化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法驗(yàn)證技術(shù)規(guī)范

1、化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法驗(yàn)證技術(shù)規(guī)范（征求意見稿）為加強(qiáng)化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法研究技術(shù)，指導(dǎo)化妝品及其原料中禁限用物質(zhì)檢測方法研究和驗(yàn)證工作，規(guī)范檢測方法驗(yàn)證內(nèi)容和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步提高檢測方法的先進(jìn)性和切實(shí)可行性，制定本規(guī)范。本規(guī)范規(guī)定了適用范圍、檢測方法驗(yàn)證技術(shù)參數(shù)、檢測方法驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)。1 適用范圍本規(guī)范適用于化妝品及其原料中禁用和限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法的研究；已經(jīng)經(jīng)過預(yù)研，由相關(guān)單位提出，經(jīng)化妝品標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會審議通過立項(xiàng)，委托相關(guān)部門和化妝品標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會進(jìn)行研究的化妝品中禁用和限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法項(xiàng)目。 2 依據(jù)ISO 5725: 1994 Accuracy (t

2、rueness and precision) of measurement methods and results Part 1: General principles and definitions; ISO 5725-2 Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method; Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard

3、 measurement method.ISO 17025: 1999 General requirement for the competence of calibration and testing laboratories.ISO Guide 43-1: 1997 Proficiency testing by interlaboratory comparisons Part 1: Development and operation of proficiency testing schemes.ISO Guide 43-2: 1997 Proficiency testing by inte

4、rlaboratory comparisons Part 2: Selection and use of proficiency testing schemes by laboratory accreditation bodies. Directive 96/23/EC and Decision 2002/657/ECGB/T 6379.1-2004  測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第1部分:總則與定義 GB/T 6379.2-2004  測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第2部分:確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法 GB/T

5、6379.4-2006 測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第4部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法正確度的基本方法GB/T 6379.5-2006 測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第5部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法精密度的可替代方法GB/T 6379.6-2009  測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度） 第6部分：準(zhǔn)確度值的實(shí)際應(yīng)用 化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007年版L. Dencausse etal, Validation of HPLC Method for Quantitative Determination of Tinosorb S and Three Othe

6、r Sunscreens in A High Protection Cosmetic Product,International Journal of Cosmetic Science, 2008, 30:373-382.Ursula Vincent etal, Validation of An Analytical Procedure for the Determination of Oxidative Hair Dyes in Cosmetic Formulations, J. Cosmet. Sci., 2002,53:43-58.3 釋義本規(guī)范中所指化妝品及其原料中禁用和限用物質(zhì)同化妝

7、品衛(wèi)生規(guī)范2007版。4 檢測方法驗(yàn)證的技術(shù)要求在充分的文獻(xiàn)調(diào)研及參考國內(nèi)外相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，遵循 “ 科學(xué)、規(guī)范、實(shí)用 ” 的原則，研究和建立化妝品中禁用和限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。方法驗(yàn)證技術(shù)參數(shù)應(yīng)該包括：方法特異性、線性及線性范圍、檢測限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度、回收率和實(shí)際樣品的測定。4.1 方法驗(yàn)證技術(shù)參數(shù)的定義4.1.1方法的特異性在確定的分析條件下，分析方法檢測和區(qū)分共存組分中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的能力。4.1.2 線性及線性范圍 線性：是指在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)獲取與樣品中目標(biāo)禁限用物質(zhì)濃度或量成正比關(guān)系的程度。線性范圍：是指利用一種方法取得精密度，準(zhǔn)確度均符合要求的檢測結(jié)果，而且呈線性的目標(biāo)

