分子生物學(xué)常用儀器介紹ppt課件

1、研究生實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)研究生實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器介紹介紹實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)中心 Biometra梯度PCR儀工作原理工作原理 多次重復(fù)多次重復(fù)“變性解鏈變性解鏈退火退火合合成延伸的循環(huán)成延伸的循環(huán) 主要用途主要用途 用于用于DNA的擴(kuò)增的擴(kuò)增 梯度梯度PCR儀特別適用于最適反應(yīng)儀特別適用于最適反應(yīng)條件的摸索，在一次條件的摸索，在一次PCR反應(yīng)中反應(yīng)中可檢驗(yàn)多至可檢驗(yàn)多至12個(gè)反應(yīng)溫度，從而個(gè)反應(yīng)溫度，從而輕松得出最適反應(yīng)溫度。輕松得出最適反應(yīng)溫度。Mullis開車的時(shí)候開車的時(shí)候, 瞬間感覺兩排路燈就是瞬間感覺兩排路燈就是DNA的兩條鏈，自己的車和對(duì)面的兩條鏈，自己的

2、車和對(duì)面開來(lái)的車象是開來(lái)的車象是DNA聚合酶，面對(duì)面地合成著聚合酶，面對(duì)面地合成著DNA， 基因、基因、DNA片段的克隆片段的克隆 人工基因構(gòu)建人工基因構(gòu)建 DNA序列測(cè)定序列測(cè)定 基因定點(diǎn)突變基因定點(diǎn)突變 基因型突變檢測(cè)，基因型突變檢測(cè)， SNP分析，遺傳背景分析分析，遺傳背景分析 生物物種鑒定，系統(tǒng)進(jìn)化研究生物物種鑒定，系統(tǒng)進(jìn)化研究 基因表達(dá)量研究基因表達(dá)量研究real-time PCR） / 基因表達(dá)譜研究（基因表達(dá)譜研究（ DNA chip, SAGE） 疾病基因檢測(cè)疾病基因檢測(cè) / 遺傳病的產(chǎn)前診斷遺傳病的產(chǎn)前診斷 致病病原體的檢測(cè)致病病原體的檢測(cè) 腫瘤治療中癌基因的檢測(cè)腫瘤治療中癌

3、基因的檢測(cè) 會(huì)推廣到大部分疾病治療前的會(huì)推廣到大部分疾病治療前的檢測(cè)檢測(cè) DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子關(guān)系鑒別、指紋、個(gè)體識(shí)別、親子關(guān)系鑒別、法醫(yī)物證法醫(yī)物證 其他其他: 動(dòng)、植物檢疫轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢動(dòng)、植物檢疫轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢測(cè)）測(cè)） 樣品樣品正對(duì)照正對(duì)照 負(fù)對(duì)照負(fù)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)準(zhǔn)分子量 三個(gè)水浴鍋，三個(gè)水浴鍋， 用手移動(dòng)用手移動(dòng) （Mullis等人當(dāng)時(shí)等人當(dāng)時(shí)用的）用的） 電加熱塊電加熱塊 自來(lái)水冷卻自來(lái)水冷卻 （PE，1988） 電加熱塊電加熱塊 內(nèi)置循環(huán)液冷卻內(nèi)置循環(huán)液冷卻 （PE，1989） 三個(gè)加熱塊三個(gè)加熱塊 機(jī)械手機(jī)械手 （Stratagene，1994） 半導(dǎo)體制冷和加熱半導(dǎo)體制

