病原細菌的形態(tài)檢查.

1、職業(yè)教育現(xiàn)代寵物技術(shù)教學(xué)資源庫病原細菌的形態(tài)檢查【訓(xùn)練目標】學(xué)會細菌染色標本片（抹片）的制備和幾種常用的染色方法?！緝x器與材料】（1）器材載玻片、接種環(huán)、眼科鑷子、顯微鏡、酒精燈、火柴、香柏油、二甲苯、吸水紙、凹玻片、蓋玻片（22mm×22mm）、生理鹽水、 95%酒精、冰醋酸、各種染色液等。（2）病料【學(xué)習(xí)內(nèi)容與步驟】（1）細菌標本片的制備玻片準備載玻片應(yīng)清晰透明， 潔凈而無油漬， 滴上水后，能均勻展開，附著性好。如有殘余油漬，可按下列方法處理：滴 95%酒精 23滴，用潔凈紗布揩擦，然后在酒精燈外焰上輕輕拖過幾次。若仍不能去除油漬，可再滴 1 2滴冰醋酸，用紗布擦凈，再在酒精燈外

2、焰上輕輕拖過。抹片制備抹片所用材料不同，抹片方法也有差異。液體材料 ( 如液體培養(yǎng)物、血液、滲出液、乳汁等 ) 可直接用滅菌接種環(huán)取一環(huán)材料，于玻片的中央均勻地涂布成適當大小的薄層。非液體材料 ( 如菌落、膿、糞便等 ) 則應(yīng)先用滅菌接種環(huán)取少量生理鹽水或蒸餾水，置于玻片中央，然后再用滅菌接種環(huán)取少量材料， 在液滴中混合，均勻涂布成適當大小的薄層。組織臟器材料可先用鑷子夾持中部，然后以滅菌或潔凈剪刀取一小塊，夾出后將其新鮮切面在玻片上壓印 ( 觸片 ) 或涂抹成一薄層。如有多個樣品同時需要制成抹片，只要染色方法相同，亦可在同一張玻片上有秩序地排好， 做多點涂抹，或者先用蠟筆在玻片上劃分成若干小

3、方格，1職業(yè)教育現(xiàn)代寵物技術(shù)教學(xué)資源庫每方格涂抹一種樣品。干燥干燥上述涂片應(yīng)讓其自然干燥。固定固定有兩類固定方法?；鹧婀潭ǎ簩⒏稍锖玫哪ㄆ?，使涂抹面向上，以其背面在酒精燈外焰上如鐘擺樣來回拖過數(shù)次，略作加熱( 但不能太熱，以不燙手為度) 進行固定?；瘜W(xué)固定：血液、組織臟器等抹片要作姬姆薩染色，不用火焰固定，而用甲醇固定，可將已干燥的抹片浸入甲醇中 23min，取出晾干；或者在抹片上滴加數(shù)滴甲醇使其作用 23min，自然揮發(fā)干燥，抹片如做瑞氏染色，則不必先做特別固定，瑞氏染料中含有甲醇，可以達到固定的目的。固定目的：殺死細菌；使菌體蛋自凝固附著在玻片上，以防被水沖洗掉；改變細菌對染料的通透性，

4、因活細菌一般不允許染料進入細菌體內(nèi)。（2）細菌標本片的染色只應(yīng)用一種染料進行染色的方法稱簡單染色法，如美藍染色法。應(yīng)用兩種或兩種以上的染料或再加媒染劑進行染色的方法稱復(fù)雜染色法。復(fù)雜染色法染色后不同的細菌或物體，或者細菌構(gòu)造的不同部分可以呈現(xiàn)不同顏色，有鑒別細菌的作用，又可稱為鑒別染色，如革蘭氏染色法、瑞氏染色法和姬姆薩染色法等。 美藍染色法在已干燥固定好的抹片上， 滴加適量的 ( 足夠覆蓋涂抹點即可 ) 美藍染色液，經(jīng) 12min，水洗，干燥 ( 可用吸水紙吸干，或自然干燥，但不能烤干 ) ，鏡檢。菌體染成藍色。 革蘭氏染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫溶液，經(jīng) 1 2min，

5、水洗；加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用 1 3min，水洗；加 95%酒精于抹片上脫色，約 0.5 1min，水洗；加稀釋的石炭酸復(fù)紅 ( 或沙黃水溶液 ) 復(fù)染 102職業(yè)教育現(xiàn)代寵物技術(shù)教學(xué)資源庫30s，水洗；吸干或自然干燥，鏡檢。革蘭氏陽性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。瑞氏染色法抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，為了避免很快變干，染色液可稍多加些，或看情況補充滴加；經(jīng) 13min，再加約與染液等量的中性蒸餾水或緩沖液，輕輕晃動玻片，使之與染液混合，經(jīng) 5min左右，直接用水沖洗 ( 不可先將染液傾去 ) ，吸干或烘干，鏡檢。細菌染成藍色，組織細胞細胞漿呈紅色，細胞核呈藍色。姬姆薩染色法抹片甲醇固定并干燥后， 在其上滴加足量染色液或?qū)⒛ㄆ胧⒂腥旧海ㄓ?5ml新煮過的中性蒸餾水中滴加 5 10滴姬姆薩染色液原液，即稀釋為常用的姬姆薩染色液）的染缸中，染色 30min，或者染色數(shù)小時至 24h，取出水洗，吸干或烘干，鏡檢。細菌呈藍青色，組織細胞細胞漿呈紅色，細胞核呈藍色。（3）細菌標本片的觀察