蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

1、蛋白質(zhì)沉淀反響實(shí)驗(yàn)集團(tuán)企業(yè)公司編碼 ： LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-蛋白質(zhì)的沉淀反響一、 目的和要求1、加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識(shí)2、掌握幾種沉淀蛋白質(zhì)的方法3、了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系二、 沉淀反響一原理在水溶液中，蛋白質(zhì)分子的外表上由于有水化層和同性電荷的作用，所 以成為穩(wěn)定的膠體顆粒。但這種穩(wěn)定的狀態(tài)是有條件的。在某些理化因素的 作用下，蛋白質(zhì)分子外表帶電性質(zhì)發(fā)生變化、脫水甚至變性，那么會(huì)以固態(tài)形 式從溶液中析出，這個(gè)過(guò)程就稱為蛋白質(zhì)的沉淀反響。蛋白質(zhì)的沉淀反響可 分為以下兩種類型：1、 可逆沉淀反響沉淀反響發(fā)生后，蛋白質(zhì)分子內(nèi)部

2、結(jié)構(gòu)并沒(méi)有發(fā)生大的或者顯著變化。 在沉淀因素去除后，又可恢復(fù)其親水性，這種沉淀反響就是可逆沉淀反響， 也叫做不變性沉淀反響。屬于這類沉淀反響的有鹽析作用、等電點(diǎn)沉淀以及 在低溫下短時(shí)間的有機(jī)溶劑沉淀法等。2、 不可逆沉淀反響蛋白質(zhì)在沉淀的同時(shí)，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生大的改變，許多副鍵發(fā)生斷裂，即使除去沉淀因素，蛋白質(zhì)也不會(huì)恢復(fù)其親水性，并喪失生物活性，這種沉 淀反響就是不可逆沉淀反響。重金屬鹽、生物堿試劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、加熱、 強(qiáng) 烈震蕩、有機(jī)溶劑等都能使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀反響。二鹽析1、 材料與試劑 1 10%的卵清蛋白溶液要求新鮮配制、濃蛋白溶液2 飽和硫酸 錢溶液 3 固體硫酸錢 4 濾紙、玻棒

3、2、 操作方法1取試管一支，參加濃蛋白溶液 2ml, 再加等量的飽和硫酸錢溶液， 混勻后靜置 10 分鐘將出現(xiàn)沉淀。此沉淀物為球蛋白。2取上清液于另一支試管。 3 向上清液液中參加硫酸釵粉末，邊加邊用玻棒攪拌，直至粉末不再 溶解為止。靜置數(shù)分鐘后，沉淀析出的是清蛋白。 4 向兩支試管中分別加水，觀察其沉淀是否溶解。三重金屬鹽沉淀重金屬離子如Pb仁Cu2 Hg2 AQ等可與蛋白質(zhì)分子上的徑基結(jié)合生成 不 溶性金屬鹽而沉淀：重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)的反響通常很完全，特別是在堿金屬鹽類存在 時(shí)。 因此，生化分析中，常用重金屬鹽除去體液中的蛋白質(zhì)；臨床上用蛋白質(zhì)解除重金屬鹽引起的食物中毒。1、材料與試劑1

4、 10%的卵清蛋白溶液 2 0. lmol/L 氫氧化鈉溶液3 3%硝酸銀溶液 4 0. 1%硫酸銅溶液 6試管 3支2、操作方法1 取試管 2支，分別編號(hào)后各參加 lml 10%的卵清蛋白溶液。2 各管再參加一滴 0. lmol/L 氫氧化鈉溶液。3 向 1 管加 3%硝酸銀溶液 3? 4滴；向 2管加 0.1%硫酸銅溶液 3? 4 滴?；靹蚝笥^察沉淀的生成。四生物堿試劑沉淀反響 生物堿試劑能與蛋白質(zhì)分子中的氨基結(jié)合生成不溶性沉淀，反響如下： 1、材料與試劑 1 10%的卵清蛋白溶液 2 5%三氯乙酸溶液2、操作方法取試管一支，加 10%的卵清蛋白溶液 20 滴后再參加 5%三氯乙酸溶液 10 滴，混勻后觀察沉淀的出現(xiàn)。五有機(jī)溶劑沉淀反響1、材料與試劑 1 10%的卵清蛋白溶液 2 95%乙醇溶液2、操作方法取試管 1支，加 10%的卵清蛋白溶液 10 滴后，再參加 95%乙