免疫熒光技術(shù)

1、免疫熒光技術(shù)及其免疫熒光技術(shù)及其在臨床檢驗中的應(yīng)用在臨床檢驗中的應(yīng)用胡詩帆胡詩帆S132220001S1322200012 免疫熒光技術(shù)又稱熒光素標(biāo)記技術(shù)，是指將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。熒光標(biāo)記技術(shù)免疫學(xué)方法免疫熒光技術(shù)3免疫學(xué)方法：抗原抗體特異結(jié)合熒光標(biāo)記技術(shù)：利用一些能發(fā)射熒光的物質(zhì)共價結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個基團(tuán)上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。4 56免疫熒光技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用一、細(xì)菌學(xué)方面

2、 國內(nèi)紀(jì)寶宏根據(jù)對854名不同對象的檢查,證實麻風(fēng)間接熒光抗體吸收 （FLA-ABS） 試驗對發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)亞臨床感染有較高的敏感性和特異性,免疫流行病學(xué)調(diào)查如同時使用麻風(fēng)菌素和FLA-ABS試驗,可發(fā)現(xiàn)以后可能發(fā)展為多菌型 麻風(fēng)的高危人群,即麻風(fēng)菌素陰性,FLA-ABS陽性者。 莊玉輝用熒光抗休染色檢查腦脊液(CSF)內(nèi)結(jié)核菌，陽性率為28.30，而抗酸染色法陽性率為18,9帕，后者較前者差。結(jié)果表明結(jié)核菌用熒光抗體檢查技術(shù)檢查結(jié)腦者的CSF顯示快速、敏感等優(yōu)點，對結(jié)核性腦膜炎早期診斷有意義。7二、真菌學(xué)方面 國內(nèi)采用熒光染色：皮屑、甲屑、毛發(fā)等標(biāo)本經(jīng)20%KOH溶液處理后加少量0.1%吖啶橙染液

3、，蓋以蓋玻片，微微加溫（膿、痰、尿、脊髓液或分泌物直接涂片加少許1%吖啶橙染液加蓋玻片），置熒光顯微鏡下觀察菌絲或孢子的熒光反應(yīng)，陽性證明有真菌存在，但不能確定菌種。8三、寄生蟲方面 國內(nèi)1976年83118部隊醫(yī)院防疫所應(yīng)用輕便熒光光源及吖啶橙染色檢查瘧原蟲。在熒光顯微鏡下，瘧原蟲及白細(xì)胞的核呈明亮的黃綠色熒光，瘧原蟲和淋巴細(xì)胞的漿呈紅色熒光，正常紅細(xì)胞不著色。在暗綠色視野中，白細(xì)胞如夜空中的明月一般，瘧原蟲的核象亮晶晶的星星，瘧原蟲的核漿與西蒙氏染色結(jié)果基本一致，能清楚辨別環(huán)狀體、滋養(yǎng)體、裂殖體各期。 國外Ckman LRR用可吮橙染色離心寄生蟲快速診斷瘧疾。瘧原蟲在紫外光源下觀察，核呈綠

4、色(DNA ),胞質(zhì)呈橙色(RNA)。9四、免疫學(xué)方面 該領(lǐng)域應(yīng)用較多的為間接熒光抗體法，如抗腎上腺皮質(zhì)抗體、抗肝細(xì)胞膜抗原自身抗體、抗胰島細(xì)胞抗體，抗骨骼肌抗體、抗平滑肌抗體、抗線粒體抗體、抗胃壁細(xì)胞抗體、抗腎小球基底膜抗體，抗組蛋白抗體，抗DNA抗體、抗核抗體等。用該組織制作冷凍切片為底物片用異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗人IgG。10五、腫病細(xì)胞及其它 翟春璽、張風(fēng)菊研究表明，癌細(xì)胞胞漿中所含RNA較正常細(xì)胞顯著增多，AO能與RNA結(jié)合成AO-RNA復(fù)合體，顯紅色熒光，RNA愈豐富其紅色熒光愈強(qiáng)。胞核所含的DNA較正常細(xì)胞顯著增多，DNA與AU結(jié)合成AO-DNA復(fù)合體，呈綠色熒光，同時DNA含量愈

5、豐富，其綠色熒光愈強(qiáng)。核仁是RNA成分，呈紅色熒光，癌細(xì)胞可顯示綠色胞核，紅色核仁，新鮮深紅色胞漿，成為對照鮮明的熒光圖象。 其它，免疫熒光法定量檢查非妊娠血清的胎盤蛋白5單克隆抗休熒光抗體優(yōu)化試劑檢測沙眼衣原體，應(yīng)用雙色熒光標(biāo)記單克隆抗體和流式細(xì)胞計鑒定移植腎組織的單個核細(xì)胞浸潤，用熒光灶測定法快速診斷甲型和乙型流感病毒，韋榮氏球菌以紫外線照射出現(xiàn)熒光。間接免疫熒光檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清抗巨核細(xì)胞抗體11 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種累及多系統(tǒng)、多臟器的自身免疫性疾病，血小板減少是SLE患者較常見的血液系統(tǒng)表現(xiàn)之一。自身免疫因素

6、被認(rèn)為是引起血小板減少的主要原因。有文獻(xiàn)報道，抗血小板抗體、抗磷脂抗體等自身抗體可造成外周血中血小板破壞或凝集，導(dǎo)致循環(huán)血小板減少?？咕藓思?xì)胞抗體熒光檢測方法12取出冷凍骨髓玻片室溫晾干滴加PBS(PH7. 4 )10%兔血清封閉骨髓標(biāo)本加入待測血清樣品20minPBS洗滌稀釋的FITC兔抗人IgG抗體30min37避光PBS洗滌1:1的瑞氏染液+磷酸緩沖液5min觀察檢 測 結(jié) 果1314 A ：blank control B：case of negative anti-rnegakaryocyte antibody C:： case of positive anti-megakaryocyte antibodyMegakaryocytes with or without anti-megakaryocyte antibodies detected by indirect im-munofluorescent methnod 15 36例SLE伴血小板減少患者中抗巨核細(xì)胞抗體陽性者占7例(19. 4% ),30例血小板正常的SLE患者中有2例(6.7%)，而30名正常人對照組中僅有1例(3.3% )，后者與SLE伴患者血小板減少患者與正常人對照組相比，差異有顯著性。同時我們發(fā)