waterse2695高效液相色譜儀操作規(guī)程

1、Waters e2695 高效液相色譜儀操作規(guī)程1 目的指導和規(guī)范Waters e 2695 高效液相色譜儀的操作。2 適用范圍該操作規(guī)程適用于 Water e 2695 高效液相色譜儀的操作。3 職責 檢驗員應按操作規(guī)程進行儀器操作，質(zhì)量監(jiān)督員負責監(jiān)督該操作規(guī)程的正確執(zhí)行。4 操作 儀器組成和開機4.1.1 儀器組成本儀器由 Waters e 2695 分離單元、 Waters 2998 二極管陣列檢測器、 Waters ELSD2424蒸發(fā)光散射檢測器、Empower3色譜工作站和打印機組成。Waters e2695 分離單元包括四元梯度洗脫的溶劑輸送系統(tǒng)，四通道在線真空脫氣，可容納 12

2、0 個樣品瓶的自動分離單元，柱溫箱，內(nèi)置的柱塞桿密封墊清洗系統(tǒng)，溶劑瓶托盤；顯示器，鍵盤用戶界面。4.1.2 開機4.1.2.1 依次接通 Waters e 2695 分離單元、檢測器、計算機和打印機的電源。4.1.2.2 接通 Waters e2695分離單元后，約 20s儀器開始自檢，約 3mn內(nèi)各部件的初始化完成，待主屏幕上方標題區(qū)出現(xiàn)“ Idle ”時，儀器進入待命狀態(tài)。溶劑管路系統(tǒng)的準備4.2.1 流動相脫氣確認所有溶劑管路都充滿溶劑，按Menu Status 】 ，進入“ Status(1) ”屏幕，光標選“ Degasser ” ，按 Enter 】 。4.2.2 灌注當色譜儀流

3、路沒有溶劑或系統(tǒng)中有空氣時，需進行干灌注 (DryPrime) ，注入流動相。否則，進行濕灌注(Wet Prime) 以驅(qū)除氣泡。干灌注：按主機面板上Menu Status 】 ，進入“Status(1) ”顯示，按Direct Function】 ，選擇“Dry Prime ” ，選溶劑通道，如 Open A，選“DurationIIi 按數(shù)字鍵輸入 5 分鐘，按” COntinue ” ，待限定時間結束后，重復操作，使所需的溶劑通道注滿流動相。濕灌注：進入“ Status(1) ”顯示，選溶劑通道，輸入100，按DirectFunction ，選“ Wet Prime ”，按【OK】 ，根

4、據(jù)面板提示設置流速及時間(默認流速為 7 5mlmin ，一般不用更改，時間可設置為 5min) ，按【0K】 。樣品管理系統(tǒng)的準備4.3.1 沖洗自動進樣器在"status(1)”，屏幕下，光標選"Composition "，輸入流動相的組成。按【Direct Function, 光標選“ Purge Injector ”，按【 Enter ，顯示“ Purge Injector ”屏幕，輸入“ Sample Loop Volumes6 0” ，光標下移“ Compression Check ” ，按任意數(shù)字鍵，按【OK。4.3.2 沖洗進樣針在主屏幕下， 按【

5、 Diag ， 顯示 “ Diagnostics ” 屏幕， 按【 Prime Ndl Wash】 ， 顯示 “ PrimeNeedle Wash'屏幕，按Start , 30s內(nèi)應見溶劑從廢液排放口流出。按【 Close】、【Exit4.3.3 沖洗柱塞桿密封墊在主屏幕下， 按【 Diag ， 顯示” Diagnostics ” 屏幕， 按【 Prime Seal Wash】 ， 顯示 “ PrimeSeal Wash ”屏幕，按Start ， 30s 內(nèi)應見溶劑從廢液排放口流出。按【 Close 】 、 【 Exit 】 。待排放口有水流出，按【 Half 】、 【 Close 】

6、 、 【 Exit 】 。4.3.4 裝入樣品與轉(zhuǎn)盤打開樣品艙門，顯示"Door is Open"屏幕，將樣品盤取出，把樣品瓶插入樣品盤后，裝入樣品盤，按【 Next 】直至所有樣品盤裝畢，關好艙門。色譜柱平衡換上檢驗所需的色譜柱和流動相，進入 "Status（1） ”顯示，選擇流路、設定流速、柱溫，按【Enter】開始注入流動相，通常情況下約1 530分鐘色譜柱可達到平衡，可以開始進樣，采集數(shù)據(jù)。4.3.5 Empower 3 軟件的應用建數(shù)據(jù)采集方法5.1.1 雙擊電腦屏幕上的"Empower"快捷圖標，出現(xiàn) Empower登錄界面，輸入用

