實驗三食品中金黃色葡萄球菌的檢驗ppt課件

1、實驗三 食品中金黃色葡萄球菌的檢測o 檢測方法：檢測方法：o 1、參照、參照GB 4789.10-2019金黃色葡萄金黃色葡萄球菌檢測球菌檢測o 2、食品微生物學(xué)實驗原理與技術(shù)、食品微生物學(xué)實驗原理與技術(shù)實驗實驗三十三十 食品中金黃色葡萄球菌檢測食品中金黃色葡萄球菌檢測o 實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模簅 1、了解金黃色葡萄球菌檢驗原理；、了解金黃色葡萄球菌檢驗原理；o 2、掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點和檢驗方、掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點和檢驗方法法 金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬的一個種，可引起皮膚組織炎癥，還能產(chǎn)生腸毒素，如果在食品中大量生長繁殖并產(chǎn)生毒素，可引起食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對人的

2、健康是一種潛在的危險，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數(shù)量具有實際意義。o金黃色葡萄球菌性質(zhì)及培養(yǎng)特征金黃色葡萄球菌性質(zhì)及培養(yǎng)特征o1、革蘭氏陽性球菌，排列為葡萄狀，、革蘭氏陽性球菌，排列為葡萄狀，無芽孢、無莢膜。無芽孢、無莢膜。金黃色葡萄球菌的金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片掃描電鏡照片 經(jīng)經(jīng)1824小時培養(yǎng)后形成圓形隆起、邊小時培養(yǎng)后形成圓形隆起、邊緣整齊、表面光滑、潮濕、不透明的菌落，直徑緣整齊、表面光滑、潮濕、不透明的菌落，直徑為為12mm，不同菌株可產(chǎn)生不同色素，出現(xiàn)，不同菌株可產(chǎn)生不同色素，出現(xiàn)金黃色、白色、檸檬色。金黃色、白色、檸檬色。 大腸桿菌在普通營養(yǎng)瓊脂上的菌落特征：大腸桿菌在普通營

3、養(yǎng)瓊脂上的菌落特征：中等大小、圓形、表面光滑、無色半透明、邊緣中等大小、圓形、表面光滑、無色半透明、邊緣整齊整齊2 2、在普通營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落特征：、在普通營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落特征： 金黃色葡萄球菌在普通營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落金黃色葡萄球菌在普通營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落3 3、具有高耐鹽性，在、具有高耐鹽性，在7.5%7.5%氯化鈉肉湯中呈現(xiàn)渾濁生氯化鈉肉湯中呈現(xiàn)渾濁生長；長；4 4、在、在BPBP平板上菌落特征：圓形、光滑凸起，潮濕，平板上菌落特征：圓形、光滑凸起，潮濕，直徑為直徑為2 23mm3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈；

4、周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈；5 5、在血平板上菌落特征：呈金黃色，有時也呈白色，、在血平板上菌落特征：呈金黃色，有時也呈白色，大而凸起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶大而凸起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈；血圈；BPBP培養(yǎng)基上的菌落培養(yǎng)基上的菌落血平板上的菌落血平板上的菌落6、血漿凝固酶試驗、血漿凝固酶試驗 致病性菌株可以產(chǎn)致病性菌株可以產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿生血漿凝固酶，使血漿發(fā)生凝固。發(fā)生凝固。o原理：原理：o 鑒定食品中金黃色葡萄球菌：根鑒定食品中金黃色葡萄球菌：根據(jù)以上性質(zhì)逐步確定。據(jù)以上性質(zhì)逐步確定。 o 鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標

5、：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝血漿要指標：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝血漿酶，使血漿凝固；多數(shù)金黃色葡萄球菌酶，使血漿凝固；多數(shù)金黃色葡萄球菌致病菌株能產(chǎn)生溶血毒素，使血瓊脂平致病菌株能產(chǎn)生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)溶血反應(yīng)。溶血反應(yīng)。o實驗材料：實驗材料：o1、樣品：（、樣品：（1含有大腸桿菌和金黃含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的水樣色葡萄球菌的水樣 （2鮮奶鮮奶o2、培養(yǎng)基與試劑：、培養(yǎng)基與試劑：7.5%氯化鈉肉湯、氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、血瓊脂平板、Baird-Parker氏培養(yǎng)氏培養(yǎng)基、無菌水、革蘭氏染色劑基、無菌水、革蘭氏染色劑o3、器

6、具及其他用品：顯微鏡、恒溫培、器具及其他用品：顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、無菌吸管、無菌試管、無菌平皿、養(yǎng)箱、無菌吸管、無菌試管、無菌平皿、載玻片、涂布器、酒精燈、接種環(huán)等載玻片、涂布器、酒精燈、接種環(huán)等流程1 1、增菌培養(yǎng)法、增菌培養(yǎng)法1.11.1檢樣處理：無菌操作取樣檢樣處理：無菌操作取樣25g25gmLmL加入加入225mL225mL滅滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或均質(zhì)制成混懸液。菌生理鹽水，固體樣品研磨或均質(zhì)制成混懸液。1.21.2增菌及分離培養(yǎng)：吸取增菌及分離培養(yǎng)：吸取5mL5mL上述混懸液，接種于上述混懸液，接種于7.5%7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL5

