第14章液相色譜法

1、第20章 高效液相色譜法High Performance Liquid Chromatography(HPLC)Akta explorer高壓層析系統(tǒng)紫外在線檢測用高壓輸送（最高輸送壓力可達用高壓輸送（最高輸送壓力可達4.5 107Pa）流動相）流動相（液體），用（液體），用以特殊方法用小粒徑填料（固定相）以特殊方法用小粒徑填料（固定相）填充而成的色譜柱分離，同時柱后連有高靈敏度檢填充而成的色譜柱分離，同時柱后連有高靈敏度檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測的液相色譜測器，可對流出物進行連續(xù)檢測的液相色譜HPLC是在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎上發(fā)展起來的是在經(jīng)典液相色譜和氣相色譜的基礎上發(fā)展起來的

2、柱內徑柱內徑15cm 0.4cm柱長度柱長度50100cm1550cm填充物粒度填充物粒度 150200 m410 m使用壓力使用壓力110atm50200atm分離時間分離時間0.5 1天天 10min 高效、高速和高靈敏度高效、高速和高靈敏度 GC采用的流動相中為有限的幾種采用的流動相中為有限的幾種“惰性惰性”氣體，在分氣體，在分離離 中只起運載作用，對組分作用??；中只起運載作用，對組分作用??； HPLC采用的流動相為液體或各種液體的混合，可供采用的流動相為液體或各種液體的混合，可供 選擇的機會多；它除了起運載作用外，還對分離產(chǎn)生選擇的機會多；它除了起運載作用外，還對分離產(chǎn)生 很大貢獻（分

3、離可通過流動相控制或改進）很大貢獻（分離可通過流動相控制或改進） 流動相對分離起重要作用，且可以選擇的流動相種類很多流動相對分離起重要作用，且可以選擇的流動相種類很多 GC常在高流速和高溫下進行；常在高流速和高溫下進行； HPLC常在低流速和室溫下進行。常在低流速和室溫下進行。 流動相流速與操作溫度低流動相流速與操作溫度低 開管開管GC中無渦流擴散項，柱內效應主要由分子擴散決定中無渦流擴散項，柱內效應主要由分子擴散決定 HPLC中分子擴散可以忽略，柱內效應主要由渦流擴散和中分子擴散可以忽略，柱內效應主要由渦流擴散和 傳質阻力決定傳質阻力決定 柱內效應的影響因素與程度不同柱內效應的影響因素與程度

4、不同 操作壓力高操作壓力高 GC采用低壓采用低壓(2000）的化合物）的化合物以以多孔凝膠多孔凝膠為固定相，依據(jù)為固定相，依據(jù)組分分子大小和形狀的不同組分分子大小和形狀的不同進行分進行分離的液相色譜法。離的液相色譜法。比凝膠孔徑大的分子不能進入孔穴中而被排阻，最早出峰，比凝膠比凝膠孔徑大的分子不能進入孔穴中而被排阻，最早出峰，比凝膠孔徑小得多的小分子則完全滲透，最后流出色譜柱，中等大小的分孔徑小得多的小分子則完全滲透，最后流出色譜柱，中等大小的分子部分滲透，則按其分子大小，分子量大的先后從柱中流出。子部分滲透，則按其分子大小，分子量大的先后從柱中流出。類型類型 材料材料 型號型號 特點特點 流動相流動相 葡萄糖凝膠葡萄糖凝膠 Sephadax 水水 軟性凝膠軟性凝膠 聚苯乙烯聚苯乙烯 Bio-head-S 溶脹溶脹,小分小分子分離子分離 有機溶劑有機溶劑 聚苯乙烯聚苯乙烯 Styragel 有機溶劑有機溶劑 半剛性凝膠半剛性凝膠 聚乙酸酯聚乙酸酯 Emgel(OR) 溶脹溶脹較小較小流速較小流速較小 有機溶劑有機溶劑 玻璃珠玻璃珠 CPG-10 有機溶劑和水有機溶劑和水 剛性凝膠剛性凝膠 多孔硅膠多孔硅膠 Porasil 剛性大、剛性大、高高流速分離流速分離 有機溶劑和水有機溶劑和水 極性增加極性增加不溶于水不溶于水溶于水溶于水非極性非極