7、戶名和密碼。5.1.2 單擊高級鍵，選擇用戶類型和QuickStart 界面。5.1.3 選擇 QuickStart 界面，點擊“確定” ，然后選擇選定的操作項目以及色譜系統(tǒng)（僅查看數(shù)據(jù)可選擇色譜系統(tǒng)中的“沒有系統(tǒng)” ） ，單擊“確定” 。5.1.4 登錄 Empower的 QuickStarlt 界面。編輯儀器方法和方法組（以 e2695_2998 為例） 。5.2.1 采集欄單擊“方法組編輯向?qū)А?：5.2.2 選擇“新建”選項。5.2.3 彈出儀器方法編輯器。5.2.4 單擊“ 2695” ，彈出 2695 編輯界面。5.2.4.1 Aliance 系統(tǒng)（包2695、2795和2695D

8、）通用編輯頁面中，可選擇“單次輸送體積” ，請針對不同的流速選定適當?shù)膯未屋斔腕w積，以確保最佳的流速精度與準度。5.2.4.2 查看脫氣選項，確認設置正確。5.2.4.3 流量選項中設置“泵模式” 、 “總流量”以及流動相配比。5.2.5 單擊 2998 ，彈出 2998 編輯界面。5.2.5.1 3D 數(shù)據(jù)采集：在通用欄中選擇啟用3D數(shù)據(jù)，輸入檢測波長的范圍；5.2.5.2 采集2D數(shù)據(jù)，點擊“ 2D通道”，最多可同時采集 8個不同波長的通道的數(shù)據(jù)。5.2.6 點擊“文件” ，選擇“另存為” ：輸入儀器方法名稱，點擊“保存” ；點擊“文件” ， 選擇“退出” 。5.2.7 在被選項中選擇所需

9、的儀器方法名稱，點擊“下一步（N） ” 。5.2.8 在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法（如果沒有合適的方法選擇“無處理” 、 “無報告” ） ，點擊下一步。5.2.9 輸入方法組名稱，單擊“完成” 。進樣點擊進入“平衡系統(tǒng)監(jiān)視基線”界面，選擇相應的儀器方法，點擊“平衡監(jiān)視器，在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線至系統(tǒng)平衡，停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài)，點擊“進樣” 。5.3.1 單進樣：點擊，進入“定義單進樣參數(shù)”編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù)，點擊“進樣” 。5.3.2 使用向?qū)Ы悠方M和樣品組方法。5.3.2.1 選擇“運行樣品” ，然后單擊“樣品隊列” ，進入樣品列表。5.3.2.2 單擊“新建樣

10、品組向?qū)А?，建立樣品組。5.3.2.3 選擇創(chuàng)建樣品組方法類型為“ Lc 或 PDA” ，然后點擊“定義樣品板”。5.3.2.4 在“選擇標準進樣在那里開始”中選擇合適的選項。檢查開始加載樣品瓶的位置是否正確，點擊“下一步” 。5.3.2.5 在描述標樣中需要設置一下內(nèi)容：樣品組中的標樣數(shù)：X;每瓶標樣進樣次數(shù)：X;進樣體積：x;運行時間：XX;方法組XX為點擊“選項”：輸入下一進樣延遲時間X;點擊 下一步。5.3.2.6 樣品數(shù)：X;每瓶樣品進樣次數(shù)：X;進樣體積：X;運行時間：X;方法組X;點擊選項：輸入下一進樣延遲時間X;點擊下一步。5.3.2.7 在識別標準樣界面中，輸入標樣名稱，增

11、量后綴使用1 在識別樣品界面中，輸入樣品名稱，增量后綴使用 a 。點擊下一步。5.3.2.8 運行模式選項中選擇 “只測試” 。 查看摘要， 點擊下一步。 【注： 彈出組分編輯器，輸入標樣中每個組分的名稱（ 內(nèi)標不需要輸入含量 ） 。 可以直接關閉該窗口， 在處理數(shù)據(jù)的時候再添加】 。5.3.2.9 點擊完成，在菜單欄中選擇文件。5.3.2.10 為方法組命名并保存樣品組方法。5.3.2.11 單擊 “樣品隊列” ， 打開運行樣品窗口， 點擊運行當前樣品組方法鍵， 選擇運行。5.3.2.12 選擇需運行的樣品組名稱，點擊運行。5.3.2.13 樣品組運行過程中，在“正在運行”欄中正在運行以及運

