制作膠體金試紙的硝酸纖維素膜選擇及應(yīng)用技巧 (完)

1、制作膠體金試紙的硝酸纖維素膜選擇及應(yīng)用技巧 (完) 硝酸纖維素膜又稱為NC膜, 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處.所以NC膜成為該試驗(yàn)中最重要的耗材,而由于其屬于非標(biāo)準(zhǔn)器件,基本上每個項(xiàng)目開始階段都會遇到如何選擇合適的NC膜的問題.同時也存在是否要對NC膜進(jìn)行后期處理及如何處理的討論. 一. NC膜的生產(chǎn)原理這個雖然看上去屬于生產(chǎn)廠商的事情,但是GMP有個觀點(diǎn)是強(qiáng)調(diào)對過程的控制才會有好的結(jié)果.那么只有了解NC膜的大致生產(chǎn)過程和基本原理才能更好的掌握這種材料的特性,最終制作出滿意的試紙.你了解嗎?我找了很久,終于找到一些比較直觀的圖片,大家可以到伊能公司的官

2、方網(wǎng)站看到 生產(chǎn)NC膜的過程和普通的造紙過程是非常類似的,我們可以借鑒對造紙的認(rèn)識來理解.首先,勻漿配比購買回的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機(jī)化學(xué)物,溶解形成混漿,在該漿體內(nèi),會加入一定比例的試劑來調(diào)整最后形成的膜的性質(zhì),一般是一個試劑配方,主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解在一個緩沖體系內(nèi). 不同的廠家加入的溶液配方不一樣,直接導(dǎo)致了在產(chǎn)品的差異.其次,滾筒鋪膜配好的勻漿通過滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上.這個和造紙的過程是非常相似的.最后,成型在勻漿內(nèi)的成型劑開始揮發(fā),膜逐步干燥成型.同時在這個過程中由于溫度比較高,有些廠家在這個過程采取了在密

3、閉腔體內(nèi)成型,同時補(bǔ)充配方溶液的形式,來避免一些有效成分的蒸發(fā).切割出產(chǎn)品通過以上步驟生產(chǎn)出來的膜是呈一個寬度極大的產(chǎn)品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關(guān),滾筒越大生產(chǎn)越方便,但設(shè)備的成本也越高.寬膜要經(jīng)過切割才能成為我們購買到的25mm或18mm(或20mm)寬,而長度上,成品卷膜和寬膜的長度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會造成原料的浪費(fèi)和人力成本的增加,后來廠商在和試紙生產(chǎn)廠家的協(xié)調(diào)過程中,綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說的寬度,以次為標(biāo)準(zhǔn).關(guān)于不同寬度的用途差異,稍后詳述.從生產(chǎn)的過程,我們可以得知, NC膜本身是已經(jīng)添加了表面活性劑來改善親水能力,而且已經(jīng)

4、存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對紙條測試影響不會很大).對后面談到的一些問題就比較容易理解.二.NC膜的供應(yīng)商及現(xiàn)狀現(xiàn)在有銷售的NC膜品牌型號如下:MILLIPORE(美國), M135(有背襯/無背襯兩種) M180(有背襯/無背襯兩種)WHATMAN and S&S, Immunopore RP, 100 sec/4cm, 帶被襯, CT線不會擴(kuò)散, 很集中, 背景干凈. 適用于各種test. (只有25mm x 50M); PuraBind R, 140sec/4cm, 不帶被襯, 適用于小分子競爭test等. (20/25mm x 50M)SARTORIUS(德國), CN140伊

5、能(國產(chǎn)), 8um 6umMDI(印度), 8um 6um說到這些供應(yīng)商,不得不談?wù)劙l(fā)展的歷史. S&S是膜行業(yè)的鼻祖,這點(diǎn)所有的膜公司都承認(rèn).millipore,SARTORIUS和whatman都是后輩, 我的理解是S&S在市場競爭的過程中經(jīng)營方式落后,最后被whatman收購. 就產(chǎn)品質(zhì)量來說S&S的AE99和AE98是非常優(yōu)良的.而MDI是近年才出現(xiàn)的一個膜公司,可能也是與印度膠體金試紙生產(chǎn)行業(yè)的快速發(fā)展密切相關(guān),其所有的產(chǎn)品都是在印度生產(chǎn),經(jīng)營者為父子兩人,父親負(fù)責(zé)技術(shù),兒子進(jìn)行經(jīng)營.03年我曾測試過其樣品,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在跑板方面有不均勻波浪現(xiàn)象,且加速穩(wěn)定性試

