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IP屬地：江西 上傳時間：2022-02-05 格式：PPT 頁數(shù)：63 大?。?71KB 積分：12 舉報 版權(quán)申訴

1、輸血相關(guān)傳染病檢測技術(shù)概 述甘肅省平?jīng)鍪兄行难緦?shí)驗(yàn)室 吳 宏 濤輸血相關(guān)傳染病種類 病毒性肝炎 乙、丙、丁、庚型肝炎 艾滋病 梅毒 巨細(xì)胞病毒 EBV感染 HTLV感染（美國、歐盟及我國的廈門血站開展） 瘧疾 弓形體病等輸血相關(guān)傳染病檢測方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA* 免疫熒光法IFA 放射免疫法RIA 免疫印跡法WB* 重組免疫印跡法RIBA 顆粒凝集實(shí)驗(yàn)PA 病毒檢測VT 病毒核酸檢測NAT*酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA 建于1971年。開創(chuàng)了運(yùn)用酶標(biāo)記免疫技術(shù)進(jìn)行液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定，是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的里程碑式的發(fā)展。 特點(diǎn)：敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡便，即可測定抗原，也可測定抗體。

2、類型：間接法，直接法，雙抗體夾心法，競爭抑制法或競爭法。免疫熒光法IFA 熒光抗體技術(shù) 熒光抗原技術(shù) 原理： 以特異抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)，利用熒光素作為標(biāo)記物標(biāo)記已知抗原（或抗體），在一定條件下與被測標(biāo)本中相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，此時熒光素起示蹤物作用。再通過有紫外光源的熒光顯微鏡就可以辨認(rèn)出特異性抗原抗體復(fù)合物的存在。放射免疫法RIA 一種用放射性同位素為標(biāo)記物的免疫學(xué)測定方法，具有很高的敏感性與特異性。其原理與ELISA大致相同，所不同的是用放射性同位素為標(biāo)記物而不是用酶為標(biāo)記物。免疫印跡試驗(yàn)WB 又名蛋白印跡試驗(yàn)，其原理是在病毒裂解后將不同分子量的病毒蛋白經(jīng)十二烷基硫

3、酸鈉（SDS）聚丙烯胺凝膠電泳（PAGE）分離后，經(jīng)過電轉(zhuǎn)移將凝膠上的蛋白條帶轉(zhuǎn)移到位硝酸纖維素膜上，以此作為抗原進(jìn)行病毒特異性抗體檢測。重組免疫印跡試驗(yàn)RIBA 原理：應(yīng)用重組蛋白或合成肽（而不是直接應(yīng)用病毒裂解的蛋白）以條帶形式吸附在硝酸纖維素膜條上，當(dāng)條上加入被測血清標(biāo)本溫育后，如果標(biāo)本中含有特異性抗體時，則和相應(yīng)抗原帶結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。通過洗滌，去掉未結(jié)合的血清，然后加入酶標(biāo)IgG二抗，再溫育，則酶結(jié)合物就結(jié)合到抗原抗體復(fù)合物上，再洗滌，加入底物。顆粒凝集試驗(yàn)PA 是一種簡便快速的篩檢試驗(yàn)，其原理為病毒裂解物或重組抗原包被于顆粒載體（紅細(xì)胞，乳膠顆粒，明膠顆粒），使之成為致敏顆粒

4、，再加入血清標(biāo)本，如被測血清中含有特異性抗體，則因抗體與抗原間橋聯(lián)作用，使致敏顆粒發(fā)生凝集。病毒檢測VT 可通過病毒的分離和培養(yǎng)后進(jìn)行。培養(yǎng)可通過動物培養(yǎng)，雞胚培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行，其中以細(xì)胞培養(yǎng)方法最敏感、經(jīng)濟(jì)和最有前途。病毒感染細(xì)胞后，多數(shù)病毒能引起病變，可直接鏡檢觀察，或通過血清學(xué)檢查作出鑒定。病毒的核酸檢測NAT 病毒核酸分子雜交 聚合酶鏈反應(yīng)PCR乙型肝炎的檢測技術(shù)1 乙肝病毒的生物學(xué)性狀 形態(tài)與結(jié)構(gòu) 基因結(jié)構(gòu)與復(fù)制方式 抗原組成 動物模型與細(xì)胞培養(yǎng) 抵抗力1.1 HBV形態(tài)與結(jié)構(gòu) HBV結(jié)構(gòu)為雙層球形，直徑42nm，具有雙層衣殼。1.2 HBV基因結(jié)構(gòu)與復(fù)制方式 HBV的DNA基因較