8、禁限用物質(zhì)濃度或量的變化范圍。4.1.3最低檢出限和最低定量限按照檢測方法操作，目標(biāo)禁限用物質(zhì)能夠被檢出的最低濃度或最低量為最低檢出限；目標(biāo)禁限用物質(zhì)能夠被準(zhǔn)確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。4.1.4 精密度在確定的分析條件下，相同基質(zhì)中相同濃度目標(biāo)禁限用物質(zhì)的一系列測量結(jié)果的一致程度。日內(nèi)精密度（intra-day precision）：同一天測定的精密度。日間精密度（inter-day precision）：不同天測定的精密度。4.1.5 回收率提取回收率：是指在分析過程中回收到物質(zhì)的實(shí)際濃度的百分比，以樣品提取和處理過程前后目標(biāo)禁限用物質(zhì)含量百分比表示。方法回收率：在確定的分析條件

9、下，目標(biāo)禁限用物質(zhì)測得值與真實(shí)值的接近程度。4.1.6 穩(wěn)定性在確定的分析條件下，一定時(shí)間內(nèi)目標(biāo)禁限用物質(zhì)在一定溶劑或化妝品基質(zhì)中的化學(xué)穩(wěn)定性。日內(nèi)穩(wěn)定性：目標(biāo)禁限用物質(zhì)在一定溶劑或化妝品空白基質(zhì)中室溫（23）或者4冰箱放置一天的穩(wěn)定性。日間穩(wěn)定性：目標(biāo)禁限用物質(zhì)在一定溶劑或空白基質(zhì)中室溫（23）或者4冰箱放置多天的穩(wěn)定性。4.1.7 空白基質(zhì)能夠以可重復(fù)的方式獲得和處理的不含目標(biāo)禁限用物質(zhì)的化妝品來源的物質(zhì)。4.1.8 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液將適量目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入一定量的化妝品空白基質(zhì)中，經(jīng)過確定的樣品前處理方法處理，得到的溶液。4.1.9 重復(fù)條件在同一實(shí)驗(yàn)室由同一個(gè)操作人，用相同的儀器

10、和方法，對同一個(gè)檢測項(xiàng)目進(jìn)行檢測，獲得獨(dú)立檢測結(jié)果的條件。4.1.10 重復(fù)性 在重復(fù)條件下，對同一個(gè)檢測項(xiàng)目進(jìn)行檢測，獲得系列獨(dú)立檢測結(jié)果的一致性。4.2 方法驗(yàn)證內(nèi)容4.2.1方法的特異性所采用的分析技術(shù)需要克服任何可預(yù)見的干擾，特別是來自基質(zhì)組分的干擾，一般對具有代表性的空白基質(zhì)和空白基質(zhì)加目標(biāo)禁限用物質(zhì)的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進(jìn)樣分析，考察化妝品基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標(biāo)禁限物質(zhì)的測定有無干擾。4.2.2 線性及線性范圍 線性考察：將系列濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（x），信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立

11、標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍。基質(zhì)線性考察：將系列濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以目標(biāo)禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)（x），信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標(biāo)分析物濃度的變化范圍確定為線性范圍。4.2.3最低檢出限和最低定量限 在確定的分析條件下，能夠從背景中區(qū)分出目標(biāo)禁限用物質(zhì)響應(yīng)信號的最低濃度或最低量為最低檢出限，能夠?qū)δ繕?biāo)禁限用物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。4.2.4 精密度日內(nèi)精密度：通常

12、系用高低兩種濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的同一標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，同一日內(nèi)測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，考察該組測量值的彼此符合的程度，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。日間精密度：通常系用高低兩種濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的同一標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，每天測定，每次測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，考察該組測量值的彼此符合的程度以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。4.2.5 回收率提取回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄目標(biāo)禁限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，代入溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照