12、行完畢的樣品以紅色顯示。 （ 注：以向?qū)Ы⒌臉悠方M首行功能一般為清除校正，一般在運行樣品前刪除該行或改為“平衡”。 ）建立數(shù)據(jù)處理方法2D 數(shù)據(jù)處理方法5.4.1.1 單擊“瀏覽項目”鍵，在“樣品組”中選擇目標樣品組。5.4.1.2 在樣品組上點擊鼠標右鍵選擇“查看相關-通道”，樣品組在單個通道中顯示。5.4.1.3 選擇定最低濃度的標樣，點擊鼠標右鍵，選擇下拉菜單中的查看，會顯示未處理的色譜圖形。5.4.1.4 點擊處理方法向?qū)Э旖萱I，選擇創(chuàng)建新處理方法，點擊確定。5.4.1.5 確認處理類型為LC,積分方式可選擇為傳統(tǒng)，再點擊使用處理方法向?qū)?，選擇確定。5.4.1.6 常按鼠標左鍵，選擇

13、色譜圖上最窄峰。 （注：在色譜圖區(qū)域方可以放大某個需要監(jiān)測的峰。點擊鼠標右鍵全視圖可以還原色譜圖。 ）5.4.1.7 在色譜圖的積分界面選擇一段典型基線作為積分的閾值，點擊下一步。5.4.1.8 常按鼠標左鍵，在基線上選取積分的起止時間點。5.4.1.9 建議選擇最小峰高，選擇所要積分的高度最小峰（或鍵入相應數(shù)值 ）。小于此峰高90的峰將不被積分。點擊下一步。5.4.1.10 定量方法選擇面積，組分信息選擇含量，校正類型選擇線性。點擊下一步。5.4.1.11 跨通道內(nèi)標樣界面點擊否。5.4.1.12 因為選擇的是標樣，點擊峰1 可以看到一個下拉菜單選擇相應的組分名稱或者鍵入運行樣品相應的名稱。

14、添加組分名稱相匹配的標準含量，然后點擊下一步。5.4.1.13 如果是多點校正樣品，跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。 （單點校正可在 這里添加含量） 。5.4.1.14 選擇外標法：5.4.1.15 選擇單一內(nèi)標樣，需要在下拉菜單中選擇或鍵入內(nèi)標相應的名稱，然后點擊下一步。5.4.1.16 選擇多重內(nèi)標需要輸入所有內(nèi)標的名稱。5.4.1.17 為處理方法命名，點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應用后的色譜結果，包括積分。5.4.1.18 如需為積分方法添加積分事件，鼠標右鍵點擊色譜圖窗口，選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應用于處理方法中。5.4.1.19 編輯處理方法的高級功能需要

15、選擇快捷鍵。有任何更改均需再次保存處理方法。5.4.1.20 點擊峰表底部可預覽2D通道和峰。5.4.1.21 點擊“瀏覽項目”鍵，選擇“通道”或“樣品組”標簽欄，右鍵點擊目標樣品組或通道并選擇處理。5.4.1.22 在處理界面，選擇使用指定的處理方法，選擇相應的處理方法名稱，點擊清除校正，選擇校正并定量。5.4.1.23 點擊確定，數(shù)據(jù)處理，產(chǎn)生結果。可在結果欄中查看。5.4.2建立3D數(shù)據(jù)處理方法5.4.2.1 點擊“瀏覽項目”鍵，在“樣品組”中選擇目標樣品組。5.4.2.2 在樣品組上點擊鼠標右鍵選擇查看相關通道，樣品組中各個數(shù)據(jù)在單個通道中顯示。5.4.2.3 選擇定量最低濃度的標樣，

