高效液相色譜法在手性藥物拆分中的應(yīng)用

1、高效液相色譜法在手性藥物拆分中的應(yīng)用摘要：外消旋化合物的手性分離是獲得單一對映體的方法之一。隨著人們對純光學(xué)藥物的需求日益增加，各種手性分離技術(shù)得以快速發(fā)展。近幾十年來，在這些手性分離技術(shù)中，高效液相色譜法 ( HPLC ) 被公認為是一種強大、快速、高效的分離技術(shù)，它已成功應(yīng)用于對映體藥物的分離分析和制備中。HPLC用于對手性藥物分離的研究已取得很大進展，并且研發(fā)了大量可應(yīng)用于手性小分子和聚合物分離的手性固定相，大大提高HPLC的手性識別能力。本文以HPLC的手性藥物分離為焦點，介紹了近幾年高效液相色譜法手性固定相的新發(fā)展和應(yīng)用。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法 手性藥物 手性拆分Applicatio

2、n of High Performance Liquid Chromatography in Chiral Separation of PharmaceuticalsAbstract：Resolution of racemic compounds is one of the potential ways of obtaining both enantiomers. The increasing demand for enantiopure drugs has led to the development of a variety of stereoselective separation te

3、chnologies. Among several resolution techniques in the past few decades, high performance liquid chromatography ( HPLC ) is well recognized as a powerful, fast and efficient technique, which has been successfully employed for analysis and preparation of enantiomers of drugs. Enantioseparation by HPL

4、C has significantly advanced, and a large number of chiral stationary phases ( CSPs ) for HPLC have been developed using both chiral small molecules and polymers with chiral recognition abilities. This review focuses on various HPLC methods for chiral separation of pharmaceuticals, many new developm

5、ents and applications are introduced in chiral stationary phase of HPLC in recent years. Keywords：HPLC; Chiral drug; Chiral separation;引 言 手性藥物是指藥物分子結(jié)構(gòu)中引入手性中心后，得到的一對互為實物與鏡像的對映異構(gòu)體，是目前藥物研究領(lǐng)域的熱點之一。這些對映異構(gòu)體的理化性質(zhì)基本相似，僅僅是旋光性有所差別。而手性在自然界中是普遍存在的，并且人體本身就是一個手性環(huán)境，比如蛋白質(zhì)、多糖、核酸和酶等大都是手性的。絕大多數(shù)的藥物由手性分子構(gòu)成。雖然它們的理化性質(zhì)相似，

6、但在生物體內(nèi)的藥理活性、代謝過程及毒性存在顯著的差異。由于酶、受體、載體等分子都是具有手性特征的物質(zhì),手性藥物的不同對映體在生物體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)運、分布、代謝、排泄等存在顯著的差異，甚至能夠產(chǎn)生意想不到的毒性作用1, 2。因此，往往兩種異構(gòu)體中僅有一種是有效的，另一種無效甚至有害。比如，(S) -構(gòu)型多巴為治療帕金森綜合癥的首選藥物，而(R) -構(gòu)型能造成粒狀白細胞減少癥，使用極度危險；著名的“反應(yīng)停事件”，R-反應(yīng)停具有鎮(zhèn)靜作用，而S-反應(yīng)停則對胎兒有致畸作用。 手性制藥是醫(yī)藥行業(yè)的前沿領(lǐng)域，2001年諾貝爾化學(xué)獎就授予分子手性催化的主要貢獻者。不同手性藥物在體內(nèi)發(fā)揮的作應(yīng)不同，一種可能是高效

7、低度的，而另一種可能有毒害作用。手性制藥就是利用化合物的這種原理，開發(fā)出藥效高、副作用小、藥物的專一性高的藥物。據(jù)調(diào)查，1985 - 2004年上市的550個新化學(xué)合成藥物中，有313個藥物具有手性中心，其中以單一異構(gòu)體上市的手性藥物為167個，手性藥物數(shù)量呈逐年上升趨勢；2005年世界藥物的銷售總額為6020億美元，而手性藥物的銷售總額為2250億美元，占全球制藥市場銷售總額的37 %，2010年可望超過5000億美元3, 4。 一般情況下獲得手性化合物有以下幾種方法：天然物的提取、生物合成、外消旋體拆分、不對稱合成等方法5。外消旋體拆分主要有：經(jīng)典結(jié)晶法拆分、動態(tài)動力學(xué)拆分、色譜法拆分、膜