6、驗(yàn)結(jié)果很不理想.今年初我又收到了一些樣品,情況仍然沒有太大改善,后來就不再考慮使用了.國產(chǎn)膜伊能是在去年開始進(jìn)入市場的,主要特點(diǎn)是能降低成本,樣品我也試測了幾批,性能已經(jīng)與進(jìn)口膜很接近,經(jīng)過一些有針對性的優(yōu)化后可以用在HCG產(chǎn)品的生產(chǎn).但不是所有的工廠都能購輕易的完成這個優(yōu)化工作.膜的國產(chǎn)化是一個趨勢,但進(jìn)口廠家要實(shí)現(xiàn)國產(chǎn)化還面臨很大的問題,其中廠房設(shè)備的搬遷就是一個非常大的問題.幾家供應(yīng)商的國內(nèi)聯(lián)絡(luò)人和技術(shù)支持分別是MILLIPORE(美國), Mrs Yang, harryWHATMAN and S&S, Clark, kevinSARTORIUS(德國), Mr Xu, Iric

7、伊能(國產(chǎn)), connie, Mr YangMDI(印度), Ashawant Gupta銷售模式都是直銷式,少量購買的情況下要通過代理商走一下帳.價格上MILLIPORE與WHATMAN相當(dāng),SARTORIUS便宜一些,國產(chǎn)膜更便宜一些.印度膜和SARTORIUS價格相同,基本不用考慮. 在科研市場,MILLIPORE使用最多.科研市場由于僅用來試驗(yàn),所以膜需求量小,不被供應(yīng)商重視. 生產(chǎn)客戶中,MILLIPORE,WHATMAN,SARTORIUS占有量相當(dāng),伊能現(xiàn)在也開始有一些工廠客戶了,MDI量最小投訴也最多.三.膜的選擇以上談了該行業(yè)的一些發(fā)展現(xiàn)狀,那么我們大致了解后,回到最關(guān)心的

8、問題,如何選擇膜? 經(jīng)常會遇到的問題是,我是做*項(xiàng)目的,我該選擇那類膜?這里涉及到一個膜的分類標(biāo)準(zhǔn)問題,一個供應(yīng)商可能提供這個膜是8um,但另一個供應(yīng)商告訴你膜是135s的.這之間的區(qū)別與聯(lián)系是什么?um指的是膜孔徑,而從上面膜的生產(chǎn)過程,我們可以看出,膜的孔徑實(shí)際上是沒有辦法界定的.由于干燥成型等過程的非絕對均一,膜的孔徑也是非均一的.膜孔徑的說法實(shí)際上是沿用了一直以來的一個形象稱呼.而以秒為單位的定義為,每4cm膜,水的層析時間是*s.該單位已經(jīng)越來越被各大廠商所接受,成為了一個通用的比較標(biāo)準(zhǔn).以下我們將采用s單位來進(jìn)行交流.換算情況大致為: 8um=135s; 6um=180s.不同秒數(shù)

9、的膜對反應(yīng)有什么影響呢?首先,我們分析一下液體在膜上的運(yùn)動過程. 一張長度為4cm的膜, 每隔1cm做一個標(biāo)記, 當(dāng)液體運(yùn)動過標(biāo)記處時記錄時間點(diǎn). 那么你將會發(fā)現(xiàn)液體在膜上的運(yùn)動是呈減速前行的. 而兩張不同秒數(shù)的膜(例如135s, 180s)在同一時間標(biāo)記點(diǎn)處的運(yùn)動速度不同.這個試驗(yàn)用清水做不好觀察,可以考慮用色素水溶液,非常明顯.那么從這個試驗(yàn)可以看出,在通過同一T線噴點(diǎn)位置時, 金溶液通過的速度是快速膜>慢速膜. 那么通過速度越快和包被在T線的物質(zhì)反應(yīng)時間也就越短, 讀數(shù)快, 那么靈敏度也就越低. 反之, 反應(yīng)時間長, 讀數(shù)慢, 也就靈敏度高. 同時還有一個問題是, 反應(yīng)時間越長,

