水性吸附劑（如：硅膠）作色譜分離時(shí)，若分離物極性較小，應(yīng)選擇何吸附劑和洗脫劑？若分離物極性較小，應(yīng)選擇何吸附劑和洗脫劑？分離物極性小，形成

34、氫鍵的能力弱，所以宜選用分離物極性小，形成氫鍵的能力弱，所以宜選用吸附活性大（含水量低即活性級(jí)數(shù)低）的吸附劑，吸附活性大（含水量低即活性級(jí)數(shù)低）的吸附劑，這樣分離物和吸附劑間才能形成一定強(qiáng)度的氫鍵，這樣分離物和吸附劑間才能形成一定強(qiáng)度的氫鍵，使固定相對(duì)其產(chǎn)生適宜的吸附作用；被分離物極使固定相對(duì)其產(chǎn)生適宜的吸附作用；被分離物極性小，根據(jù)性小，根據(jù)“相似相溶相似相溶”原則宜選用極性小的洗原則宜選用極性小的洗脫劑。脫劑。36案案 例例 分分 析析第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維

35、斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法二、液二、液液分配柱色譜法液分配柱色譜法1. 固定相固定相 由載體及涂漬或鍵合在載體表面的固定液組成。由載體及涂漬或鍵合在載體表面的固定液組成。 37載體載體是一種惰性物質(zhì)，主要起負(fù)載或支撐固定液的作用。是一種惰性物質(zhì)，主要起負(fù)載或支撐固定液的作用。固定液固定液正相色譜：強(qiáng)極性溶劑，如水、甲醇等。正相色譜：強(qiáng)極性溶劑，如水、甲醇等。反相色譜：非極性或弱極性溶劑，如液體石蠟等。反相色譜：非極性或弱極性溶劑，如液體石蠟等。 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二

36、節(jié) 柱色譜法2. 流動(dòng)相流動(dòng)相 正相色譜正相色譜：極性小于固定相的醇類、酮類、酯類、：極性小于固定相的醇類、酮類、酯類、鹵代烷、苯或其混合物。鹵代烷、苯或其混合物。 反相色譜反相色譜：水、稀醇等極性溶劑。：水、稀醇等極性溶劑。u應(yīng)用應(yīng)用 各類化合物的分離，特別是親水性物質(zhì)。各類化合物的分離，特別是親水性物質(zhì)。 38二、液二、液液分配柱色譜法液分配柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌 分配色譜分離時(shí)，已知某混合物中分配色譜分離時(shí)，已知某混合物中A、B二二組分在兩相中的分配系數(shù)組

37、分在兩相中的分配系數(shù) 分別為分別為315、450，請(qǐng)您分析，進(jìn)行柱色譜分離時(shí)二組分的出請(qǐng)您分析，進(jìn)行柱色譜分離時(shí)二組分的出柱順序。柱順序。39課課 堂堂 互互 動(dòng)動(dòng)二、液二、液液分配柱色譜法液分配柱色譜法第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法u1. 固定相離子交換樹脂 40交聯(lián)度交聯(lián)度：離子交換樹脂中所含交聯(lián)劑的量。：離子交換樹脂中所含交聯(lián)劑的量。用于衡量離子交換樹脂的選擇性，交聯(lián)度大，樹脂的網(wǎng)用于衡量離子交換樹脂的選擇性，交聯(lián)度大，樹脂的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)緊密，

38、網(wǎng)眼小，選擇性好。狀結(jié)構(gòu)緊密，網(wǎng)眼小，選擇性好。交換容量交換容量：實(shí)驗(yàn)條件下，每克干樹脂真正參加交換的活：實(shí)驗(yàn)條件下，每克干樹脂真正參加交換的活性基團(tuán)數(shù)。用于衡量離子交換樹脂的交換能力，交換容性基團(tuán)數(shù)。用于衡量離子交換樹脂的交換能力，交換容量大，樹脂的交換能力強(qiáng)。量大，樹脂的交換能力強(qiáng)。 三、離子交換柱色譜法三、離子交換柱色譜法 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法2. 流動(dòng)相流動(dòng)相 水為溶劑的緩沖溶液。水為溶劑的緩沖溶液。 u應(yīng)用應(yīng)用 去離子水的制備，天然藥物化學(xué)成