16、點擊鼠標右鍵，選擇下拉菜單中的查看。5.4.2.4 在預覽界面選擇“輪廓線”標簽欄，會顯示未處理的輪廓圖。5.4.2.5 從處理或右鍵下拉菜單中選擇提取色譜選項。5.4.2.6 鍵入所需要提取的波長，按回車鍵，得到該波長的色譜圖。5.4.2.7 點擊處理方法快捷鍵，選擇創(chuàng)建新處理方法，確認處理類型為PDA積分方式可選擇為傳統(tǒng)，再點擊使用處理方法向?qū)?，點擊確定。5.4.2.8 常按鼠標左鍵，選擇色譜圖上最窄峰。（注：在色譜圖區(qū)域內(nèi)可以放大某個需要監(jiān)測的峰。點擊鼠標右鍵選擇全視圖可以還原色譜圖。 ）5.4.2.9 在色譜圖的積分界面選擇一段平滑的基線作為積分的閾值，點擊下一步。5.4.2.10 常

17、按鼠標左鍵，在基線上選取積分的起止時間點。5.4.2.11 建議選擇最小峰高，選擇所要積分的高度最小峰（或鍵入相應數(shù)值） 。小于此峰高90的峰將不被積分。點擊下一步。5.4.2.12 定量方法選擇面積，組分信息選擇含量，校正類型選擇線性。點擊下一步。5.4.2.13 跨通道內(nèi)標樣界面點擊否。5.4.2.14 因為選擇的是標樣，點擊峰1可以看到一個下拉菜單選擇相應的組分名稱或者鍵入運行樣品相應的名稱。添加組分名稱相匹配的標準含量，然后點擊下一步。5.4.2.15 如果是多濃度點的一組標樣，跳過添加含量的窗口直接點擊下一步。（單一濃度可以在這里添加含量） 。5.4.2.16 選擇外標法：5.4.2

18、.17 選擇內(nèi)標法單一內(nèi)標樣校正，需要在下拉菜單中選擇或鍵入內(nèi)標相應的名稱，然后點擊下一步。5.4.2.18 選擇多重內(nèi)標需要輸入所有內(nèi)標的名稱。5.4.2.19 PDA 純化及匹配選項：5.4.2.20 為處理方法命名，點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應用后的色譜結果，包括積分。5.4.2.21 在“文件” 下拉菜單中選擇 “另存為” 方法組， 將該處理方法存入方法組。 （ 注：3D數(shù)據(jù)必須用方法組處理。）5.4.2.22 如需為積分方法添加積分事件，鼠標右鍵點擊色譜圖窗口，選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應用于處理方法中。5.4.2.23 編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。

19、5.4.2.24 點擊“瀏覽項目”鍵，選擇“通道”或“樣品組”標簽欄，右鍵點擊目標樣品組或通道并選擇處理。5.4.2.25 在處理界面，選擇使用指定的處理方法，選擇相應的處理方法名稱，點擊清除校正，選擇校正并定量。5.4.2.26 點擊確定，數(shù)據(jù)處理，產(chǎn)生結果。可在結果欄中查看。6 查看結果和視圖篩選選擇“結果”標簽欄，使用視圖篩選器從下拉菜單中選擇今天。選擇需查看的結果，右鍵點擊選擇查看。查看結果點擊快捷鍵，查看每個組分的校正曲線。切換至主窗口點擊。7 預覽結果并創(chuàng)建報告方法點擊“預覽項目”切換回結果表顯示狀態(tài)。選中一個或多個結果，點擊鼠標右鍵選擇預覽。若選取一個結果，在預覽窗口選擇使用一下

20、方法：使用缺省單個報告，單擊確定。預覽報告并查看數(shù)據(jù)。點擊“編輯方法”鍵修改報告方法。雙擊色譜圖或峰結果表編輯報告屬性。點擊文件，選擇保存，為新建的報告方法命名。點擊預覽報告。如需將報告保存為PDF格式，點擊。8 方法組的建立以上講解了如何建立儀器方法、處理方法和報告方法，組合可以得到一個方法組。監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向?qū)В簭棾鲂路椒ńM：選擇儀器方法界面。選擇相應的儀器方法，點擊下一步。選擇缺省方法界面選擇相應的處理方法和報告方法，導出方法缺省。點擊下一步。命名方法組，點擊完成。在運行樣品時，方法組報告方法中調(diào)用該方法組，可以自動完成采集、處理、報告數(shù)據(jù)流程。9 數(shù)據(jù)管理項目的備份9.1.1 在

