基質固相分散_高效液相色譜法測定水稻中痕量異丙威

1、 基金項目河北省教育廳資助項目作者簡介楊容(1962-,女,教授,從事農藥殘留分析。【研究報告】基質固相分散-高效液相色譜法測定水稻中痕量異丙威楊容,馬晶軍,宋雙居(河北農業(yè)大學理學院化學系,河北保定071001摘要研究出一種應用基質固相分散(MSPD -高效液相色譜法測定水稻中痕量異丙威殘留物的新方法。并討論了應用MSPD 技術進行前處理與傳統(tǒng)殘留分析的區(qū)別。本實驗將MSPD 技術用于水稻中異丙威殘留物的高效液色譜分析,并對定量檢測條件作了詳細的研究。關鍵詞高效液相色譜;基質固相分散;異丙威;水稻中圖分類號O65717+2文獻標識碼A 文章編號1004-8685(200501-0048-02

2、Matrix solid -phase dispersion (MSPDand high performance liquid chromatographic de 2termination of trace isoprocarb in riceYang Rong ,M a Jing 2jun ,Song S huang 2ju(Department of Basic Courses ,Agricultrure University Hebei ,Baoding 071001,China AbstractA simple and reliable method for the determin

3、ation of trace isoprocarb in rice by matrix solid -phase dispersion (MSPD and liquid chromatography was presented 1The MSPD -HPLC technique used for assay of trace isoprocarb in rice was discussed and the conditions of quantitative analysis investigated in detail 1K ey w ordsHPLC ;MSPD ;Isoprocarb ;

4、Residue ;Rice異丙威(isoprocarb 是氨基甲酸酯類殺蟲劑,具有較強的觸殺作用,常用于水稻害蟲的防治1。近十幾年來,食品中農藥殘留物在世界范圍內引起了人們的關注,但是對異丙威殘留物的研究較少,尤其是利用高效液相色譜法(HPLC 23。一般應用HPLC 對食物中某種痕量物質進行測定時,樣品的前處理都比較復雜。美國Austin RL 等4報道的基質固相分散(MSPD 前處理提取分離技術,樣品吸附到很大面積上(500m 2/g C 18,然后依靠所選定的溶劑依次洗脫,可大大簡化許多殘留物前處理方式,最大限度地避免被測殘留物的流失。本試驗將MSPD 技術用于水稻中異丙威殘留物的HPL

5、C 分析,并對定量檢測條件作了詳細的研究。1試驗材料與方法111儀器及試劑高效液相色譜儀由島津(Shimadzu LC -6A 高壓輸液泵,島津SPD -6AV 紫外可見分光檢測器,7125注射進樣閥,PEHS -5C 18(5m ,416mm ×125mm 色譜柱,臺式自動平衡記錄儀組成。100140目ODS 按文獻5,6方法合成,產(chǎn)品經(jīng)碳元素分析測定符合要求。環(huán)己烷、丙酮、甲苯、甲醇均為分析純試劑,使用前經(jīng)過蒸餾提純。甲醇經(jīng)0145m 濾膜過濾。水經(jīng)3次蒸餾。異丙威標樣由農業(yè)部農藥檢測所提供。112色譜條件流動相:甲醇/水(v/v ,65/35;流量:110ml/min ;記錄紙

6、速:4mm/min ;進樣體積:10l ;紫外檢測波長:254nm 。113基質柱的制備取1g C 18鍵合相與0125g 樣品及異丙威標準溶液(25l 質量濃度為300mg/L 異丙威混合均勻,得到ODS/大米粉混合物,稱其為基質。取1支2ml 注射器中,于注射器底部墊一圓濾紙片,將基質填入后在注射器頂部再加一圓濾紙片以防止基質流出。然后用注射器塞加壓至最后體積為115ml ,制得基質柱。2結果與討論211洗脫劑用量的選擇首先用810ml 分析純環(huán)已烷淋洗按前述方法制備的基質柱。在所有情況下洗脫液的流動是重力控制。如果洗脫液流動不暢,則在柱頂用吸液球加壓,以推動重力流動。當洗脫液流出停止后,

7、柱內剩余的環(huán)已烷用上述加壓法從柱上除去。然后用8ml 甲苯洗脫異丙威,收集洗脫液,每1ml 1份,共收集8份,分別測定各份中異丙威的含量(以峰高表示。實驗結果表明,6ml 甲苯就可將異丙威提取完全。用8ml 環(huán)已烷清洗基質柱,可除去大米中的油質、蠟質及色素。對清洗液作高效液相色譜分析,結果表明環(huán)已烷中無異丙威存在。然后用6ml 甲苯洗脫,洗脫液用無油壓縮空氣流緩緩吹干。這一步驟很重要,否則在進行測定時會出現(xiàn)雜峰。吹干后的農藥殘留物用015ml 甲醇溶解,1700r/min 離心10min ,取上清液(10l 進行液相色譜分析。212流動相的確定實驗表明,以甲醇-水為流動相洗脫效果好。進一步檢驗