5、小，僅含約3200個核苷酸，負(fù)股DNA核苷酸序列含有4個開放讀碼框架（OPR）分別稱為S、C、P和X區(qū)。 基因及其編碼的抗原：S區(qū)基因區(qū)基因 C區(qū)基因區(qū)基因 P區(qū)基因區(qū)基因 X區(qū)基因區(qū)基因 S基因HBsAg C基因 HBcAg 前S1 Pre-S1 前C基因 HBeAg DNA多聚酶 HBXAg前S2基因Pre-S21.3 HBV抗原的組成 表面抗原HBsAg 三種形態(tài) 小球型顆粒、管形顆粒、Dane顆粒 亞型 各亞型均有共同抗原決定簇，稱為a抗原，此外還有2組相互排斥的亞型抗原決定簇（d/y和w/r）。按不同的組合方式構(gòu)成HBsAg四個基本亞型，即adr,adw,adr,ayw。亞型的分布有

6、明顯的地區(qū)差異和種族相關(guān)性，漢族以adr，少數(shù)民族為ayw，歐美以adw占優(yōu)勢，ayw主要分布在北非和西非。乙肝ELISA診斷試劑的標(biāo)準(zhǔn)要求adr,adw, ayw三個亞型的最小檢出量為0.5ng/L。 核心抗原HBcAg 為內(nèi)衣殼部分，不易在血循環(huán)中檢測，抗原性強(qiáng)。 e抗原HBeAg 病毒復(fù)制和具有強(qiáng)感染性的指標(biāo)。1.4 HBV動物模型與細(xì)胞培養(yǎng) 黑猩猩是對HBV最敏感的動物。 目前采用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)是病毒DNA傳染系統(tǒng)。將病毒DNA導(dǎo)入肝癌等細(xì)胞后，病毒可整合并復(fù)制，在細(xì)胞中表達(dá)HBV抗原。1.5 HBV抵抗力 HBV 的抵抗力較強(qiáng)，在30-32可存活6個月，在-20可存活15年，對低溫、

7、干燥、紫外線均有耐受。不能被70%乙醇滅活，因此不能用這一常規(guī)方法來消毒。但6510 小時 、煮沸10 分鐘 或高壓蒸氣均可滅活HBV。含氯制劑、環(huán)氧乙烷、戊二醛、0.5%過氧乙酸和碘伏等也有較好的滅活效果。 消毒可以使HBV失去傳染性，但是HBsAg的抗原性仍可保留。1.6 HBV markers during early infectionInfectionDay 0HBV DNAVariable, up to 31 days prior to HBsAg by ID NAT( 9-11 days by MP NAT) HBsAgDay 59; disappears Day 120Infe

8、ction1200102030405060708090100110InfectionDay 0HBV DNAVariable, up to 31 days prior to HBsAg by ID NAT( 9-11 days by MP NAT) HBsAgDay 59; disappears Day 120InfectionALT2 乙型肝炎病原體檢測 病毒直接標(biāo)志物 病毒抗原： HBsAg、HBeAg、Pre-S1、Pre-S2 病毒核酸： HBV DNA 間接性標(biāo)志物 抗病毒抗體： HBsAb、HBeAb、HBcAb2.1乙肝抗原抗體的檢測及結(jié)果分析 HBsAg 陽性表示HBV 感染;

9、抗-HBs 為保護(hù)性抗體;HBeAg陽性可作為HBV 復(fù)制和傳染性高的指標(biāo);抗-HBe 陽性表示HBV 復(fù)制水平低(但有前C 區(qū)突變者例外) ;抗-HBc 總抗體主要是抗-HBc IgG,只要感染過HBV ,無論病毒是否被清除,此抗體均為陽性;抗-HBc IgM 陽性提示HBV 復(fù)制,多見于乙型肝炎急性期。 近些年有許多實(shí)驗(yàn)室開展了乙肝前S1 抗原檢測,前S1 抗原在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面起著十分重要的作用,被認(rèn)為是比HBeAg 更敏感的病毒復(fù)制標(biāo)志,尤其適合無條件開展HBV DNA 檢測的醫(yī)療單位。 微粒子酶免分析法(MEIA) 及化學(xué)發(fā)光法雖然靈敏度更高, ,但由