39、分的分離。去離子水的制備，天然藥物化學(xué)成分的分離。 41三、離子交換柱色譜法三、離子交換柱色譜法 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法四、凝膠柱色譜法1. 固定相固定相選擇時(shí)應(yīng)使試樣的相對(duì)分子量落入凝膠的相對(duì)分子質(zhì)量范圍內(nèi)。42（1 1） 排斥極限排斥極限：化合物的相對(duì)分子質(zhì)量達(dá)到某一數(shù)：化合物的相對(duì)分子質(zhì)量達(dá)到某一數(shù)值后就不能滲透進(jìn)入凝膠的任何孔穴，這一數(shù)值稱值后就不能滲透進(jìn)入凝膠的任何孔穴，這一數(shù)值稱。（2 2）全滲透點(diǎn)全滲透點(diǎn)：化合物的相對(duì)分子質(zhì)量小于某一數(shù)：化

40、合物的相對(duì)分子質(zhì)量小于某一數(shù)值后就能進(jìn)入凝膠的所有孔穴，則這一數(shù)值稱值后就能進(jìn)入凝膠的所有孔穴，則這一數(shù)值稱。（3 3）相對(duì)分子質(zhì)量范圍相對(duì)分子質(zhì)量范圍：排斥極限與全滲透點(diǎn)之間：排斥極限與全滲透點(diǎn)之間的相對(duì)分子質(zhì)量范圍稱為的相對(duì)分子質(zhì)量范圍稱為。第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法u應(yīng)用應(yīng)用 天然藥物化學(xué)和生物化學(xué)的研究，水溶性高分子化合天然藥物化學(xué)和生物化學(xué)的研究，水溶性高分子化合物如蛋白制劑等的分析。物如蛋白制劑等的分析。 432.2.流動(dòng)相流動(dòng)相

41、 一般水溶性試樣選擇水溶液為流動(dòng)相，而非一般水溶性試樣選擇水溶液為流動(dòng)相，而非水溶性試樣則選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯等有機(jī)溶劑水溶性試樣則選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯等有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。為流動(dòng)相。 四、凝膠柱色譜法四、凝膠柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第二節(jié) 柱色譜法五、柱色譜法的應(yīng)用五、柱色譜法的應(yīng)用例如采用柱色譜法中的凝膠色譜法，以葡聚糖凝膠為固例如采用柱色譜法中的凝膠色譜法，以葡聚糖凝膠為固定相，定相，1mol/L的的NaCl為流動(dòng)相，可以將分子量存在差為流動(dòng)相，可以將

42、分子量存在差異的葡萄糖和淀粉進(jìn)行分離。異的葡萄糖和淀粉進(jìn)行分離。例如采用分配色譜法以硅膠為固定相，水飽和的乙酸乙例如采用分配色譜法以硅膠為固定相，水飽和的乙酸乙酯為流動(dòng)相，可以將洋地黃毒苷、羥基洋地黃毒苷、酯為流動(dòng)相，可以將洋地黃毒苷、羥基洋地黃毒苷、異羥基洋地黃毒苷三種單體進(jìn)行分離等。異羥基洋地黃毒苷三種單體進(jìn)行分離等。44全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累1. 硅膠（或氧化鋁）活性級(jí)數(shù)高，活性低，吸附能力弱。硅膠（或氧化鋁）活性級(jí)數(shù)高，活性低，吸附能力弱。2.

43、吸附柱色譜法：被分離組分與固定相間的吸附作用力適中；組吸附柱色譜法：被分離組分與固定相間的吸附作用力適中；組分與流動(dòng)相分與流動(dòng)相“相似相溶相似相溶”。3.分配柱色譜法：固定相與流動(dòng)相極性不同，且不互溶；適于各分配柱色譜法：固定相與流動(dòng)相極性不同，且不互溶；適于各類化合物分離，特別是親水性化合物分離類化合物分離，特別是親水性化合物分離4.離子交換柱色譜法：分子量較小的樣品宜選擇交聯(lián)度大的樹脂，離子交換柱色譜法：分子量較小的樣品宜選擇交聯(lián)度大的樹脂，分子量較大的樣品宜選擇交聯(lián)度小的樹脂；常選用水為溶劑的分子量較大的樣品宜選擇交聯(lián)度小的樹脂；常選用水為溶劑的緩沖溶液做流動(dòng)相。緩沖溶液做流動(dòng)相。5.凝