7、0mL培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)基內(nèi)，363611培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h，轉(zhuǎn)種血平板和，轉(zhuǎn)種血平板和BPBP平板，平板， 363611培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h，挑取血平板上金黃色有時，挑取血平板上金黃色有時為白色菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶為白色菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶實驗。實驗。1.3兔血漿凝固酶試驗：兔血漿凝固酶試驗： 吸取吸取1：4新鮮兔血漿新鮮兔血漿0.5mL，放入，放入小試管中，再加入培養(yǎng)小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，振蕩搖勻，置置361溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察察一次，

8、觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認為陽性傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認為陽性結(jié)果，同時與已知陽性和陰性葡萄球菌菌結(jié)果，同時與已知陽性和陰性葡萄球菌菌株及肉湯作為對照。株及肉湯作為對照。2.1 2.1 梯度稀釋轉(zhuǎn)種梯度稀釋轉(zhuǎn)種BPBP平板平板 吸取上述吸取上述1 1：1010混懸液，進行混懸液，進行1010倍第倍第次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液度的稀釋液1mL1mL，分別加入三塊，分別加入三塊BPBP平板，每平板，每個平板接種量分別為個平板接種量分別為0.3mL0.3mL、0.3mL0.3mL、0

9、.4mL0.4mL，然后用滅菌涂布器涂布整個平板，如水分然后用滅菌涂布器涂布整個平板，如水分多不易吸收，可將平板放在多不易吸收，可將平板放在363611h11h，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置363611培育。培育。2、直接計數(shù)方法、直接計數(shù)方法2.2轉(zhuǎn)種血平板轉(zhuǎn)種血平板 在三個平板上尋找周圍有渾濁帶的黑在三個平板上尋找周圍有渾濁帶的黑色菌落，并從中任選五個菌落，分別接色菌落，并從中任選五個菌落，分別接種血平板，種血平板， 于于361培養(yǎng)培養(yǎng)24h后進后進行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗，步驟同行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗，步驟同增菌培養(yǎng)方法。增菌培養(yǎng)方法。2.3 2.3 菌落計數(shù)菌落計

10、數(shù) 將三個平板中疑似金黃色葡萄球?qū)⑷齻€平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽性數(shù)，除以陽性數(shù)，除以5 5，再乘以稀釋倍數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。數(shù)。結(jié)果結(jié)果1.1.根據(jù)形態(tài)特征、血平板情況以及血漿凝固酶根據(jù)形態(tài)特征、血平板情況以及血漿凝固酶試驗，判別檢樣中是否含有金黃色葡萄球菌。試驗，判別檢樣中是否含有金黃色葡萄球菌。2.2.估算檢樣中金黃色葡萄球菌的含量。估算檢樣中金黃色葡萄球菌的含量。GB 4789.10-2019GB 4789.10-2019第第一一法法 金金黃黃色色葡葡萄萄球

11、球菌菌定定性性檢檢驗驗GB 4789.10-2019GB 4789.10-2019第二法第二法 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 Baird-Parker平板計數(shù)平板計數(shù)GB 4789.10-2019GB 4789.10-2019第三法第三法 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌MPN計計數(shù)數(shù)三法特點及適用性：三法特點及適用性：o 第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗定性檢驗o 第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的的o 食品中金黃色葡萄球菌的計數(shù)食品中金黃色葡萄球菌的計數(shù)o 第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低第三法適用于金黃色葡萄球

12、菌含量較低而雜菌含量較高的食品中金黃色葡萄球而雜菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計數(shù)。菌的計數(shù)。 實 驗 安 排1 1、實驗時間：、實驗時間：2 2、分組：每、分組：每3 3人一組人一組3 3、評分標準：見附表、評分標準：見附表1 1考核要素考核要素評分要素評分要素評分細則評分細則菌的菌的鑒別鑒別10分分菌落形態(tài)、菌落形態(tài)、色澤觀察色澤觀察對菌的特征熟悉、識別正確（對菌的特征熟悉、識別正確（10分）分）對菌的特征較熟悉，基本能識別（對菌的特征較熟悉，基本能識別（10分）分）不熟悉，識別不正確（不熟悉，識別不正確（5分以下）分以下）菌的菌的分離分離10分分接種操作接種操作5分分操作規(guī)范、熟練、能分離出單個菌落操作規(guī)范、熟練、能分離出單個菌落45分分基本規(guī)范、熟練，基本能分離出單個菌落基本規(guī)范、熟練，基本能分離出單個菌落24分分不熟練，分離差（不熟練，分離差（02分）分）分離效果分離效果5分分效果好，有單個菌落（效果好，有單個菌落（45分）分）能基本分離