4、冷和加熱 （MJ, PE, BioMetra, Eppendrof） 溫度梯度溫度梯度, 熒光檢測(cè)熒光檢測(cè) (如如 Roche的的Lightcycler) 風(fēng)加熱風(fēng)加熱 Lab-on-chip式的式的PCR儀儀(所謂的芯片所謂的芯片PCR) 中國(guó)的狀況中國(guó)的狀況 1991年出現(xiàn)三個(gè)水浴鍋年出現(xiàn)三個(gè)水浴鍋+機(jī)械手的原始機(jī)械手的原始PCR儀儀華美，復(fù)日等）華美，復(fù)日等） 現(xiàn)在以半導(dǎo)體現(xiàn)在以半導(dǎo)體Peltier板制冷式為主杭州博板制冷式為主杭州博日日,上海天呈上海天呈, 廈門安普利等）廈門安普利等）PCR儀的種類 總體來(lái)說(shuō)可以分為兩大類：總體來(lái)說(shuō)可以分為兩大類： PCR擴(kuò)增儀和實(shí)時(shí)熒光定量擴(kuò)增儀和實(shí)

5、時(shí)熒光定量PCR儀儀 普通的普通的PCR擴(kuò)增儀又衍生出帶梯度擴(kuò)增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度功能的梯度PCR儀、和帶原位擴(kuò)增功能的儀、和帶原位擴(kuò)增功能的原位原位PCR儀等。儀等。 2019年由年由ABI公司首先推出將擴(kuò)增和檢公司首先推出將擴(kuò)增和檢測(cè)融為一體的實(shí)時(shí)熒光定量測(cè)融為一體的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，此后儀，此后很多公司如很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的等等都先后推出不同款式的定量定量PCR儀，儀， PCR儀的主要參數(shù)儀的主要參數(shù) 溫度控制要精確度溫度控制要精確度 升降溫的速度升降溫的速度 更快的升降溫速度，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行更快的升降

6、溫速度，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時(shí)間，能提高反應(yīng)的時(shí)間，能提高PCR反應(yīng)特異性。反應(yīng)特異性。 ABI早就有升降溫速度高達(dá)早就有升降溫速度高達(dá)5C eppendorf也推出了升降溫速度可達(dá)到也推出了升降溫速度可達(dá)到6/秒和秒和4.5/秒秒 現(xiàn)在的現(xiàn)在的PCR儀如儀如ABI，Eppendorf的一的一般具有兩種溫控模式，即模塊溫控模般具有兩種溫控模式，即模塊溫控模式式Block-control和反應(yīng)管溫控模式）和反應(yīng)管溫控模式）（tube-control）。）。 模塊溫控模式適用于長(zhǎng)時(shí)間的靜態(tài)孵模塊溫控模式適用于長(zhǎng)時(shí)間的靜態(tài)

7、孵育如連接、酶切、去磷酸化等）。育如連接、酶切、去磷酸化等）。 試管溫控更為準(zhǔn)確試管溫控更為準(zhǔn)確 梯度梯度PCR儀儀 “摸條件一度是讓人很頭疼的問(wèn)題。摸條件一度是讓人很頭疼的問(wèn)題。 梯度梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問(wèn)的出現(xiàn)部分解決了一些問(wèn)題題在反應(yīng)過(guò)程中每個(gè)孔的溫度在反應(yīng)過(guò)程中每個(gè)孔的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出最適合的反應(yīng)條件。索出最適合的反應(yīng)條件。 原位原位PCR擴(kuò)增擴(kuò)增 在在PCR儀上增加原位儀上增加原位PCR模塊就模塊就可以在玻片上進(jìn)行原位可以在玻片上進(jìn)行原位PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增， 多槽式

8、高通量多槽式高通量PCR儀儀 隨著基因組高通量研究的需求的提高隨著基因組高通量研究的需求的提高 MJ有一種一拖四，就是有一種一拖四，就是1個(gè)主機(jī)帶個(gè)主機(jī)帶4個(gè)擴(kuò)增槽，個(gè)擴(kuò)增槽，每個(gè)槽可以獨(dú)立控溫，一次可以作每個(gè)槽可以獨(dú)立控溫，一次可以作96x4個(gè)樣品的個(gè)樣品的PCR，不過(guò)一旦出現(xiàn)問(wèn)題，不過(guò)一旦出現(xiàn)問(wèn)題4個(gè)都不能用了。個(gè)都不能用了。 ABI則在原來(lái)的則在原來(lái)的9700的基礎(chǔ)上推出了雙的基礎(chǔ)上推出了雙384孔的孔的基座，一次完成基座，一次完成384x2個(gè)樣品，使得個(gè)樣品，使得9700的功能的功能又?jǐn)U展到高通量領(lǐng)域而無(wú)需購(gòu)買新的機(jī)器，可惜又?jǐn)U展到高通量領(lǐng)域而無(wú)需購(gòu)買新的機(jī)器，可惜兩個(gè)兩個(gè)384槽不能