10、發(fā)生非特異性結(jié)合的可能性就越大, 所以過長時間的反應(yīng)不一定就能夠真正的提升靈敏度. 所以這里就有一個讀數(shù)時間/反應(yīng)靈敏度/非特異性結(jié)合的均衡.其實(shí)我們并沒有那么多選擇. 經(jīng)過使用實(shí)踐, 各供應(yīng)商一般都只提供兩個型號, 就是135s和180s. 雖然看到有些廠家的產(chǎn)品目錄上型號種類繁多,但這兩個型號的定貨量就占了95%以上, 其他型號供貨上也就遠(yuǎn)不如這兩個型號來得順利. 135s一般用在雙抗體夾心法, 180s一般用在競爭法. 你所要做的是,先選擇其中的一個型號, 然后比較不同供應(yīng)商同一個型號的差異, 由于前面說的添加配方與你的試驗(yàn)條件配合的不同,這個差異可能大也可能小. 具體要根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果來確

11、定最后的選擇.我個人不建議地毯式的測試不同規(guī)格/不同廠家的膜, 這樣成本高, 成功的幾率也小.四.膜的質(zhì)控方式本節(jié)適合用膜量較大的公司用戶參考.對于一卷膜可以用上幾個月的用戶來說, 廠家的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)完全能滿足你的要求,而不需要自己再做相關(guān)的質(zhì)控.膜的質(zhì)控雖屬于原輔料QC職能, 但由于其專業(yè)性強(qiáng), 一般都由小樣調(diào)試人員來執(zhí)行. 膜入原料庫后需要進(jìn)行如下檢驗(yàn)工作:1. 查收COA在購買時, 供應(yīng)商會隨產(chǎn)品為每個lot的膜提供一張紙質(zhì)的出廠質(zhì)量證書, 該證書被稱為COA. 如果你已經(jīng)購買某一批次的膜, 而沒有索取相應(yīng)的證書, 如果有需要可提供批號向廠家要求補(bǔ)發(fā). 其實(shí)在很多行業(yè)都有廠商為自己的產(chǎn)品

12、附上COA的習(xí)慣.COA一般只提供給大客戶, 對小客戶是沒有意義的.其內(nèi)容主要是廠家在產(chǎn)品出廠時做過一些測試的羅列. 作用可以理解為質(zhì)量憑證和測試數(shù)據(jù)參考.2. 檢查物理性能膜的物理性能主要是2個參數(shù), 膜厚度和寬度. 長度不需要檢測. 使用中可以關(guān)注長度上是否有斷面重接現(xiàn)象, 斷面多費(fèi)料則多, 少數(shù)發(fā)生. 厚度, 由螺旋測微尺,選擇幾個測量點(diǎn)檢測后算平均. 膜生產(chǎn)的必測參數(shù). 主要表現(xiàn)為厚度不均勻影響生物原料在膜上的擴(kuò)散性能, 點(diǎn)出來的C/T線寬窄不一. 另外也影響爬速.寬度, 普通直尺測量.物理性能一般都不會有什么大問題. 畢竟檢測標(biāo)準(zhǔn)客觀, 易把握. 沒有條件執(zhí)行的廠家可省略.3. 跑水

13、性能樣本采用含有有色食用色素的水溶液, 目的是容易觀測. 需制作一個簡易支架.操作: 注入足夠溶液到下部槽內(nèi), 將不同批次膜每隔1cm做一次標(biāo)記(總長大于4cm)并放到傾斜支架, 整個支架下端放入溶液槽, 膜開始吸液, 計(jì)時. 記錄每個標(biāo)記處的通過時刻, 并與對照組比較. 跑板時, 理論上溶液呈水平線形式上吸, 觀測是否有波浪傾斜或包圍潤濕等反?，F(xiàn)象.4. 點(diǎn)樣測試C/T線出線時間, 其他試驗(yàn)條件相同情況下, 記錄和比較C/T線出現(xiàn)時間是否與對照有差異.靈敏度, 比較不同樣本濃度情況下, T線的變化是否和對照組同. 一般每批次膜取前端一段用來測試即可. 由于制造過程的不均一性, 不同批號的靈敏

14、度會有一定差異, 當(dāng)大批量使用時, 這種差異影響是非常大的, 那么就要按照靈敏度表現(xiàn)將不同批號的膜進(jìn)行分類. 在膜的STOCK中要能夠輕易的分辨出來. 當(dāng)進(jìn)入后期生產(chǎn)調(diào)用時, 就能根據(jù)這些分類, 按照訂單要求取用不同批號的膜, 或者用強(qiáng)靈敏度的原料和差靈敏度的膜來搭配.關(guān)于膜的批內(nèi)差. 批內(nèi)差是肯定存在的,只是差距大小的問題,依據(jù)一般的測試條件是很困難獲得詳細(xì)的數(shù)值,因?yàn)槟悴豢赡軐γ恳痪砟さ拿恳欢味甲鲈敿?xì)的測試. 減小膜批內(nèi)差的最有效方法是不購入邊緣膜帶. 前面說過膜的生產(chǎn)方式,生產(chǎn)出的半成品是寬幅很大的一個膜面,要通過截面裁切才能獲得25mm或者20mm的寬度.那么就有中間部分,和邊緣部分之