44、膠色譜法：樣品的分子量范圍落入凝膠的相對(duì)分子質(zhì)量范圍凝膠色譜法：樣品的分子量范圍落入凝膠的相對(duì)分子質(zhì)量范圍內(nèi)；常選用水溶劑或非水溶劑做流動(dòng)相內(nèi)；常選用水溶劑或非水溶劑做流動(dòng)相。45第二節(jié) 柱色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法一、基本原理一、基本原理（一）分離原理（一）分離原理 u薄層色譜法：將固定相（如：吸附劑）均勻地涂鋪在光薄層色譜法：將固定相（如：吸附劑）均勻地涂鋪在光潔的玻璃板、塑料板或金屬板上形成薄層，在薄層板上潔的玻璃板、塑料板或金屬板上形成薄層，

45、在薄層板上進(jìn)行分離分析的方法。進(jìn)行分離分析的方法。 u分離機(jī)制分離機(jī)制與吸附柱色譜的分離機(jī)制相似。與吸附柱色譜的分離機(jī)制相似。 46全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法（二）比移值與相對(duì)比移值（二）比移值與相對(duì)比移值 47比移值（比移值（Rf）：）： fR 原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離L0原原點(diǎn)點(diǎn)溶劑溶劑前沿前沿ABL1L2Rf的測(cè)量示意圖的測(cè)量示意圖 Rf可用范圍是可用范圍是0.20.8，最佳范圍是，最佳范圍是0.30.5。 全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生

46、部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法48相對(duì)比移值（相對(duì)比移值（Rr） Rr可以大于可以大于1，也可以小于，也可以小于1。 的距離原點(diǎn)到參考物斑點(diǎn)中心心的距離原點(diǎn)到樣品組分斑點(diǎn)中rR， L0原點(diǎn)原點(diǎn)溶劑前沿溶劑前沿ABL1L2Rf的測(cè)量示意圖的測(cè)量示意圖全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法491.已知已知A與參考物質(zhì)與參考物質(zhì)B的相對(duì)比移值為的相對(duì)比移值為1.2，

47、當(dāng)，當(dāng)B物質(zhì)物質(zhì)在一定色譜條件下，在某薄層板上展開后，斑點(diǎn)距在一定色譜條件下，在某薄層板上展開后，斑點(diǎn)距原點(diǎn)原點(diǎn)6cm，此時(shí)溶劑前沿到原點(diǎn)的距離為，此時(shí)溶劑前沿到原點(diǎn)的距離為18cm，若，若A也在此薄層板上同時(shí)展開。請(qǐng)分析也在此薄層板上同時(shí)展開。請(qǐng)分析A在薄層板的在薄層板的何位置，何位置，A物質(zhì)的比移值是多少？物質(zhì)的比移值是多少？2. 分別說明什么？分別說明什么？課堂互動(dòng)課堂互動(dòng)f=0Rf=1R第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法 二、二、吸附劑的

48、選擇吸附劑的選擇50與吸附柱色譜法所用的吸附劑相似，其主要區(qū)別在于與吸附柱色譜法所用的吸附劑相似，其主要區(qū)別在于薄層色譜法所用的吸附劑顆粒更細(xì)小。薄層色譜法所用的吸附劑顆粒更細(xì)小。 三、三、展開劑的選擇展開劑的選擇遵循遵循“相似相溶相似相溶”原則。原則。 薄層色譜中常用的溶劑按極性由弱到強(qiáng)的順序是：薄層色譜中常用的溶劑按極性由弱到強(qiáng)的順序是：石油醚環(huán)己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯石油醚環(huán)己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烷苯甲苯二氯甲烷三氯甲烷苯甲苯二氯甲烷三氯甲烷甲苯二氯甲烷三氯甲烷苯甲苯二氯甲烷三氯甲烷乙醚乙酸乙酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶水乙醚乙酸乙酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶水全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)

49、生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法511.在苯在苯-乙醇（乙醇（9?1）展開劑中，您知道苯、乙醇的作用嗎？）展開劑中，您知道苯、乙醇的作用嗎？2.吸附薄層色譜實(shí)驗(yàn)中以硅膠板為薄層板，環(huán)己烷為展開吸附薄層色譜實(shí)驗(yàn)中以硅膠板為薄層板，環(huán)己烷為展開劑，若某極性組分劑，若某極性組分 Rf=0 ，請(qǐng)分析應(yīng)如何調(diào)整展開劑的，請(qǐng)分析應(yīng)如何調(diào)整展開劑的極性？極性？課堂互動(dòng)課堂互動(dòng)全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶

50、娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法四、操作方法四、操作方法 薄層色譜法的操作可分為制板、點(diǎn)樣、展開、薄層色譜法的操作可分為制板、點(diǎn)樣、展開、顯色與檢視、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)和測(cè)定六個(gè)步驟。顯色與檢視、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)和測(cè)定六個(gè)步驟。52全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法薄層板薄層板： 分為硬板軟板，熒光薄層板等。分為硬板軟板，熒光薄層板等。53符號(hào)符號(hào)含意含意符號(hào)符號(hào)含意含意G以石膏作粘合劑C薄層已被分成條帶H無外加粘合劑Silanised,RP-2二甲基硅烷改性的

51、反相R特別純化的RP反相P制備用RP-8，RP-18C-8，C-18烷基改性W水可濕性的NH2氨基改性親水層F254,366熒光指示劑激發(fā)波長(zhǎng)CHIR手性固定相F254S抗酸性熒光指示劑CN氰基改性固定相4 0 , 60平均孔徑平均孔徑（）DIOL二醇基改性固定相二醇基改性固定相 市售吸附劑和預(yù)制板包裝上的符號(hào)及含意市售吸附劑和預(yù)制板包裝上的符號(hào)及含意引自引自http:/ 李維斌李維斌1. 吸附劑薄層 2. 涂布器 3. 玻璃夾板4. 玻璃板 5. 玻璃夾板過程過程：載板選擇：載板選擇涂敷涂敷晾干晾干活化活化備用備用優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：一次鋪多塊薄層板，簡(jiǎn)單易行。：一次鋪多塊薄層板，簡(jiǎn)單易行。（一）制板

52、（一）制板第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌（二）點(diǎn)樣二）點(diǎn)樣點(diǎn)點(diǎn)樣方法：樣方法：1.1. 劃基線劃基線2.2. 做樣品標(biāo)記做樣品標(biāo)記3.3. 點(diǎn)樣點(diǎn)樣55平頭微量點(diǎn)樣器平頭微量點(diǎn)樣器點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)樣毛細(xì)管注意：注意：動(dòng)作要輕，勿損傷薄層板表面；動(dòng)作要輕，勿損傷薄層板表面；若需多次點(diǎn)樣，每次點(diǎn)樣后將樣若需多次點(diǎn)樣，每次點(diǎn)樣后將樣品點(diǎn)晾干或吹干后，再二次點(diǎn)樣，樣品點(diǎn)晾干或吹干后，再二次點(diǎn)樣，樣點(diǎn)直徑不超過點(diǎn)直徑不超過3mm3mm為宜；為宜；展開后斑點(diǎn)集中，各點(diǎn)面積大小

53、展開后斑點(diǎn)集中，各點(diǎn)面積大小基本一致。基本一致。第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌56（三）展開（三）展開展開方式：?jiǎn)蜗蛘归_、雙展開方式：?jiǎn)蜗蛘归_、雙向展開、多次相展開等。向展開、多次相展開等。單向展開中的上行展開單向展開中的上行展開前沿前沿 1.52.0cm1 2 展開展開預(yù)飽和預(yù)飽和第三節(jié) 平面色譜法邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng)全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維

54、斌57（四）顯色與檢視（四）顯色與檢視1. 物理方法物理方法有顏色物質(zhì)有顏色物質(zhì)紫外光下顯色紫外光下顯色熒光板分離熒光板分離紫外光下發(fā)熒光紫外光下發(fā)熒光 2. 化學(xué)方法化學(xué)方法第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌58（五）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（五）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)1. 檢測(cè)靈敏度檢測(cè)靈敏度 對(duì)照溶液稀釋若干倍的溶液應(yīng)顯示清晰的對(duì)照溶液稀釋若干倍的溶液應(yīng)顯示清晰的斑點(diǎn)斑點(diǎn)fR2. 比移值比移值應(yīng)在應(yīng)在0.20.8 之間之間3. 分離效能分離效能 對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)，應(yīng)顯示兩

55、個(gè)清晰對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。分離的斑點(diǎn)。第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌59（六）測(cè)定（六）測(cè)定1. 1. 定性鑒別定性鑒別 利用斑點(diǎn)的顏色（或熒光）和斑點(diǎn)位置（利用斑點(diǎn)的顏色（或熒光）和斑點(diǎn)位置（R Rf f或或R Rr r) )2. 2. 雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查 3. 3. 定量分析定量分析定量分析時(shí)注意：定量分析時(shí)注意：色斑要集中、無拖尾現(xiàn)象；色斑要集中、無拖尾現(xiàn)象；應(yīng)選用對(duì)被測(cè)組分有較大溶解度的溶應(yīng)選用對(duì)被測(cè)組分有較大溶解度的溶劑浸泡