9、獨(dú)立控溫。槽不能獨(dú)立控溫。 eppendorf則有一個(gè)控制面板，可以控制則有一個(gè)控制面板，可以控制5個(gè)獨(dú)立個(gè)獨(dú)立的的PCR儀，每臺(tái)機(jī)器可以聯(lián)合，而且互不影響，儀，每臺(tái)機(jī)器可以聯(lián)合，而且互不影響，但是比較浪費(fèi)空間。但是比較浪費(fèi)空間。儀器的功能性和人性化設(shè)計(jì)儀器的功能性和人性化設(shè)計(jì) 熱蓋熱蓋現(xiàn)在的現(xiàn)在的PCR儀一般均配備儀一般均配備熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為105，使樣品，使樣品管頂部的溫度達(dá)到管頂部的溫度達(dá)到105左右，蒸發(fā)左右，蒸發(fā)的反應(yīng)液就不會(huì)產(chǎn)生凝集在管蓋上的反應(yīng)液就不會(huì)產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無(wú)需而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無(wú)需再向反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少再向

10、反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少后繼反應(yīng)的麻煩。后繼反應(yīng)的麻煩。 過(guò)松過(guò)松 過(guò)緊過(guò)緊 樣品基座樣品基座PCR反應(yīng)多在反應(yīng)多在0.2或者或者0.5的的管子中進(jìn)行，多數(shù)管子中進(jìn)行，多數(shù)PCR儀也配備了不同的儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管?？筛鼡Q樣品槽適配不同的樣品管。 eppendorf有一個(gè)有趣的設(shè)計(jì)，一個(gè)槽內(nèi)有一個(gè)有趣的設(shè)計(jì)，一個(gè)槽內(nèi)帶有帶有0.2和和0.5兩種不同樣品孔，不需更換兩種不同樣品孔，不需更換基座就可以分別使用兩種不同的反應(yīng)管基座就可以分別使用兩種不同的反應(yīng)管 ABI的的9700就可以更換不同的樣品槽就可以更換不同的樣品槽 軟件軟件新的新的PCR儀都比較注儀都比較注重程序編

11、寫的簡(jiǎn)易性。大屏幕，重程序編寫的簡(jiǎn)易性。大屏幕，顯示實(shí)時(shí)信息，倒計(jì)時(shí)，記憶顯示實(shí)時(shí)信息，倒計(jì)時(shí)，記憶存儲(chǔ)多個(gè)程序、自動(dòng)斷電保護(hù)存儲(chǔ)多個(gè)程序、自動(dòng)斷電保護(hù)等都有助于實(shí)驗(yàn)室中的復(fù)雜環(huán)等都有助于實(shí)驗(yàn)室中的復(fù)雜環(huán)境使用。境使用。 Biophotometer生物分光光度計(jì)生物分光光度計(jì)技術(shù)參數(shù)技術(shù)參數(shù) 光學(xué)系統(tǒng)：吸收單光束分光光度計(jì)，配有光學(xué)系統(tǒng)：吸收單光束分光光度計(jì)，配有基準(zhǔn)光束基準(zhǔn)光束 光源：氙燈光源：氙燈 波長(zhǎng)：氙波長(zhǎng)：氙230 nm; 260 nm; 280 nm; 320 nm; 562 nm; 595 nm 光譜帶寬：光譜帶寬：5 nm：230 nm320 nm，7 nm：562 nm 59