10、于價格昂貴并未能廣泛開展。HBV 血清學(xué)標(biāo)志物檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢是從定性檢測轉(zhuǎn)血清學(xué)標(biāo)志物檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢是從定性檢測轉(zhuǎn)變?yōu)槎糠治?。變?yōu)槎糠治觥?HBV 血清學(xué)標(biāo)志傳統(tǒng)上包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc 和抗-HBc Ig M。HBV DNA 檢測檢測 HBV DNA 定性和定量檢測反映了病毒復(fù)制情況或水平,主要用于慢性HBV 感染的診斷、血清HBV DNA 水平的監(jiān)測,以及評價抗病毒療效,多使用各種PCR 技術(shù)?；蛐秃妥儺惖臋z測基因型和變異的檢測 HBV 病毒可分為8 型,分別為A、B、C、D、E、F、G、H。HBV 基因分型常用的方法有:多重PCR 法

11、;限制性片段長度多態(tài)性分析法;線性探針反向雜交法;全基因序列測定法等。全基因序列測序分型的結(jié)果準(zhǔn)確性高,尤其是能發(fā)現(xiàn)兩種不同基因型的重組體感染,被公認(rèn)為HBV 基因分型的金標(biāo)準(zhǔn),但比較昂貴繁瑣,不適合常規(guī)應(yīng)用。 目前的研發(fā)趨勢是針對有重要臨床意義的HBV 變異進(jìn)行快速、定量的多位點(diǎn)聯(lián)合檢測。 cccDNA（共價閉合（共價閉合DNAcovalent closed circular） 的的檢測檢測 cccDNA 是HBV 的原始復(fù)制模板,對乙肝病毒的復(fù)制及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義。Southern blot 是檢測HBV cccDNA 的經(jīng)典方法,但是該方法過程比較復(fù)雜,而且靈敏度不高。實(shí)

12、時熒光定量PCR 不需對PCR 反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行開蓋檢測,從而減少了PCR 產(chǎn)物污染的可能 ,可對cccDNA 進(jìn)行定量分析,多被實(shí)驗(yàn)室采用。2.3 乙肝病毒微生物學(xué)檢查法 HBV感染宿主的免疫學(xué)監(jiān)測感染宿主的免疫學(xué)監(jiān)測 HBV 感染的病程很大程度上取決于宿主的免疫機(jī)能,不同病程時期的機(jī)體免疫特點(diǎn)、體內(nèi)病毒水平和肝臟損傷程度均不相同,臨床免疫學(xué)檢測對HBV 感染的各病程階段的免疫狀態(tài)判斷、指導(dǎo)治療和評價療效等方面都有重要的意義。 流式細(xì)胞儀可以同時準(zhǔn)確檢測幾種T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量,監(jiān)控病人的免疫狀態(tài),被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。3 乙肝診斷試劑的研制進(jìn)展 抗-HBs診斷血清 血凝試驗(yàn) 反向被動血凝試驗(yàn) RP

13、HA 被動血凝試驗(yàn)PHA 放射免疫試驗(yàn)RIA 酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）試劑 DNA聚合酶鏈反應(yīng)PCR HBsAg全血金標(biāo)檢測試紙條4 檢測乙肝時常見問題1 陽性漏檢的問題 一步法試劑的鉤端效應(yīng)，后帶現(xiàn)象。試劑的標(biāo)準(zhǔn)中對一步法試劑有3份1：64效價的HBsAg陽性血清，檢測結(jié)果要求為陽性。 靈敏度：靈敏度對于早期檢出有利。 窗口期： 美國研究表明90%的HBsAg漏檢是因?yàn)榇翱谄凇?國內(nèi)研究表明30%40%是因?yàn)榇翱谄凇?亞型問題 ad型檢出率要高于ay型 變異 HBsAg變異類型有很多，5070變異 株與抗野生株單抗的免疫反應(yīng)減弱或消失。 有部分變異株與野生株在立體構(gòu)型和抗原反應(yīng)性上有明顯

