探究性實(shí)驗(yàn)一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用PPT課件

1、課題課題1、微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用 途工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種分類、鑒定工業(yè)生產(chǎn)鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)培養(yǎng)基成分明確液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加某種指示劑或化學(xué)藥品培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以

2、抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽)第1頁/共19頁目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇不同的原料配制 培養(yǎng)基營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例、PH 要適宜2.培養(yǎng)基的配制原則和營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基的配制原則和營養(yǎng)構(gòu)成(1)培養(yǎng)基的配制原則(2)培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源 和無機(jī)鹽。不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 第2頁/共19頁3配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟及注意事項(xiàng)配制

3、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟及注意事項(xiàng)(1)步驟：(2)注意事項(xiàng)計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板倒平板的溫度一般在50左右適宜，溫度過高會(huì)燙手，過低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 第3頁/共19頁4純化大腸桿菌的操作過程及注意事項(xiàng)(1)原理：(2)方法：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。平板劃線法、稀釋涂布平板法平板劃線法中細(xì)胞的分離和稀釋過程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板表面上的移動(dòng)劃線過程中。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成純種

4、的單個(gè)菌落。(如下圖)平板劃線法：第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌。 灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。注意:第4頁/共19頁稀釋涂布平板法：.系列稀釋操作(圖1)：a將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號(hào)。b用移液管吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。 c從101倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)b步混勻操作。以此類推，直到完成最后1支試管的稀釋

5、。第5頁/共19頁.涂布平板操作如圖2所示：稀釋涂布平板操作復(fù)雜，各個(gè)細(xì)節(jié)均應(yīng)保證稀釋涂布平板操作復(fù)雜，各個(gè)細(xì)節(jié)均應(yīng)保證“無菌無菌”。具體如下：。具體如下：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管要在酒精燈火焰周圍使用。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。注意：第6頁/共19頁對(duì)位訓(xùn)練1有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述中，錯(cuò)誤的是()A首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C適宜條件下培養(yǎng)D結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落2分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47

6、H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請(qǐng)完成下列問題。(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_和_。(2)想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？_。D答案(1)葡萄糖尿素(2)有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏矗虼?，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長第7頁/共19頁課題課題2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1篩選菌株的原理篩選菌株的原理2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法3細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程4該實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)該實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)5對(duì)位訓(xùn)練第8頁/共19頁課題課題2、土壤中分

7、解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1篩選菌株的原理篩選菌株的原理微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法原理：方法：缺點(diǎn)：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌。用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。第9頁/共19頁每克樣品中的菌株數(shù)(CV)M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌

8、落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。操作：a設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。b為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式：第10頁/共19頁土壤取樣樣品稀釋取樣涂布微生物的培養(yǎng)觀察并記錄結(jié)果細(xì)菌計(jì)數(shù)稀釋度104 105106123平均值123平均值123平均值菌落數(shù)/平板菌數(shù)/克土壤3細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程第11頁/共19頁4該實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)該實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)(1)設(shè)立重復(fù)組：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時(shí)，要至少涂布3個(gè)平板作重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。(2)對(duì)照原

9、則判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。誤區(qū)警示牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基應(yīng)各有一個(gè)空白對(duì)照，即不涂布菌液，目的是驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含雜菌。樣品稀釋度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)。第12頁/共19頁3分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，對(duì)培養(yǎng)基的要求是 ()加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A BC D5對(duì)位訓(xùn)練4在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。產(chǎn)生A同學(xué)

10、結(jié)果的原因可能有 ()土樣不同培養(yǎng)基污染操作失誤沒有設(shè)置對(duì)照A BC DCA第13頁/共19頁5用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是 ()A涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是216和260，取平均值238C涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212、256，取平均值163D涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、241和248，取平均值233D第14頁/共19頁課題課題3、分解纖維素的微生物的分離、分解纖維素的微生物的分離1纖維素酶纖維素酶2纖維素分解菌的篩選原理纖維素分解菌的篩選

11、原理3土壤中纖維素分解菌的篩選流程土壤中纖維素分解菌的篩選流程4對(duì)位訓(xùn)練第15頁/共19頁1纖維素酶纖維素酶纖維素 纖維二糖 葡萄糖C1酶CX酶葡萄糖苷酶2纖維素分解菌的篩選原理纖維素分解菌的篩選原理紅色復(fù)合物 紅色消失，出現(xiàn)透明圈纖維素分解菌纖維素酶剛果紅纖維素纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纖維素的作用，其作用過程如下：第16頁/共19頁土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。3土壤中纖維素分解菌的篩選流程土壤中纖維素分解菌的篩選流程提醒纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，因培養(yǎng)基中無凝固劑，利用液體培養(yǎng)基以增加纖維素分解菌的濃度。選擇培養(yǎng)基以纖維素做碳源和能源，其它絕大多數(shù)微生物不能正常生長；鑒別培養(yǎng)基因含瓊脂，故為固體培養(yǎng)基，剛果紅染色法就是應(yīng)用的此培養(yǎng)基。為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定。流程中的“選擇培養(yǎng)”是