12、5 nm 光度計(jì)測(cè)定范圍：光度計(jì)測(cè)定范圍：0000 到到 3000 ABiophotometer 生物分光光度計(jì)使用常見問(wèn)答生物分光光度計(jì)使用常見問(wèn)答 答：答：DNA 的在的在Biophotometer 上能測(cè)定的最高濃度并上能測(cè)定的最高濃度并 沒(méi)有一個(gè)絕對(duì)的值，這是因?yàn)檫@個(gè)濃度跟使用的比色沒(méi)有一個(gè)絕對(duì)的值，這是因?yàn)檫@個(gè)濃度跟使用的比色皿光程和樣品的稀釋比例有關(guān)的。皿光程和樣品的稀釋比例有關(guān)的。 Biophotometer 測(cè)定的最大吸光度是測(cè)定的最大吸光度是3.0。 當(dāng)測(cè)定的當(dāng)測(cè)定的DNA 樣品吸光度大于樣品吸光度大于2.5時(shí)，建議采用時(shí)，建議采用2 mm 的比色皿光程替代的比色皿光程替代1

13、0 mm。 10 mm光程下測(cè)定的光程下測(cè)定的A260=2.5 時(shí)，相當(dāng)于時(shí)，相當(dāng)于125 g/ml 濃濃度的雙鏈度的雙鏈DNA，1.25 g/ml 的的1:10 稀釋。稀釋。 如果是在如果是在2 mm 光程光程6.25 g/ml 的的1:10 稀釋。稀釋。 答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能夠測(cè)定的最下能夠測(cè)定的最小吸光度是小吸光度是0.05，這個(gè)吸光度值相當(dāng)于濃度為，這個(gè)吸光度值相當(dāng)于濃度為2.5 g/ml 的雙鏈的雙鏈DNA 的吸光度約的吸光度約125 ng 雙雙鏈鏈DNA 溶解在溶解在50 l 溶液中），請(qǐng)確保核酸樣溶液中），請(qǐng)確保核酸樣品的吸光度必需大于品的吸

14、光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，其值才有效和可靠，因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值0.1。 答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能夠測(cè)定的最下能夠測(cè)定的最小吸光度是小吸光度是0.05，這個(gè)吸光度值相當(dāng)于濃度為，這個(gè)吸光度值相當(dāng)于濃度為2 g/ml 的的RNA的吸光度約的吸光度約100 ng 雙鏈雙鏈DNA 溶溶解在解在50 l 溶液中），請(qǐng)確保核酸樣品的吸光溶液中），請(qǐng)確保核酸樣品的吸光度必需大于度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因?yàn)闃悠?，其值才有效和可靠，因?yàn)闃悠分械碾s

15、質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光中的雜質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值有一定吸收，其值0.1。請(qǐng)注意，這。請(qǐng)注意，這個(gè)值跟儀器無(wú)關(guān)，核酸的吸光度必需大于個(gè)值跟儀器無(wú)關(guān)，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才，其值才有效和可靠，因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的有效和可靠，因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值干擾通常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值3.0A，請(qǐng)檢查，請(qǐng)檢查 1 比色皿是否被完全壓入比色皿槽內(nèi)，出現(xiàn)加比色皿是否被完全壓入比色皿槽內(nèi)，出現(xiàn)加號(hào)有可能是比色皿的基座擋住了光線的通路。號(hào)有可能是比色皿的基座擋住了光線的通路。 2 您使用的比色皿的中心高度是

16、否在您使用的比色皿的中心高度是否在8.5 mm ？ 3 比色皿中是否加入了足夠量的空白對(duì)照溶液？比色皿中是否加入了足夠量的空白對(duì)照溶液？ 答：答：A230 產(chǎn)生負(fù)值主要是由于在很低產(chǎn)生負(fù)值主要是由于在很低DNA 濃濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。 在下一個(gè)測(cè)定中，需要降低樣品的稀釋度，在下一個(gè)測(cè)定中，需要降低樣品的稀釋度，A230 的負(fù)值會(huì)被校正。的負(fù)值會(huì)被校正。 同時(shí)需要注意的是同時(shí)需要注意的是A260 的讀數(shù)也必需大于的讀數(shù)也必需大于0.1 才能保證可靠的結(jié)果。才能保證可靠的結(jié)果。 答：答：Bradford 方法中使用的試劑在和塑料長(zhǎng)期方法