13、如下公式（1）計(jì)算提取回收率。方法回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄目標(biāo)禁限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計(jì)算方法回收率。 回收率= 實(shí)際測定加標(biāo)樣品中禁用和限用物質(zhì)的量/理論添加量 100% （1）4.2.6 穩(wěn)定性日內(nèi)穩(wěn)定性：通常系用高低兩種濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)同一標(biāo)準(zhǔn)溶液或基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，室溫（23）或者4冰箱放置條件下，在不同時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)行測定，代入溶液或基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)禁限用物質(zhì)的濃度，然后計(jì)算測得濃度的準(zhǔn)確度和RSD值，考察室溫（23）或者4冰箱放置條件下，目標(biāo)禁限用物

14、質(zhì)在溶液或基質(zhì)中放置一天內(nèi)的穩(wěn)定性。日間穩(wěn)定性：通常系用高低兩種濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)同一標(biāo)準(zhǔn)溶液或基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，室溫（23）或者4冰箱放置條件下，連續(xù)多天進(jìn)行測定，代入溶液或基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)禁限用物質(zhì)的濃度，然后計(jì)算測得濃度的準(zhǔn)確度和RSD值，考察目標(biāo)禁限用物質(zhì)在溶液或基質(zhì)中放置多天的穩(wěn)定性。4.2.7 重復(fù)性在重復(fù)條件下，制備一系列具有代表性基質(zhì)的樣品，每一個(gè)樣品至少分析6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，考察該組測量值的彼此符合的程度以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。4.2.8實(shí)際樣品檢測選擇具有代表性的實(shí)際樣品，嚴(yán)格按照已確定的分析條件進(jìn)行測定。4.2.9禁用物質(zhì)陽性結(jié)

15、果判定依據(jù)考察化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果必須采用適宜的方法進(jìn)行確證。采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，按照確定的分析條件，考察樣品與目標(biāo)禁用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間的一致性，以及定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度的一致性。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，建立能夠保證確證結(jié)果正確性的依據(jù)和評價(jià)指標(biāo)。4.3方法驗(yàn)證技術(shù)參數(shù)可接受的標(biāo)準(zhǔn)4.3.1方法的特異性所考察具有代表性的基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標(biāo)禁限用物質(zhì)的測定無干擾。4.3.2 線性及線性范圍 線性范圍適宜，能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)測定要求。線性良好，線性相關(guān)系數(shù)0

16、.99。4.3.3最低檢出限和最低定量限 具有足夠低的最低檢出限和最低定量限，能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)測定要求。4.3.4 精密度根據(jù)化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，精密度應(yīng)能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的測定要求，通常日內(nèi)和日間精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不應(yīng)超過表1所列水平，（特殊情況需予以說明）。表1精密度可接受范圍目標(biāo)禁限用物質(zhì)的含量精密度RSD小于或等于10ng/g20%小于或等于100ng/g并大于10ng/g 15%小于或等于1000ng/g并大于100ng/g10%大于1000ng/g5%4.3.5 回收率根據(jù)化妝品及其原料中目標(biāo)禁

17、限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，回收率應(yīng)能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的測定要求。通常提取回收率要求在85-115%之間，如果提取回收率超出85-115%的范圍，則要求方法回收率在85-115%之間（特殊情況需予以說明）。 4.3.6 穩(wěn)定性要求目標(biāo)禁限用物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液在穩(wěn)定時(shí)間內(nèi)使用和測定。4.3.7 重復(fù)性根據(jù)化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的含量及確定的分析方法，重復(fù)性應(yīng)能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)的測定要求，通常重復(fù)性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不超過已確定分析方法的精密度。4.3.8 實(shí)際樣品分析結(jié)果在重復(fù)條件下兩次獨(dú)立測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差在已確定分析方法的精密度可接受范圍

18、內(nèi)。4.3.9 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，樣品與目標(biāo)禁用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間要求一致，定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表2的規(guī)定。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，要求滿足陽性結(jié)果確證依據(jù)和評價(jià)指標(biāo)。 表2 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度50%>20-%50%>10%-20%10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%5 檢測方法多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證技術(shù)要求5.1 參加檢測方法驗(yàn)證的