8、拆分法、萃取拆分法等技術(shù)6, 7。本文重點介紹色譜法中HPLC在手性藥物拆分中的應(yīng)用。1 高效液相色譜法簡介 高效液相色譜法( High Performance Liquid Chromatography , HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”等。HPLC是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。高效液相色譜儀可分為“高壓輸液泵”、“色譜柱”、“進樣器”、“檢測器”、“餾分收集器”以及“數(shù)據(jù)獲取與

9、處理系統(tǒng)”等部分 高效液相色譜的發(fā)展始于20世紀60年代中后期。60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后，微處理機技術(shù)用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國際和國內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計劃、蛋白質(zhì)組學(xué)用HPLC做預(yù)分離等?，F(xiàn)在該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。 高效液相色譜法有如下特點：(1) 高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。(2)

10、高效：分離效能高，可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。(3) 高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在uL數(shù)量級。(4) 應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。(5) 分析速度快、載液流速快：通常分析一個樣品在15 - 30分鐘。此外，高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜

11、峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。2 高效液相色譜的手性拆分方法 高效液相色譜技術(shù)在手性藥物拆分中應(yīng)用最廣泛的方法之一，在手性藥物質(zhì)量控制、立體選擇性的藥理學(xué)和毒理學(xué)研究等方面起著極其重要的作用。HPLC對藥物對映體的分離方法主要分間接法和直接法。2.1 間接拆分法間接法又稱衍生化法，是手性化合物對映體在分離之前把手性藥物對映體混合物在預(yù)處理液中進行柱前衍生化，形成一對非對映異構(gòu)體，溶質(zhì)分子與固定相和流動相之間作用力不同，發(fā)生差速遷移，對映體分子實現(xiàn)分離。常用的手性衍生化試劑主要有：?；噭?、胺類試劑、氯甲酸酯類和鄰苯二醛等。如Bhushan R等8合成琥珀- (S

12、) -萘普生酯，并用它做衍生化試劑處理DL -青霉胺對映體，采用反相高效液相色譜法進行分離，分離效果很好。Peccinini RG等9使用C18柱，(-) -氯甲酸薄荷酯作為衍生試劑處理血漿和尿液中的卡維地洛，用氯仿提取，用熒光檢測器檢測，對映體分離較好。該方法可應(yīng)用于對映選擇性的藥代動力學(xué)研究。Bhushan R等10考察了二氯- S -三嗪和一氯- S -三嗪作為氨基酸的衍生化試劑，產(chǎn)生的對非對映體用反相C18柱分離，流動相為乙腈和三氟乙酸水溶液的混合物，實驗結(jié)果說明，這兩種試劑可以安全地用于氨基酸的手性分析藥物分離。手性試劑衍生化法多用非手性柱即可分離，但是需要較高純度的衍生試劑，衍生化

13、反應(yīng)要嚴格控制，對不同的藥物要尋找相應(yīng)的衍生化試劑，且操作比較麻煩，只可在小范圍內(nèi)應(yīng)用。在HPLC中，直接法應(yīng)用較多，手性添加劑和手性固定相種類多樣。2.2 直接法 2.2.1 手性流動相添加劑法手性流動相添加劑法是在流動相中加入手性添加劑，然后利用非手性固定相進行拆分。常用的手性流動相添加劑有：手性離子對、CD、冠醚、手性金屬配合物、動態(tài)手性固定相等。最常用的添加劑為環(huán)糊精。如郭娜等11采用 C18固定相，以羥丙基- -環(huán)糊精為手性流動相添加劑，建立了奧昔布寧對映體的高效液相色譜拆分方法。該法拆分奧昔布寧對映體，方法簡單，靈敏度高，分離度好。劉學(xué)斌等12建立拆分新藥尤利沙星對映異構(gòu)體的 HP