14、的差異 ,因此防治困難。4 檢測乙肝時常見問題2 乙肝假陽性問題 類風(fēng)濕因子RF與抗體結(jié)合，造成ELISA和金標(biāo)法的假陽性。 補(bǔ)體與IgG的Fc段結(jié)合，造成ELISA和金標(biāo)法的假陽性。 纖維蛋白原與酶結(jié)合物粘附于微板上洗不掉，造成ELISA假陽性。 稀釋液推進(jìn)劑，金標(biāo)法中應(yīng)先加樣品，后加釋釋劑，否則易出現(xiàn)假陰性。丙型肝炎的檢測技術(shù)1 丙肝病毒的生物學(xué)性狀 形態(tài)與結(jié)構(gòu) 基因結(jié)構(gòu)與功能 丙肝病毒抗體的特點(diǎn)與臨床意義 丙肝病毒感染后ALT特點(diǎn)與意義 丙肝病毒的生物學(xué)檢測丙肝病毒簡介1974年Golafield首先報告輸血后非甲非乙型肝炎。1989年Choc等應(yīng)用分子克隆技術(shù)獲得本病毒基因克隆，并命名

15、本病及其病毒為丙型肝炎（HepatitisC）和丙型肝炎病毒（HCV）。由于HCV基因組在結(jié)構(gòu)和表型特征上與人黃病毒和瘟病毒相類似，1991年， 國際病毒命名委員會(ICTV)將其歸為黃病毒科丙型肝炎病毒屬。 1.1 形態(tài)與結(jié)構(gòu) HCV病毒體呈球形，直徑小于80nm（在肝細(xì)胞中為36-40nm，在血液中為36-62nm），為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜，囊膜上有剌突。HCV體外培養(yǎng)尚未找到敏感有效的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，但黑猩猩對HCV很敏感。 1.2 HCV基因結(jié)構(gòu)與功能 丙型肝炎病毒是單股正鏈RNA病毒其基因組含有一個大約9033個核苷酸構(gòu)成的大開放讀碼框(0RF)，可編碼301

16、03033個氨基酸的多蛋白前體，多蛋白N端的14依次為核心蛋白(c)和包膜蛋白(El和E2)等結(jié)構(gòu)蛋白，其余依次為NS2、NS3、NS4和NS 5等非結(jié)構(gòu)蛋白 ，膜蛋白分布于病毒表面，NS3蛋白具有蛋白酶的功能，NS5蛋白為一依賴于RNA的RNA多聚酶1.3 HCV抗體的特點(diǎn)與臨床意義 1 抗核心區(qū)抗體 抗-C22-3核心區(qū)抗體，核心區(qū)基因保守性強(qiáng)，其抗體出現(xiàn)較早（感染后8-10周），持續(xù)時間長，與HCV RNA高度相關(guān)，其血液有較大的傳染性。 抗-HCe被膜區(qū)抗體，被膜區(qū)基因（E1，E2/NS1）變異程度高，其抗體可用于血清學(xué)分型，用于感染的流行病學(xué)研究。1.3HCV抗體的特點(diǎn)與臨床意義2

17、抗非結(jié)構(gòu)區(qū)抗體 抗-C33C 編碼C33C多肽的基因位于NS3中區(qū)，與HCV的復(fù)制有關(guān)，用于HCV感染檢測，抗-C33C 與抗-C22-3同時或稍早出現(xiàn)，兩者對HCV感染具有互補(bǔ)作用，但不能相互替代。 抗-C100-3 C100-3多肽編碼基因位于NS4區(qū)，從感染后4-32周出現(xiàn)，最長可達(dá)1年以上，對感染早期診斷意義不大，在鑒別急性、慢性感染和判斷上有一定價值。但假陽性比例較高，血清中類風(fēng)濕因子，過氧化物歧化酶、球蛋白、自身抗體等與多肽呈低親和結(jié)合；標(biāo)本放置過長或反復(fù)凍融也可出現(xiàn)假陽性。 抗-NS5 抗-NS5 持續(xù)陽性者，ALT多明顯升高，而持續(xù)陰性者，ALT多正?；蜉p度升高，與疾病活動相關(guān)