21、 QuickStart 界面，選擇菜單“管理一備份當前項目” 。9.1.2 出現(xiàn)“項目備份向?qū)А?，點擊下一步。9.1.3 出現(xiàn)“項目備份向?qū)б贿x擇目的地 通過瀏覽選擇目的地，建議選擇在非操作系統(tǒng)安裝的硬盤分區(qū)內(nèi)。 選擇完成， 單擊 “確定” 關閉后， 回到項目備份窗口， 單擊 “下一步” 。9.1.4 出現(xiàn) “項目備份向?qū)б粋浞蒿@示” 。 確認數(shù)據(jù)的復制已經(jīng)成功， 再單擊 “下一步” 。9.1.5 出現(xiàn)備份數(shù)據(jù)向?qū)б婚_始界面。點擊完成，結束備份。項目的還原9.2.1 在 QuickStart 界面，選擇菜單“管理” ，下拉菜單中選擇“還原項目” 。9.2.2 出現(xiàn)“還原項目向?qū)А?。通過“瀏

22、覽”選擇被還原的項目所在的路徑，單擊“確 定。9.2.3 單擊下一步。9.2.4 如出現(xiàn)類似以下內(nèi)容的對話框（項目名 test 已經(jīng)被使用。 請輸入另一個項目名 ） ，則需為還原的項目另起一個名字。9.2.5 在“輸入磁盤空間配額 頁中，輸入項目名，并注意此處的“表空間配額”應不得小于欲還原的項目原有的配額（ 數(shù)據(jù)文件大?。?，然后單擊“下一步” 。9.2.6 如果需要，可以在此頁面中，選擇該項目是否屬于某個父項目。9.2.7 在“還原顯示 中， 如果出現(xiàn)如下對話框 （還原的項目需要被更新到下一個版本） ，單擊“確定"。（注：當還原由 Millennium 或Empower的先前版本

23、創(chuàng)建的項目時，需要為該 項目選擇時區(qū)。 ）9.2.8 在“還原顯示” 中， 等待數(shù)據(jù)還原結束后， 單擊 “完成” 。 （注： 提示： 在重裝 Empower 軟件之后，可以通過還原項目將相關的項目數(shù)據(jù)進行還原。 ）10 項目管理新建項目10.1.1 進入到Empower3的QuickStart 界面。在菜單中選擇“管理一創(chuàng)建新項目”。10.1.2 出現(xiàn)“新項目向?qū)А钡膶υ捒?，選擇新建項目的父項目：10.1.3 單擊“下一步”，彈出“新建項目向?qū)б槐砜臻g”，表空間50MB為默認設置，可根據(jù)需要增減。10.1.4 出現(xiàn)“新建項目向?qū)б贿x項”頁。選擇用于本項目的選項，如果無法確定適當 的設置，請接受

24、默認選項。單擊“下一步” 。10.1.5 新建項目向?qū)б辉L問控制：根據(jù)需要選擇設置對您所創(chuàng)建的項目具有訪問權限 的用戶和用戶組，或者接受缺省的選項，然后單擊“下一步” 。10.1.6 新建項目向?qū)б粡椭扑x項：需要選擇復制的項目，一般選擇 Defaults 項目。（ 注：此頁的復制是指從另一個項目復制現(xiàn)有設置，可以復制項目的“視圖篩選器” 、“白定義字段” 、 “方法”和“參數(shù)” 。所以，一般不允許更改或使用 Defaults 項目中的任何 數(shù)據(jù)。 ）查看及更改項目屬性在建立了新項目以后，可以根據(jù)需要在不同的項目之間進行切換。10.2.1 進入Empower3的Quick$tart 界面，選擇

25、菜單“管理一改變系統(tǒng)/項目”。10.2.2 改變系統(tǒng)項目： 根據(jù)需要進行選擇項目或者選擇系統(tǒng)（如果存在二個或者二個以上的系統(tǒng)） 。選擇完畢后，單擊確定。如果選擇了“在該窗口切換項目系統(tǒng)” ，當前的項目系統(tǒng)會被新選中的項目系統(tǒng)所替代，如果選擇了“為項目系統(tǒng)打開新窗口” ，則會為選中的項目重新打開另外一個QuiekStart 的界面。10.2.3 在新的項目系統(tǒng)的 QuickStart 界面內(nèi)即可進行下一步的操作。系統(tǒng)配置10.3.1 在QuickStart 界面，選擇菜單“視圖一系統(tǒng)” ，查看系統(tǒng)。10.3.2 出現(xiàn)系統(tǒng)信息窗口。在該窗口中，可以在地址欄中查看顯示的地址是否與儀器的設置相同。 此外， 可從