17、中使用的試劑在和塑料長(zhǎng)期接觸后會(huì)使塑料發(fā)生損傷，這種試劑不可以在接觸后會(huì)使塑料發(fā)生損傷，這種試劑不可以在塑料比色皿中放置超過(guò)塑料比色皿中放置超過(guò)5 分鐘，測(cè)定值的波動(dòng)分鐘，測(cè)定值的波動(dòng)是由于試劑與塑料表面發(fā)生反應(yīng)后，導(dǎo)致吸光是由于試劑與塑料表面發(fā)生反應(yīng)后，導(dǎo)致吸光度發(fā)生變化而產(chǎn)生的，在使用這個(gè)方法時(shí)，建度發(fā)生變化而產(chǎn)生的，在使用這個(gè)方法時(shí)，建議使用玻璃比色皿。議使用玻璃比色皿。核酸與蛋白的電泳分析核酸與蛋白的電泳分析瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集分離效果比瓊脂糖好，條帶比較集中中可用于科研及檢測(cè)分析可用于科研及檢測(cè)分析電泳槽電泳

18、槽 水平平板水平平板 垂直平板垂直平板垂直電泳系統(tǒng)垂直電泳系統(tǒng)凝膠濃度選擇凝膠濃度選擇瓊脂糖濃度瓊脂糖濃度(%)線型線型DNA分子的分離范圍分子的分離范圍(Kb)0.35600.61200.70.8100.90.571.20.961.50.2312.00.12瓊脂糖凝膠的濃度與瓊脂糖凝膠的濃度與DNA分離范圍分離范圍電泳緩沖液電泳緩沖液 常用三種緩沖液常用三種緩沖液 Tris-硼酸硼酸TBE） Tris-乙酸乙酸TAE） Tris-磷酸磷酸TPE） TBE與與TPE：緩沖容量高，：緩沖容量高，DNA分離分離效果好，但效果好，但TPE在在DNA片段回收時(shí)含片段回收時(shí)含磷酸鹽濃度高，容易使磷酸鹽濃

19、度高，容易使DNA沉淀沉淀 TAE：緩沖容量低，但價(jià)格較便宜，：緩沖容量低，但價(jià)格較便宜，因而推薦選用因而推薦選用TAE。緩沖液中的。緩沖液中的 EDTA 可螯合二價(jià)陽(yáng)離子，從而抑制可螯合二價(jià)陽(yáng)離子，從而抑制DNA酶的活性，防止酶的活性，防止PCR擴(kuò)增產(chǎn)物降擴(kuò)增產(chǎn)物降解解核酸電泳的指示劑核酸電泳的指示劑 指示劑：指示劑： 溴酚蘭溴酚蘭 二甲苯青二甲苯青 溴酚蘭：在堿性液體中呈紫蘭色溴酚蘭：在堿性液體中呈紫蘭色 二甲苯青：水溶液呈蘭色二甲苯青：水溶液呈蘭色 電泳時(shí)，其遷移速率與雙鏈線性電泳時(shí)，其遷移速率與雙鏈線性DNA大致相當(dāng)大致相當(dāng)載樣緩沖液載樣緩沖液 指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖指示劑一般

20、與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成組成載樣緩沖液載樣緩沖液 作用：作用： 增加樣品密度，使其比重增加，以確保增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)均勻沉入加樣孔內(nèi) 在電泳中形成肉眼可見的指在電泳中形成肉眼可見的指示帶，可預(yù)測(cè)核酸電泳的速度和位置示帶，可預(yù)測(cè)核酸電泳的速度和位置 使樣品呈色，使加樣操作更方便使樣品呈色，使加樣操作更方便核酸電泳的染色劑核酸電泳的染色劑 最常用的染色劑最常用的染色劑 溴化乙錠溴化乙錠 銀染色銀染色蛋白電泳的染色劑蛋白電泳的染色劑 最常用的染色劑最常用的染色劑 考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G 考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán) R 溴化乙錠溴化乙錠ethidium bromi

