堿性成纖維細胞生長因子在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達的

1、堿性成纖維細胞生長因子在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達的意義    作者：劉艷波沈維高趙雪儉    【摘要】 目的 探討堿性成纖維細胞生長因子(bFGF) 在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達的意義。方法采用斑點雜交和免疫組化法測定50 例正常前列腺組織(正常對照組)、40 例良性前列腺肥大(BPH)組織和48 例前列腺癌組織中bFGF 的表達情況。結果 BPH和前列腺癌組織中bFGF的表達明顯高于正常對照組(P0?01)。bFGF 表達升高的程度與BPH的分度、前列腺癌的病理分級和臨床分期關系不顯著。結論 b

2、FGF 與前列腺癌和前列腺增生的發(fā)生發(fā)展過程有關。    【關鍵詞】 前列腺增生；前列腺癌；堿性成纖維細胞生長因子(bFGF) 前列腺癌和前列腺增生是老年男性常見疾病。近年來研究資料表明前列腺癌和前列腺增生組織中存在許多分子表達異常，但是對其發(fā)病機制尚缺乏統(tǒng)一的認識1,2。堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是一種常見的內皮細胞分裂原，通過自分泌或旁分泌機制促進血管的生成、組織再生、抑制細胞凋亡及增強細胞侵襲能力等，與許多疾病的發(fā)生發(fā)展關系密切。研究結果顯示bFGF在前列腺癌和前列腺增生的發(fā)病過

3、程中也發(fā)揮重要的作用37。我們采用斑點雜交和免疫組化染色方法,觀察了bFGF 在正常前列腺、良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia，BPH)和前列腺癌組織中的表達及其與臨床的關系,并探討其臨床意義。 1 材料與方法 1?1 材料    選取吉林大學第三臨床醫(yī)院手術切除的BPH標本40例，年齡5573（平均62）歲。Rous分度:度8 例,度12例，度9例，度11例。前列腺癌標本48 例，年齡5471（平均66) 歲。WHO分級：高分化15例，中分化19例，低分化14例；Whitmore?Jewett 分期：A期12例,B期

4、10例，C期16例，D 期10例。另取50例意外死亡者的正常前列腺標本作為對照，年齡3659 （平均49）歲。 1?2 試劑    熒光素標記試劑盒購自華美公司。鼠抗人bFGF 單抗(mAb) 購自Invitrogen 公司。兔抗鼠IgG和ELISA試劑購自福州邁新生物試劑公司。限制性內切酶EcoR和Hind購自寶生物公司。DAB顯色試劑盒購自南京建成生物試劑公司。 1?3 方法 1?3?1 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的斑點雜交    探針制備和標記：bFGF 質粒轉化、擴增及提取，參照文獻4方法進行，所得bF

5、GF 質粒經EcoR和Hind酶切回收探針片段。探針標記采用熒光素標記試劑盒隨機引物法。細胞總RNA 提?。翰捎卯惲蚯杷犭乙徊椒āNA斑點雜交：以相同濃度總RNA點膜。檢測：采用試劑盒發(fā)光自顯影法檢測，顯影膠片應用計算機圖像分析技術測定斑點平均吸光度( A) 值。 1?3?2 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的免疫組化染色    鼠抗人bFGF mAb 孵育前，用微波爐進行抗原修復10 min，鼠抗人bFGF mAb 的工作濃度1100。用PBS 代替鼠抗人bFGF mAb 作為陰性對照，以DAB顯色，透明封片。 1?4 判定標準  

6、  所有陽性染色特征為棕黃色顆粒，位于細胞胞質內。隨機觀察510 個視野，計算100 個腺上皮細胞或癌細胞陽性細胞數(shù)，取其均值。陽性細胞數(shù)10%者(-)，10%29%者( )，30%59%者(?)，60%者(?)。 1?5 統(tǒng)計學處理    應用SPSS10?0軟件包進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用x±s表示，采用2及秩和檢驗。 2 結果 2?1 各組bFGF mRNA表達量比較    正常對照組中bFGF mRNA表達量低（23±11）， BPH組（178±29）和前列腺癌組

7、（265±24）中bFGF mRNA表達較高。前列腺癌及BPH組織中mRNA表達水平與正常對照組之間比較差異顯著(P0?05) 。 2?2 不同分化程度的BHP組織中bFGF mRNA表達水平比較    BHP、度組織bFGF mRNA表達水平(pg/l)分別為197±24（n=8）、186±27（n=12）、169±22（n=9）、188±31（n=11）。經方差分析,4組組間bFGF mRNA的表達無明顯差異,提示bFGF mRNA的表達與BPH的分化無明顯關系。 2?3 不同分化程度的前列腺癌組織中

8、bFGF mRNA表達水平比較    高、中、低分化的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達水平(pg/l)分別為273±28（n=15）、261±29（n=19）、254±20（n=14）。經方差分析,三者bFGF mRNA的表達無明顯差異,提示bFGF mRNA的表達與前列腺癌的病理分級無明顯關系。 2?4 各組免疫組化染色結果比較    見圖1。正常對照組 bFGF呈陰性,BPH組陽性表達率為72?5%(29/40)，與正常對照組比較差異顯著(P0?05) 。BPH陽性病例中,陽性