18、。 IgM抗體 先于IgG抗體出現(xiàn)，對感染早期診斷及急、慢性感染具有重要意義。 HCV感染后標(biāo)志物出現(xiàn)的次序：HCV RNA（2周）ALT （4周）抗體-NS5 （6周）抗-C22-3 （7周）抗-C33C （8周）抗-C100-3 （9周）1.4丙肝感染后標(biāo)志物的產(chǎn)生2 丙肝病毒微生物學(xué)檢查法 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA 放射免疫測定法RIA 重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)（確認(rèn)實(shí)驗(yàn)） 血清HCV RNA檢測 雙抗體夾心法測HCV病毒抗原2.1丙肝抗體ELISA檢測 第一代抗第一代抗-HCV試劑盒試劑盒 采用的抗原C100-3 是HCV非結(jié)構(gòu)基因(NS3NS4)和人超氧化物歧化酶基因嵌合后表達(dá)的融合蛋白，

19、靈敏度低，漏檢率較高； 第二代抗第二代抗-HCV試劑盒試劑盒 在第一代基礎(chǔ)上增加了核心區(qū)重組蛋白C22-3和NS3區(qū)重組蛋白-C33C，雖然在靈敏度和特異忡上有很大改善，但仍不能排除由于重組融合蛋白帶來的少數(shù)假陽性和極少數(shù)的漏檢 。 第三代抗第三代抗-HCV試劑盒試劑盒 其包被抗原為HCV核心抗原、NS3、NS4和NS5抗原，特異性超過99，雖然目前缺乏判斷其敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)，但對于免疫功能正常的HCV RNA陽性感染者， 抗一HCV檢出率也高于99。2.2丙肝病毒核酸RNA的檢測 HCV RNA檢測包括定性和定量兩種，定性PCR的靈敏度高于定量PCR，因此定性PCR主要用于急慢性丙型肝炎診斷，

20、而定量PCR則用于療效監(jiān)測但該方法在技術(shù)和設(shè)備上要求較高，且費(fèi)時，檢出率較低，主要原因是：HCV在血液和肝組織中的感染滴度很低，且有一定波動：HCV RNA易被血細(xì)胞中的RNA酶降解，因此如果被檢標(biāo)本保存不當(dāng)(例如反復(fù)凍融)將影響檢測結(jié)果：HCV RNA還受進(jìn)食的影響，易與血中脂質(zhì)及脂蛋白結(jié)合，降低檢出率：另外，RT-PCR的多步驟實(shí)驗(yàn)中任何步驟的問題均易影響其檢出該方法也容易因污染而出現(xiàn)假陽性。 為了使HCV RNA的規(guī)范化檢測：對患者在空腹條件下抽血，及早分離血清和進(jìn)行檢測，避免對標(biāo)本反復(fù)凍融，PCR的整個過程應(yīng)避免RNA酶及DNA酶對標(biāo)本的降解和對模板的污染。2.3丙肝病毒核心抗原的檢測

21、 HCV核心抗原的檢出比抗一HCV的檢出約早49 d，用雙抗體夾心法定性或定量檢測血清樣品中總的或游離的HCV核心抗原，方法簡單、時間短、對環(huán)境要求低以及假陽性率低的特點(diǎn)。 用途：可用于HCV血清學(xué)轉(zhuǎn)換前的早期急性丙型肝炎診斷、抗一HCV陽性感染者的病毒血癥分析以及HCV感染者治療前后病毒血癥追蹤分析等。 局限性：由于方法敏感性的限制，HCV RNA水平低于20 000 kTUL時不適用。3檢測丙肝時常見問題 假陽性比較高 HCV基因組的變異較大 血清中抗-HCV出現(xiàn)較晚 不同廠家的試劑對同一標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果存在差異梅毒螺旋體的檢測技術(shù)1 梅毒螺旋體的生物學(xué)性狀 形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色 培養(yǎng)特性 抵抗力

22、梅毒螺旋體抗體抗TP抗體抗心磷脂抗體，稱反應(yīng)素基本概念 1.病原性螺旋體（Spirochetes）：是一群細(xì)長而柔軟、波狀或螺旋狀，運(yùn)動活潑的原核細(xì)胞微生物。主要有鉤端螺旋體，梅毒螺旋體，雅司螺旋體和回歸熱螺旋體等。 2 .梅毒螺旋體（Treponema pallidum）學(xué)名蒼白密螺旋體，梅毒病原體，對人有致病性的密螺旋體中最重要的一種。1.2 TP形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色 TP直徑0.1-0.2微米，長6-15微米，有8-14年致密而規(guī)則的螺旋，兩端尖直，運(yùn)動活潑。電鏡下菌體內(nèi)為軸絲，最外層為外膜，其內(nèi)為胞質(zhì)膜，二者之間為鞭毛樣結(jié)構(gòu)。菌體有蛋白質(zhì)、類脂及糖類，外膜蛋白質(zhì)中P47和軸絲P37抗原具有高