21、de，EB） 是一種熒光染料，是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙鏈的分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒堿基對(duì)之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光光 可在凝膠電泳液中加入終濃度為可在凝膠電泳液中加入終濃度為0.5ug/ml的的EB，有時(shí)亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度，有時(shí)亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色的溶液中染色1015min 瓊脂糖凝膠瓊脂糖凝膠EB染色，肉眼可見核酸電泳帶，染色，肉眼可見核酸電泳帶，其其DNA量一般量一般5ng 溴化乙錠太多，凝膠染色過(guò)深，核酸電泳帶溴化乙錠太多，凝膠染色過(guò)深，核酸電泳帶看不清時(shí)，可將凝膠放入蒸餾水浸泡看不清時(shí)，可將凝膠放入

22、蒸餾水浸泡30min后再觀察后再觀察 銀染色：銀染色液中的銀離子銀染色：銀染色液中的銀離子(Ag+)可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，然后用還原劑如甲醛使然后用還原劑如甲醛使Ag+還原還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染色成銀顆粒，可把核酸電泳帶染色黑褐色黑褐色 主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色，也用于瓊脂糖凝膠染色色，也用于瓊脂糖凝膠染色 靈敏度比靈敏度比EB高高200倍，但銀染色倍，但銀染色后，后，DNA不宜回收不宜回收BIO-PROFIL凝膠成像分析系統(tǒng)凝膠成像分析系統(tǒng)主要用途主要用途 瓊脂糖電泳，聚丙烯酰胺電泳，瓊脂糖電泳，聚丙烯酰胺電泳，DNA、

23、RNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)1D2D電泳凝膠，電泳凝膠，Southern Northern和和Western印跡膜；印跡膜；點(diǎn)雜交膜；薄層層析板、點(diǎn)雜交膜；薄層層析板、TCL放射自放射自顯影膠片、菌落等樣品的圖像采集和顯影膠片、菌落等樣品的圖像采集和分析，可對(duì)核酸、蛋白質(zhì)的凝膠電泳分析，可對(duì)核酸、蛋白質(zhì)的凝膠電泳條帶進(jìn)行分子量大小及含量分析。條帶進(jìn)行分子量大小及含量分析。基本組成基本組成 密閉型機(jī)箱：密閉型機(jī)箱：一體化全封閉暗箱，設(shè)計(jì)精巧；最大程度上避一體化全封閉暗箱，設(shè)計(jì)精巧；最大程度上避免紫外線對(duì)人體的傷害。免紫外線對(duì)人體的傷害。 紫外透射臺(tái)：紫外透射臺(tái)：紫外光源波長(zhǎng)紫外光源波長(zhǎng)254/306/

24、365nm，紫外透射面積，紫外透射面積20 x25cm。 白光板可選）：白光板可選）：透射面積透射面積20 x25cm 相機(jī)：相機(jī)： 帶積分功能高清晰黑白攝像頭；高分辨率數(shù)碼帶積分功能高清晰黑白攝像頭；高分辨率數(shù)碼相機(jī)；高分辨率專業(yè)數(shù)字黑白相機(jī)；高分辨率專業(yè)數(shù)字黑白CCD攝像頭。攝像頭。 鏡頭：鏡頭： 電動(dòng)電動(dòng)/自動(dòng)鏡頭。自動(dòng)鏡頭。主要用途主要用途1） 圖像獲取圖像獲取 圖像獲取容易圖像獲取容易 可以以多種格式存儲(chǔ)可以以多種格式存儲(chǔ) 獲取粘貼板上的圖像、獲取粘貼板上的圖像、與其它軟件交換圖像與其它軟件交換圖像資源資源 圖像復(fù)制功能，對(duì)所圖像復(fù)制功能，對(duì)所獲取的原始圖像進(jìn)行獲取的原始圖像進(jìn)行剪切

