菌種活化方法

1、低溫保存管（cryo tube ）中之一般菌種臨時存放及活化A. 低溫保存管之臨時存放及解凍1. 低溫保存管（cryo tube ）應(yīng)存放于20C 80C之低溫條件下。2. 準備37 C之70 %（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以 火加溫，以免危險；若以37 r水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染），其中事先 安放小試管架（可放置cryotube 之大?。?，液面不可高達管塞。3將cryotube 從低溫保存條件中取出，置于 37 C浴槽之小試管架上。4.不斷輕微搖動cryotube，液面不可高至管塞，直至結(jié)冰完全溶解（約需2分 鐘）。B. 菌株活化：在無菌操作下1. 用無菌微量吸

2、管，從已溶解之 cryotube 吸取50 ?1 （或1 2滴）之菌液， 滴入固態(tài)指定培）某一邊緣附近，以劃線法接種于培養(yǎng)基。2將接種好的培養(yǎng)基置于 指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。C. 劃線法1. 手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約 5公分）燒至火紅，并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約10公分，等待約10秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊 緣凝膠（無菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養(yǎng)基邊緣向 中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋1/3培養(yǎng)基為止（I區(qū)）。2. 灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自I區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到 未接種的區(qū)域（II區(qū)）。3. 重復(fù)2.的動作完成III 區(qū)與I

3、V 區(qū)。4. 灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。D. 圖示（1）金屬接種環(huán)(2)平板劃線法冷凍干燥管之開管說明F列步驟請在無菌環(huán)境下操作:1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。2、滴數(shù)滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。3、取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。4、( a ) 適用于細菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養(yǎng)基，滴入內(nèi)管內(nèi)，并輕微震蕩(可 用該吸管協(xié)助)，直到均勻懸浮。(b ) 適用于霉菌、酵母菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，待干燥粉末溶解后，以無 菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi)，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于 指定的平板培養(yǎng)基 上，做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩 余的菌體則全部移入指定的液體培養(yǎng)基內(nèi)，并依指定的溫度培養(yǎng)之。6、 某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，遲滯期 (lag period )較長，必須等培養(yǎng) 二倍時間后才能長出，且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)(Subculture) 后才能正常生 長。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗，才視為不能活化。7、 若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時，請于收到菌種之一個月內(nèi)，以問 題菌株反應(yīng)單傳