19、單位參加化妝品中禁用和限用物質(zhì)檢測方法驗(yàn)證的單位或?qū)嶒?yàn)室必須是經(jīng)過計(jì)量認(rèn)證的單位或?qū)嶒?yàn)室。參加檢測方法驗(yàn)證的人員為具有資質(zhì)的上崗人員，在驗(yàn)證過程中所涉及到的量具和儀器設(shè)備必須經(jīng)過檢定和校準(zhǔn)，并且合格，精度能夠滿足已確定的分析方法的要求。 每種檢測方法參加方法驗(yàn)證的單位不少于3家。5.2 多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的檢測方法多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的檢測方法、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、空白化妝品基質(zhì)及樣品由方法建立單位提供。5.3多家實(shí)驗(yàn)室檢測方法驗(yàn)證的內(nèi)容5.3.1方法的特異性對具有代表性的空白基質(zhì)和空白基質(zhì)加目標(biāo)禁限用物質(zhì)的樣品，按照確定的樣品前處理方法處理后，進(jìn)樣分析，考察化妝品基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標(biāo)禁限物質(zhì)的測定有無干擾。5

20、.3.2 線性及線性范圍 線性考察：將系列濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（x），信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的濃度或量的變化范圍確定為線性范圍?；|(zhì)線性考察：將系列濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，記錄相應(yīng)的信號響應(yīng)值，以目標(biāo)禁限用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)（x），信號響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（y）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行相關(guān)分析得到線性方程和相關(guān)系數(shù)（r）。呈線性的目標(biāo)分析物濃度的變化范圍確定為線性范圍。5.3.3最低檢出限和最低定量限 在確

21、定的分析條件下，能夠從背景中區(qū)分出目標(biāo)禁限用物質(zhì)響應(yīng)信號的最低濃度或最低量為最低檢出限，能夠?qū)δ繕?biāo)禁限用物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定量的最低濃度或最低量為最低定量限。5.3.4 精密度日內(nèi)精密度：通常系用高低兩種濃度的目標(biāo)禁限用物質(zhì)的同一標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，同一日內(nèi)測定至少6次，記錄禁用和限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，考察該組測量值的彼此符合的程度，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。5.3.5 回收率提取回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄目標(biāo)禁限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，代入溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計(jì)算提取回收率

22、。方法回收率: 采用具有代表性的化妝品空白基質(zhì)中添加高低兩種濃度目標(biāo)禁限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的方法測定，記錄目標(biāo)禁限用物質(zhì)的信號響應(yīng)強(qiáng)度，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算禁用和限用物質(zhì)的濃度，按照如下公式（1）計(jì)算方法回收率。 回收率= 實(shí)際測定加標(biāo)樣品中禁用和限用物質(zhì)的量/理論添加量 100% （1）5.3.6 實(shí)際樣品檢測選擇具有代表性的實(shí)際樣品，嚴(yán)格按照已確定的分析條件進(jìn)行測定。5.3.7 禁用物質(zhì)陽性結(jié)果判定依據(jù)考察化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果必須采用適宜的方法進(jìn)行確證。采用色譜-質(zhì)譜技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，按照確定的分析條件，考察樣品與目標(biāo)禁用物質(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間的一致性，以及定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)慕梦镔|(zhì)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度的一致性。采用其他技術(shù)確證化妝品中禁用物質(zhì)陽性結(jié)果時(shí)，建立能夠保證確證結(jié)果正確性的依據(jù)和評價(jià)指標(biāo)。5.4多家實(shí)驗(yàn)室方法驗(yàn)證技術(shù)參數(shù)可接受的標(biāo)準(zhǔn)5.4.1方法的特異性所考察基質(zhì)中存在的物質(zhì)對目標(biāo)禁限用物質(zhì)的測定無干擾。5.4.2 線性及線性范圍 線性范圍適宜，能夠滿足化妝品及其原料中目標(biāo)禁限用物質(zhì)測定