25、、復(fù)制剪切、復(fù)制 主要用途主要用途2） 圖像處理圖像處理 彩色圖像轉(zhuǎn)換為黑白灰度彩色圖像轉(zhuǎn)換為黑白灰度圖像圖像 圖像的鏡像和旋轉(zhuǎn)圖像的鏡像和旋轉(zhuǎn) 圖像反色、即負(fù)片效果圖像反色、即負(fù)片效果 圖像的對(duì)比度亮度調(diào)整圖像的對(duì)比度亮度調(diào)整 圖像的均勻化、平整區(qū)域、圖像的均勻化、平整區(qū)域、背景校正背景校正 圖像的銳化、柔化、羽化、圖像的銳化、柔化、羽化、強(qiáng)化物體邊緣強(qiáng)化物體邊緣主要用途主要用途3） 圖像分析圖像分析 條帶定位：提取圖象中的條帶條帶定位：提取圖象中的條帶信息，確定泳道中是否有條帶信息，確定泳道中是否有條帶存在并定位存在并定位 分子量計(jì)算：在輸入分子量計(jì)算：在輸入Mark泳泳道中各條帶的已知分

26、子量后，道中各條帶的已知分子量后，由計(jì)算機(jī)求出指定未知條帶的由計(jì)算機(jī)求出指定未知條帶的分子量和分子量和bp值堿基對(duì)數(shù)）。值堿基對(duì)數(shù)）。 密度掃描：對(duì)指定泳道進(jìn)行掃密度掃描：對(duì)指定泳道進(jìn)行掃描，繪出掃描曲線，并計(jì)算出描，繪出掃描曲線，并計(jì)算出該泳道中各條帶的密度積分和該泳道中各條帶的密度積分和峰高峰高 背景去除：多種去背景的方法，背景去除：多種去背景的方法，并可對(duì)掃描曲線進(jìn)行去背景后并可對(duì)掃描曲線進(jìn)行去背景后矯正矯正 離心機(jī)離心機(jī)Avanti J-301高速冷凍離心機(jī)主要附件：主要附件：8*50ml角轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)Max 30000rpm） 10*100 ml角轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)Max 18000rpm）6*38.

27、5 ml水平轉(zhuǎn)頭水平轉(zhuǎn)頭Max 24000rpm）冷凍超速離心機(jī) 主要附件：主要附件：10*2ml角轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)Max 130000rpm） 8*8 ml角轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)Max 80000rpm）工作原理工作原理離心機(jī)離心機(jī):利用慣性離心力分離液態(tài)非均相混合物的機(jī)械。利用慣性離心力分離液態(tài)非均相混合物的機(jī)械。根據(jù)分離方式可分為：根據(jù)分離方式可分為：過(guò)濾式過(guò)濾式 分離式分離式沉降式。沉降式。若被處理的物料為懸浮液就稱為離心沉降；若被處理的物料為懸浮液就稱為離心沉降；若被處理的物料為乳濁液稱為離心分離。若被處理的物料為乳濁液稱為離心分離。 主要用途主要用途 主要用于各種生物大分子的分離、純主要用于各種生物大分子

28、的分離、純化、濃縮如對(duì)病毒、生物大分子、化、濃縮如對(duì)病毒、生物大分子、高聚化合物沉降等）高聚化合物沉降等） 同時(shí)還可進(jìn)行相對(duì)分子量的測(cè)定等。同時(shí)還可進(jìn)行相對(duì)分子量的測(cè)定等。轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)子 固定角轉(zhuǎn)子固定角轉(zhuǎn)子 水平轉(zhuǎn)子水平轉(zhuǎn)子 離心力公式：離心力公式： G (xg) = 11.18 (rpm/1000)2 x R R: radius rpm: round per minute離心機(jī)的分類離心機(jī)的分類分離因數(shù)分離因數(shù)KC：離心力與重力之比即離心力與重力之比即U2T /Rg）根據(jù)根據(jù)KC 分為分為常速常速 KC 50000 （90000rpm)離心機(jī)使用注意事項(xiàng)離心機(jī)使用注意事項(xiàng) 揮發(fā)性或腐蝕性液體離心