15、分.越靠近中間部分,膜的均勻性越好,邊緣部分則相對要差,就造成了批內(nèi)差. 一般可以通過COA獲得具體位置信息,例如MILLIPORE就在切割后用字母A,B,C來表示切出的窄膜在寬幅膜中的位置.如果是試用某個型號的膜小樣, 還需要在以上檢測后加入膜加速老化試驗(yàn). 包括膜單獨(dú)的老化試驗(yàn)和點(diǎn)好膜后產(chǎn)品的老化試驗(yàn), 具體試驗(yàn)方法請參看我以前寫的研發(fā)思路一文.五.膜的深入探討和應(yīng)用技巧從本節(jié)開始,我們開始對膜進(jìn)行深入討論和談一些應(yīng)用技巧.1. 蛋白與膜的結(jié)合原理蛋白與膜的結(jié)合原理, 已知的結(jié)合力包括疏水作用力H鍵靜電作用力等,確切的結(jié)合原理并不明確,主要靠假說來支撐.主要有兩種假說:1) 首先兩者靠靜電

16、作用力結(jié)合, 然后靠H鍵和疏水作用來維持長時間結(jié)合.2) 首先兩者靠疏水作用結(jié)合, 然后靠靜電作用來維持長時間結(jié)合.兩條假說, 都表明其結(jié)合過程分為兩步, 首先結(jié)合和后面長時間結(jié)合.由于結(jié)合原理的不明確性, 導(dǎo)致在這方面的工作非常依賴實(shí)踐經(jīng)驗(yàn). 2. 膜對結(jié)合的影響1)膜孔徑有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來區(qū)分不同的膜,但是請注意這只僅僅限于同一廠家的產(chǎn)品,如果是不同廠家的產(chǎn)品,這種比較是無意義的. 膜孔徑與層析速度的關(guān)系,已在上文描述. 隨著膜孔徑減小,膜的實(shí)際可用表面積遞增,膜結(jié)合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數(shù)為表面積比率(實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率).另外, 膜孔徑越小,層析速度

17、也越小,那么金標(biāo)復(fù)合物通過T線的時間也就越長,反應(yīng)也就越充分.綜合以上兩點(diǎn),結(jié)論為膜孔徑越小靈敏度越高.但是同時也減慢了跑板速度,增加了非特異性結(jié)合的機(jī)會,也就是假陽性越高.所以要按照試驗(yàn)結(jié)果挑選適合實(shí)際項(xiàng)目的膜,找到合適的平衡點(diǎn).2)不同廠家的膜差異這個差異主要來源于兩點(diǎn):1>  生產(chǎn)膜時,使用的聚合物和表面活性劑的來源,類型,數(shù)量不同.同理,在膜處理中這兩類物質(zhì)一般會對性能產(chǎn)生較大影響.2> 處理過程不同.3. 生物原料,緩沖溶液的試劑和配方1) 生物原料, 作為CT線的生物原料使用情況各異,所以這里只做略述.首先,單克隆抗體與膜的結(jié)合優(yōu)于多克隆抗體, 主要

18、時由于多克隆抗體有很多不同的表面位點(diǎn), 而各位點(diǎn)與膜的最佳結(jié)合條件都有細(xì)微的差別, 毫無疑問就增加了優(yōu)化難度.其次,分子量越大,蛋白越難結(jié)合到固相材料上. 2)緩沖液大家最關(guān)心的可能就是希望獲得一個性能優(yōu)良的配方,包括緩沖液,封閉液等等處理溶液配方. 其實(shí)我也無法提供給你一個萬用配方清單. 因?yàn)椴煌姆磻?yīng)體系需要不同的配方來支持, 而不同機(jī)構(gòu)的反應(yīng)體系又有差異. 想獲”魚”先學(xué)”漁”. 為了不誤導(dǎo)大家,我在下面涉及到配方的問題上,僅提供思路,具體配方請自己摸索.緩沖液的構(gòu)成一般是: PBS(或其他緩沖體系)+作用物質(zhì)(針對某一特定問題)+PH調(diào)整. 我在參考過以前的各種資料后,個人意見為配方原