56、并多次洗脫；劑浸泡并多次洗脫；對(duì)吸附性較強(qiáng)、不易洗脫的組分，可對(duì)吸附性較強(qiáng)、不易洗脫的組分，可采用離心分離或?yàn)V過等方法進(jìn)行定量洗采用離心分離或?yàn)V過等方法進(jìn)行定量洗脫。脫?？刹捎秒s質(zhì)對(duì)照品法、樣品溶液的自身可采用雜質(zhì)對(duì)照品法、樣品溶液的自身稀釋對(duì)照法或雜質(zhì)對(duì)照品法與樣品溶液稀釋對(duì)照法或雜質(zhì)對(duì)照品法與樣品溶液自身稀釋對(duì)照法并用。自身稀釋對(duì)照法并用。（1 1）目視比色法）目視比色法（2 2）洗脫法）洗脫法（3 3）薄層掃描法）薄層掃描法第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌

57、u應(yīng)用適用于有機(jī)化合物的分離與鑒定，也可用于小量物質(zhì)的提純與精制。在藥學(xué)領(lǐng)域中，可用于測(cè)定藥品純度和檢查降解產(chǎn)物；判斷藥品合成反應(yīng)進(jìn)行的程度、監(jiān)控反應(yīng)歷程；分離和測(cè)定天然藥物的有效成分。 60第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法61紙色譜法：以濾紙為載體的平面色譜法，屬于分紙色譜法：以濾紙為載體的平面色譜法，屬于分配色譜的范疇，一般為正相色譜。配色譜的范疇，一般為正相色譜。紙色譜的固定相一般為紙纖維及其吸著的水，展紙色譜的固定相一般為紙纖維及其吸著

58、的水，展開劑常為一些含水的有機(jī)溶劑。開劑常為一些含水的有機(jī)溶劑。全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌紙色譜法濾紙的選用：紙色譜法濾紙的選用：純凈，無明顯熒光斑點(diǎn)；純凈，無明顯熒光斑點(diǎn)；均勻無痕，有一定的機(jī)械強(qiáng)度；均勻無痕，有一定的機(jī)械強(qiáng)度；紙纖維松緊適宜；紙纖維松緊適宜；對(duì)相差很小的化合物，宜選用慢速濾紙；而相對(duì)相差很小的化合物，宜選用慢速濾紙；而相差較大的化合物，則選用快速濾紙。進(jìn)行定性分差較大的化合物，則選用快速濾紙。進(jìn)行定性分析時(shí)，宜選用較薄的濾紙；而進(jìn)行制備或定量分析時(shí)，宜選

59、用較薄的濾紙；而進(jìn)行制備或定量分析時(shí)則應(yīng)采用厚的濾紙。析時(shí)則應(yīng)采用厚的濾紙。62第三節(jié) 平面色譜法全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第三節(jié) 平面色譜法1.Rf與與Rr均為物質(zhì)定性鑒定的依據(jù)。均為物質(zhì)定性鑒定的依據(jù)。Rf在在01之間，之間，0.20.8為可為可用范圍，用范圍，0.30.5為最佳范圍；為最佳范圍；Rr可大于可大于1，也可小于，也可小于1。2.吸附薄層色譜吸附劑與展開劑選擇原則與吸附柱色譜相同。吸附薄層色譜吸附劑與展開劑選擇原則與吸附柱色譜相同。3.混合展開劑：一般占比例

60、較大的溶劑起著溶解物質(zhì)和分離的作用，混合展開劑：一般占比例較大的溶劑起著溶解物質(zhì)和分離的作用，而占比例小的溶劑則起著調(diào)整溶劑極性、改善而占比例小的溶劑則起著調(diào)整溶劑極性、改善 值的作用。值的作用。4.薄層色譜操作方法：制板、點(diǎn)樣、展開、顯色與檢視、系統(tǒng)性實(shí)薄層色譜操作方法：制板、點(diǎn)樣、展開、顯色與檢視、系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)、測(cè)定。驗(yàn)、測(cè)定。5.薄層色譜測(cè)定：定性鑒別、雜質(zhì)檢查、定量分析。薄層色譜測(cè)定：定性鑒別、雜質(zhì)檢查、定量分析。63點(diǎn)滴積累點(diǎn)滴積累全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國(guó)高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌第十一章