29、時(shí)，應(yīng)揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故 要等到轉(zhuǎn)速為零時(shí)才能打開離心要等到轉(zhuǎn)速為零時(shí)才能打開離心機(jī)蓋機(jī)蓋, ,取出樣品。取出樣品。離心機(jī)的正確操作方法離心機(jī)的正確操作方法 離心管的安放：平衡離心管的安放：平衡離心速度的設(shè)定離心速度的設(shè)定 離心力與離心率離心力與離心率 離心速度必需根據(jù)離心樣品的平均離心速度必需根據(jù)離心樣品的平均密度確定密度確定 For Angle Rotor For Swing Rotor使用后的維護(hù)與保養(yǎng) 注意腔底的周邊清潔注意腔底的周邊清潔O O圈的作用圈的作用 密閉

30、真空，防止樣品飛濺密閉真空，防止樣品飛濺 生物安全防護(hù)，阻止有害生物樣生物安全防護(hù)，阻止有害生物樣品外泄品外泄 增加蓋子與轉(zhuǎn)子體的阻尼，防止增加蓋子與轉(zhuǎn)子體的阻尼，防止蓋子松脫蓋子松脫Thermo Forma高溫滅菌二氧化碳培養(yǎng)箱高溫滅菌二氧化碳培養(yǎng)箱工作原理工作原理 通過(guò)在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)通過(guò)在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個(gè)類似細(xì)胞胞/組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境如：組織在生物體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境如： 恒定的酸堿度恒定的酸堿度pH值：值：7.2-7.4） 穩(wěn)定的溫度穩(wěn)定的溫度37C） 較高的相對(duì)濕度較高的相對(duì)濕度95%） 穩(wěn)定的穩(wěn)定的CO2水平水平5%） 來(lái)對(duì)細(xì)胞來(lái)對(duì)細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一

31、種裝置。組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置。 二氧化碳培養(yǎng)箱的基本的要求二氧化碳培養(yǎng)箱的基本的要求 一是能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度一是能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供最精確穩(wěn)定的控制和濕度提供最精確穩(wěn)定的控制 二是能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污二是能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范，并且能夠定染進(jìn)行有效的防范，并且能夠定期消除污染期消除污染 溫控系統(tǒng)溫控系統(tǒng) 溫度控制溫度控制 根據(jù)加熱方式分為氣套式和水套式根據(jù)加熱方式分為氣套式和水套式 具備相互獨(dú)立三重溫度控制功能的二氧具備相互獨(dú)立三重溫度控制功能的二氧化碳培養(yǎng)箱，即箱內(nèi)溫度控制、超溫報(bào)化碳培養(yǎng)箱，即箱內(nèi)溫度控制、超溫報(bào)警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。二氧化碳濃度控制二氧化碳濃度控制紅外傳感器IR或熱導(dǎo)傳感器TCD） 帶有CO2測(cè)量系統(tǒng)自動(dòng)校準(zhǔn)功能防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng)防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng)紫外消毒 HEPA過(guò)濾器高溫消毒 高溫干熱和高溫濕熱 高壓消毒鍋高壓消毒鍋相關(guān)概念介紹相關(guān)概念介紹 滅菌滅菌sterilization） 是指殺滅一切活的微生物。是指殺滅一切活的微生物。 消毒消毒disinfection） 是指殺滅病原微生物和其他有害微生是指殺滅病原微生物和其他有害微生 物，并不要求清除或殺滅所有微生物。物，并不要求清除或殺滅所有微生物。方法方法 滅菌方法可分為四種：物理、機(jī)滅菌方法可分為四種：物