19、則為宜簡不宜繁,根據(jù)自己的需要添加作用物質(zhì),原來的很多需要添加的作用物質(zhì),由于膜制造技術(shù)的改進(jìn)已經(jīng)不再需要.推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2, 該緩沖體系對多種抗原抗體都有良好的適應(yīng)性.作用物質(zhì)的情況大致羅列如下:少量NACL,減少信號強(qiáng)度,消假陽.有機(jī)醇(甲醇,異丙醇等),潤濕膜,減少膜帶有的靜電,利于結(jié)合包被.個人不推薦,因制膜工藝改進(jìn).表面活性劑(TW20,TX100),增加親水力,可避免線條中空現(xiàn)象,也可增色.糖,保護(hù)劑,減緩老化速度,也可以增加親水力同上.調(diào)PH到某個位置,可以消假陽.4. 點(diǎn)樣環(huán)境環(huán)境濕度對點(diǎn)膜過程非常重要.最佳濕度一般在45-65%.濕度過低,膜

20、上容易聚集靜電荷,點(diǎn)膜容易出現(xiàn)散點(diǎn),導(dǎo)致測試會出現(xiàn)疏水斑.濕度過高,膜上毛細(xì)作用加強(qiáng),點(diǎn)膜容易引起CT線變寬甚至擴(kuò)散.為了保證點(diǎn)樣時膜濕度的均一性,一般在點(diǎn)樣前把膜放到該濕度條件下平衡一段時間.5. 點(diǎn)樣儀器與膜面情況的關(guān)系目前有兩種點(diǎn)樣方式,劃膜式和非接觸點(diǎn)膜式.非接觸點(diǎn)膜式優(yōu)于劃膜式,進(jìn)口劃膜式優(yōu)于國產(chǎn)劃膜式.因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面,而膜本身的物理性質(zhì)為軟脆,劃管會在其表面留下印痕.進(jìn)口的劃膜機(jī)由于使用的材料和控制系統(tǒng)較好,所以留下的劃痕較輕,而國產(chǎn)儀器較差,留下的劃痕也就比較嚴(yán)重. 劃痕容易對層析的金標(biāo)復(fù)合物形成阻力,導(dǎo)致假陽性. 同時容易出現(xiàn)跑板時在T線位置出現(xiàn)若有若無一條細(xì)線

21、(鬼線),而跑板結(jié)束后鬼線消失的奇怪現(xiàn)象.6. 膜的寬度與點(diǎn)樣位置膜的寬度一般有18mm(or 20mm)和25mm兩種, 分別使用在做測試條和做測試板上.然而,不同的T線點(diǎn)樣位置將帶來不同的靈敏度. 點(diǎn)樣位置上移,金標(biāo)復(fù)合物通過T線位置時速度變慢,反應(yīng)時間增加,靈敏度升高. 反之靈敏度降低. 這個方法可以用來改變靈敏度和消除假陽性.7. 溶液在膜上的擴(kuò)散溶液在膜上的點(diǎn)樣量一般情況下為1ul/cm.溶液在膜上的擴(kuò)散是趨向兩端的,噴點(diǎn)上去的是均勻的抗體溶液,但當(dāng)干燥時線條邊緣的干燥速度高于中間,中間的抗體會不斷向兩邊擴(kuò)散,所以干燥后抗體是向線條的兩端聚集的.一般情況下不影響你的試驗(yàn).如果你發(fā)現(xiàn)線

22、條出現(xiàn)兩端紅,中間淡的現(xiàn)象,就要考慮這個問題了.可以加如上面說的作用物質(zhì)來解決.8. 點(diǎn)膜前后的封閉作用從供應(yīng)商處購買回的膜基本上都是已經(jīng)優(yōu)化處理好的,直接點(diǎn)膜就可使用.然而我們還是經(jīng)常會遇到關(guān)于封閉的討論.其實(shí)封閉不象大家認(rèn)為的那樣,一封閉什么問題都解決了. 老問題走了新問題又來了,而且更麻煩,我要說的是慎用封閉.我極其反對點(diǎn)膜前封閉的做法. 原因?yàn)閺S家在生產(chǎn)膜時候,各種配方是混合加入原漿的.而點(diǎn)膜前封閉時要將膜浸泡在封閉液內(nèi),必然擾亂了膜內(nèi)正常的物質(zhì)分布.由此引發(fā)了許多問題,也降低了工作效率. 也有廠家遇到不封閉就無法包被上膜的問題,其實(shí)可以通過其他辦法來解決,封閉必然是下測.我經(jīng)常使用的