23、度免疫原性，在免疫學(xué)診斷和預(yù)防中可能起重要作用。 TP用普通染料不易著色；病灶取材直接檢查，可用不染色新鮮標(biāo)本在暗視野顯微鏡下觀察形態(tài)和運(yùn)動方式。1.3TP培養(yǎng)特性 人工體外培養(yǎng)尚未成功。 毒力株螺旋體能在家兔部分組織中繁殖，并保持其對人及家兔的致病力，但因其分裂繁殖緩慢，30-33小時才能分裂1次。1.4TP抵抗力 梅毒螺旋體抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感，離體后干燥1-2小時；血液中4放置3天；加熱50 5分鐘即滅活；對化學(xué)消毒劑亦敏感，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素或砷劑敏感。1.5梅毒螺旋體抗體 1、抗TP抗體（P15，P17，P47）當(dāng)補(bǔ)體存在時，可將螺旋體殺死或溶解，也對吞噬細(xì)胞發(fā)揮調(diào)

24、理作用。在梅毒潛伏期即產(chǎn)生，一期梅毒時增高，主要是IgM型，二期梅毒時達(dá)到高峰，有IgG和IgM型，三期梅毒略降低，主要是IgG型，但不是保護(hù)性抗體，晚期梅毒或治療后仍保持陽性。 2、抗心磷脂抗體，稱反應(yīng)素reagin。同生物組織中的脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)素?zé)o保護(hù)作用，僅可用作梅毒血清學(xué)診斷。一期梅毒時增高，二期梅毒時達(dá)到高峰，三期梅毒略降低。1.6TP抗原 主要為外膜蛋白抗原：p47、p45、p17、p15。 p47具有強(qiáng)免疫原性，是梅毒螺旋體的主要優(yōu)勢抗原，與另外兩種密螺旋體有交叉反應(yīng)。 p17也具有梅毒螺旋體抗原特異性，與人類正常血成分無交叉反應(yīng)。2梅毒螺旋體檢查法 梅毒螺旋體顯微鏡檢查（直

25、接查病原體） 主要梅毒血清學(xué)檢查 非密螺旋體抗原試驗(yàn) 快速反應(yīng)素試驗(yàn)RPR 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)TRUST 不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗(yàn)USR 密螺旋體抗原試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA 梅毒螺旋體血凝集試驗(yàn)TPHA 熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)FTA-ABS 金標(biāo)快速試紙條法2.1梅毒螺旋體檢測方法的評價 RPR：用于普查，適用于一、二期梅毒反應(yīng)素檢測，有假陽性。 FTA-ABS適用于診斷各期梅毒，敏感性和特異性都很高，狼瘡病有假陽性反應(yīng)。 TPHA：敏感性和FTA-ABS相似，但特異性更高。不用于一期診斷，結(jié)締組織病、麻風(fēng)等可出現(xiàn)假陽性。 WB：能檢出其四種特異性抗體，作為確認(rèn)試劑有較強(qiáng)的可靠性； ELISA：靈敏度和特異性好； TRUST：同時存在較高的假陽性及假陰性問題。3檢測梅毒時常見問題 生物學(xué)真陽性反應(yīng) 密螺旋體屬的螺旋體均具有與梅毒螺旋體完全一樣的類脂質(zhì)抗原，產(chǎn)生的反應(yīng)素的生物學(xué)性狀與梅毒一樣。 生物學(xué)假陽性反應(yīng) 其他非密螺旋體疾病的病原體和其他致病因素所引起的反應(yīng)素反應(yīng)，如：瘧疾、斑疹傷寒、猩紅熱、乙肝、麻風(fēng)、紅斑狼瘡等。 人為假陽性反應(yīng) 采集標(biāo)本過程中注射器上有類脂質(zhì)，標(biāo)本運(yùn)輸保存不當(dāng)，血液游離出脂肪酸，人血白蛋白增高等；試劑中膽固醇含量增高；檢驗(yàn)人員技術(shù)水平和判斷誤差；反應(yīng)時間