9、染色主要位于基質細胞。前列腺癌組bFGF 的表達率為76?7%(36/48)，其中“ ”15 例,“?”19例,“?”14例，陽性染色位于癌細胞質,與正常對照組比較差異顯著(P0?05) 。bFGF 的染色強度與前列腺癌的病理分級、臨床分期及BPH 的分度均無圖1    各組組織中bFGF免疫組化染色明顯關系(P0?05)。 2?5 不同Whitmore?Jewett 分期的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達水平比較    A、B、C、D各期的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達水平(pg/l)分別為248

10、77;31（n=12）、259±19（n=10）、264±26（n=16）、257±28（n=10）。經方差分析,4組組間bFGF mRNA的表達無明顯差異,提示bFGF mRNA 的表達與前列腺癌的臨床分期無明顯關系。    3 討 論     bFGF基因位于人的第5對染色體上，為單拷貝基因，呈不連續(xù)狀態(tài)，其功能區(qū)被兩個內含子隔開分為3個外顯子區(qū)域。bFGF基因長度大于38 kb，第一個內含子位于第60、61位密碼間，第二個內含子位于第94、95位密碼子之間。bFGF主要分布于垂體

11、、腦和神經組織及視網膜、腎上腺、胎盤等，尤以垂體含量最高。bFGF作為細胞分裂原，主要作用于起源于中胚層和神經外胚層的骨骼肌細胞、成纖維細胞和骨細胞等，其受體也相應分布于上述細胞表面。bFGF 是由146 個氨基酸組成的多肽生長因子,其在體內的形式為相對分子質量分別為16、18?5和24 kD等幾種同種異構體。     我們應用斑點雜交法發(fā)現(xiàn)，bFGF mRNA 在正常前列腺組織中表達量非常低，在BPH組織和前列腺癌組織中高表達較高。通過免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)，bFGF主要存在于前列腺癌的基質細胞中6，少量在細胞上皮內存在。其機制可能是IL?1和IL?8

12、誘導bFGF表達在BPH的發(fā)生發(fā)展中起著至關重要的作用2，另外，bFGF還可激活多種信號轉導通路，包括磷脂酰肌醇?3激酶（Akt）通路，Ras?MAP激酶通路，蛋白激酶?C(PKC)依賴的信號轉導通路，從而促進腫瘤的發(fā)生及發(fā)展8。體外細胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，雄激素與PC?3細胞表面的雄激素受體結合后，可促進其分泌bFGF結合蛋白,活化PC3細胞分泌bFGF，從而促進前列腺癌細胞增殖，并維持雄激素受體表達9。        本研究結果顯示，bFGF mRNA 的表達與BPH 的分化、前列腺癌的臨床分期及病理分級，均無明顯的相關

13、性(P0?05)。Boget等10通過RT2PCR 法研究發(fā)現(xiàn)，BPH 組織中bFGF mRNA 的表達較正常前列腺組織中高23倍，在前列腺癌組織中bFGF mRNA 同樣呈過度表達。邱建新等11通過半定量RT?PCR 法研究發(fā)現(xiàn)，BPH 組織中FGF mRNA的表達明顯高于正常前列腺組織，bFGF mRNA轉錄是重要的促細胞分裂原，可通過自分泌或旁分泌方式作用細胞，促進細胞的分裂和增殖。bFGF在前列腺組織中表達增加與細胞增生和細胞增殖關系密切，其機制有待于進一步探討。 【參考文獻】 1 Deshmukh N，Scotson J，Dodson AR,et al?Differential ex

14、pression of acidic and basic fibroblast growth factors in benign prostatic hyperplasia identified by immunohistochemistryJ?Br J Urol，1997;80:869?74?2 Giri D，Ittmann M?Interleukin?8 is a paracrine inducer of fibroblast growth factor 2，a stromal and epithelial growth factor in benign prostatic hyperpl

15、asiaJ?Am J Pathol，2001;159:139?47?3 Sinowatz F，Schams D，Einspanier R,et al?Cellular localization of fibroblast growth factor 2 (FGF?2) in benign prostatic hyperplasiaJ?Histol Histopathol，2000;15:475?81?4 Giri D，Ittmann M?Interleukin?1alpha is a paracrine inducer of FGF7，a key epithelial growth facto

16、r in benign prostatic hyperplasiaJ?Am J Pathol,2000;157:249?55?5 Giri D，Ittmann M?Interleukin?8 is a paracrine inducer of fibroblast growth factor 2，a stromal and epithelial growth factor in benign prostatic hyperplasiaJ?Am J Pathol，2001;159:139?47?6 Karsten Gravdal，Halvorsen OJ，Haukaas SA,et al?Exp

17、ression of bFGF/FGFR?1 and vascular proliferation related to clinicopathologic features and tumor progress in localized prostate cancerJ?Virchows Arch，2006;448:6874?7 Yuebo Gan，M?Guillaume Wientues，Jessie L?S?Au?Expression of basic fibroblast growth factor correlates with resistance to paclitaxel in

18、 human patient tumorsJ?Pharmaceutical Research，2006；23 (6)：1324?8 Friesel RE，Maciag T?Molecular mechanisms of angiogenesis：fibroblast growth factor signal transductionJ?FASEB J,1995;9(10):919?25?9 Giri D，Ropiquet F，Ittmann M?Alterations in expression of basic fibroblast growth factor (FGF) 2 and its receptor FGFR?1 i