23、封閉手法有兩種.流動封閉,將作用物質(zhì)處理在樣品墊上.膜上定點(diǎn)封閉,將作用物質(zhì)配成溶液噴點(diǎn)在膜的特定位置上. 該方法需要使用BIODOT的AIRJET噴頭.可以將不合格的半成品大板重新復(fù)活.只要是將封閉做在了膜上,就必然會對產(chǎn)品的穩(wěn)定性造成影響.具體的影響程度要通過穩(wěn)定性測試來評判.9. 膜的儲存剛生產(chǎn)出的膜一般含有5-10%的水分. 關(guān)于膜的老化機(jī)理,有個理論支持,不過爭議比較大. 理論認(rèn)為:膜的老化是因?yàn)槟ど系乃终舭l(fā),使膜變得疏水,帶電荷并變脆. 儲存膜一般要求是避光,密封.過干或過濕都不利.在這種保存條件下,一般可以放置兩年. 但是如果膜上做了封閉處理,就要根據(jù)具體試驗(yàn)情況來判斷了.有些

24、膜由于生產(chǎn)工藝的問題,使用后靈敏度會在一段時間內(nèi)發(fā)生變化,遇到這種問題,就需要在點(diǎn)膜后放置一段時間,待穩(wěn)定后方可進(jìn)入調(diào)試生產(chǎn).后序以上便是我在膠體金層析診斷試驗(yàn)中使用硝酸纖維素膜過程中的一些經(jīng)驗(yàn).從起筆到結(jié)尾花了大約一個月時間,斷斷續(xù)續(xù),終于完成. 也要感謝所有膜生產(chǎn)廠家技術(shù)專家在以前的工作接觸中給我做過的大量技術(shù)培訓(xùn),其中很多已經(jīng)成為了經(jīng)常聯(lián)系的朋友.由于膜工業(yè)是在不斷發(fā)展的,可能出現(xiàn)新的問題或新的解決辦法. 歡迎進(jìn)行討論.免疫膠體金稀釋液的配伍原則（前面我一個回帖成此文，發(fā)現(xiàn)太長了，不發(fā)新帖可惜，呵呵）制備好免疫膠體金后，還需要將其稀釋到一定濃度，并吸附于特殊的惰性介質(zhì)中才能夠最終制成產(chǎn)品

25、。一般來說，特殊的介質(zhì)常用的是玻璃纖維或無紡布。玻璃纖維和無紡布本身一般是疏水的，膠體金產(chǎn)業(yè)一般采用表面活性劑預(yù)處理過的玻璃纖維或無紡布，通常配方為1%Tween20+適量PVA。介質(zhì)處理完成后，免疫膠體金稀釋液的配伍才是最關(guān)鍵的?，F(xiàn)總結(jié)原則如下，不足之處歡迎批評或補(bǔ)充。1 合適的離子種類和強(qiáng)度免疫膠體金畢竟是含有生物活性分子，應(yīng)用時還要面對千差萬別的樣品，原則上需要稀釋在合適pH的緩沖液中。經(jīng)驗(yàn)值是6-9。在這個范圍內(nèi)可選的緩沖主要有tris和PB，也不排除其他種類緩沖適用的可能。當(dāng)使用的緩沖離子強(qiáng)度過大如超過0.2M時，有可能造成釋放、層析不好或檢測結(jié)果異常。離子的種類也因?yàn)槊庖吣z體金的生物分子不同而有諸多限制，例如鈣調(diào)蛋白可能與Ca離子有關(guān)系。而鹵素離子強(qiáng)度對膠體金穩(wěn)定性似乎有特殊的破壞作用，教科書式的NaCl調(diào)試最適標(biāo)記條件就是例子。2 大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架這個其實(shí)是凍干工藝的理論基礎(chǔ)，適用于膠體金干燥工藝，對凍干有研究的應(yīng)該對這個工藝感覺很小兒科。抽真空是一個熱力學(xué)吸熱過程，實(shí)驗(yàn)表明免疫膠體金的真空干燥是一個先冷凍再升華的過程，十分類似凍干。無紡布材料的工藝由于干燥過程快，多數(shù)采用烤干的工藝，但是大分子的骨架作用仍然是對產(chǎn)品的釋放速度和比率有很大幫助。常用大分子物質(zhì)如PEG4000，PEG20000，P