8、了不同配比的甲醇/水二元流動相的洗脫效果,結果以體積比為65/35(v/v 的甲醇/水作流動相為宜。213檢測波長的選擇取適當濃度的異丙威的標準溶液在200350nm 范圍內(下轉第123頁的效率。蛋白質組學的出現(xiàn)雖然只有幾年時間,但已逐步形成產(chǎn)業(yè)和市場。2003年生命科學產(chǎn)業(yè)著名市場研究公司美國加州前線戰(zhàn)略管理咨詢公司預測2008年全球蛋白質組市場將達到2618億美元。未來幾年,蛋白質組市場綜合年增長率將達到12%?？傊?蛋白質組分析技術將越來越多地應用于醫(yī)學研究中,為探索生命的奧秘和疾病的發(fā)生機理做出貢獻。參考文獻1OFarrell PH1High resolution two-dimen

9、sional electrophoresis ofproteinsJ1J Biol Chem,1975,250(10:4007-402112Bienvenut WV,Sanchez J C,Kaeminae A,et al1Toward a clinicalmolecular scanner forproteome research:parallel protein chemical pro2 cessing before and during western blotJ1Anal Chem,1999,171: 4800-480713Langen H,Gray C,Roder D,et al1

10、Form genome to proteome:proteinmap of haemophil us i nf l uenz aeJ1Electrophoresis,1997,18(7: 1184-119214Fountoulakis M,Takacs B,Langen H1Two-dimensional map of basicproteins of haemophil us i nf l uenz ae1Electrophoresis,1998,19(5: 761-76615Weldingh K,Rosenkrands I,Jacobsen S,et al1Two-dimensionale

11、lectrophoresis for analysis of Mycobacteri um t uberculosis culture fil2 trate and purification and characterization of six novelproteinsJ 1Infect lmmun,1998,66:3492-350016Thulasiraman V,McCutchen-Maloney SL,Motin VL,etal1Detection and identification of virulence factors in Yersinis pestis using SEL

12、DI ProteinChip systemJ1Biotechniques,2001,30:428-43217Dunn MJ1Studying heart disease using the proteomic approachJ.Drug Dev Therap,2000,5:76-848Seow TK,Ong SE,Liang RC,et al1Two-dimensional electrophore2sis map of the human hepatocellular carcinoma cell line,HCC-M,and identification of the separated

13、 proteins by mass spectrometryJ.Elec2 trophoresis,2000,21:1787-181319Okuzawak,Franzen B,Lindholm J,et al1Characterization of gene ex2pression in clinical lungcancer materials by two-dimensional polyacry2 lamide gel electrophpresisJ1Electrophoresis,1994,15(3-4:382-390110Sarto C,Frutiger S,Cappellano

14、F,et al1Modified expression of plas2ma glutathione peroxidoseand manganese superoxide dismutase in hu2 man renal cell carcinomaJ1Electrophoresis,1999,20(17:3458-3466111Rasm,ussen R K,Ji Hong,Eddes J S,et al1Two-dimensional geldatabase of human breast carcinoma cell expressed proteins:An up2 dateJ1El

15、ectrophoresis,1998,19(5:818-828112Alaiya AA,Franzen B,Auer G,et al1Cancer proteomics:from identi2fication of nover markers to creation of anincal learning models for tu2 mor classificationJ1Electrophoresis,2000,21:1210-12171 13Celis J E,Ostergaard M,Ramussen H H,et al1A comprehensive pro2tein resour

16、ce for the study of bladder cancer:http:/biobase1dk/cgi -bin/celisJ1Electrophoresis,1999,20(2:300-309114Witzmann FA,Fultz CD,Grant RA,et al1Regional protein alter2ations in rat kidneys induced by leael exposureJ1Electrophoresis, 1999,20:943-951115Ghafour B,Stahlbom B,Tagesson A,et al1Newly identifie

17、d proteinsin human nasal lavage fluid from non-smokers and smokers using two-dimensional gel electrophoresis and peptide mass flngerprinting J.Proteomics,2002,2:112-1201(收稿日期:2004-06-02(上接第48頁進行紫外吸光度掃描,觀察到異丙威的最大吸收峰分別在208nm和254nm處,由于208nm接近甲醇的紫外光截止波長,故選擇254nm作為檢測波長。214工作曲線、檢出限和回收率用甲醇作溶劑,準確配制一系列異丙威的標準

18、溶液,按選定的條件實驗。當異丙威的進樣量為30900ng時,以異丙威峰高(cm對其進樣量X(ng進行線性回歸,求得線性回歸方程為Y=01315+01950X,相關系數(shù)為01995;檢出限(以2倍信噪比計算為0186ng。于一定體積的提取液中添加適量的標準品后進行回收率試驗,結果見表1。表1異丙威的回收率農藥添加濃度(ng/g回收率(%(x±s,n=5平均回收率(%異丙威15030045060075090088107±413089100±510088125±412087109±511488150±417588135±411088121±4158215樣品測定對不同地區(qū)的大米樣品進行測定,每個樣品測定6次,樣品中異丙威的殘留量分別為:天津小站米1190ng/g,浙江億禾大米2180ng/g,安徽梗稻米0180ng/g,黑龍江七河源大米未檢出。3討論上述試驗表明,應用