14、LC手性流動相添加劑法。本文利用尤利沙星對映體與手性添加劑L -異亮氨酸和 Cu2+ 間形成三元非對映體配位化合物，在較短時間內(nèi)能達到理想的分離效果。 2.2.2 手性固定相法 目前認為手性固定相法是非常簡單而有效的方法，應(yīng)用也最為廣泛，可分離的手性藥物多。手性固定相法是將手性試劑化學(xué)鍵合到固定相上制成手性柱，外消旋體中的一個手性物質(zhì)與手性固定相發(fā)生作用，生成不穩(wěn)定的短暫復(fù)合物，而兩者在固定相中的保留時間不同，從而達到分離的目的。CSP法發(fā)展異常迅速，手性固定相的種類大致有以下幾類：手性聚合物類、刷型手性固定相、蛋白質(zhì)類、大環(huán)抗生素類、分子印跡聚合物、冠醚類、多糖類和環(huán)糊精類等13。本文對幾種

15、常用的手性固定相做一簡單介紹。3 高效液相色譜常用的手性固定相3.1 蛋白質(zhì)類手性固定相 蛋白質(zhì)是一類復(fù)雜的高分子聚合物，所含手性亞單位L -氨基酸具有手性特異性,能特異性地結(jié)合小分子，因此對手性分子具有很強的識別能力。HPLC 蛋白質(zhì)手性固定相主要有:人1 -酸性糖蛋白、牛血清白蛋白、卵黏蛋白和纖維素二糖水解酶等14。Mallik R等15制備了基于硅固定化 1 -酸性糖蛋白的手性固定相，用它分離華法令和普萘洛爾對的映體異構(gòu)體，分離結(jié)果良好。尹燕杰等16研究鹽酸昂丹司瓊對映體在纖維素衍生物及蛋白質(zhì)固定相上的保留行為，以 Chiral CEL OJ和Ultron ES - OVM 為固定相，優(yōu)

16、化色譜條件，并測定鹽酸左昂丹司瓊( R )中右旋異構(gòu)體( S )的含量。作者所建立的方法均可方便地分離鹽酸昂丹司瓊對映體并測定鹽酸左昂丹司瓊原料和注射液中右旋異構(gòu)體的含量。林麗娜等17以 1 -酸性糖蛋白為固定相，建立甲溴后馬托品溴化物及硫酸阿托品的對映體拆分方法，采用HPLC法分離，結(jié)果甲溴后馬托品溴化物及硫酸阿托品對映體可以在 1 -酸性糖蛋白固定相上得到完全分離。3.2 多糖類手性固定相 多糖類手性固定相包括纖維二糖、棉子糖、乳糖、纖維素、淀粉及它們的衍生物。Peng, L等18用氯甲基氨基甲酸苯酯衍生直鏈淀粉和纖維素做為RP-HPLC的手性固定相，考察它們的分離性能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3 -氯

17、- 4 -甲基氨基甲酸苯酯衍生的纖維素和 2 -氯- 5 -甲基氨基甲酸苯酯衍生的直鏈淀粉的分離效能，比傳統(tǒng)的二甲基氨基甲酸苯酯衍生直鏈淀粉和纖維素要好得多。Caccamese S等19利用手性多糖固定相和酸性添加劑，采用高效液相色譜法分離的芳香胺對映體和四個氨基醇對映體。纖維素和直鏈淀粉衍生的手性固定相有不同的對映體分離能力，該實驗使用一種酸性添加劑加在流動相中，提高手性柱的分離效果。黃虎等20考察了多糖類手性固定相在含有酸性或堿性添加劑的流動相下高效液相色譜法拆分 受阻滯劑對映體的效果，在直鏈淀粉-三( 3, 5 -二甲基苯基氨基甲酸酯)衍生物手性固定相( Chiralpak AD 和 C

18、hiralpak IA)上拆分 受體阻滯劑對映體，酸性添加劑的流動相體系與堿性添加劑的流動相體系相比，堿性添加劑的流動相的拆分效果比酸性添加劑的流動相要好。另外，趙峰等21葡萄糖、麥芽糖、纖維二糖、棉子糖、乳糖的對甲基苯甲酸酯經(jīng)過 3 -異氰酸丙基三乙氧基硅烷鍵合到硅膠上作為高效液相色譜的手性固定相，對16種外消旋體化合物進行了拆分。結(jié)果表明，它們的對甲基苯甲酸酯手性分離柱分別分開了8、6、10、4、5對外消旋體化合物，并且這些手性固定相之間還具有好的手性識別互補性。3.3 環(huán)糊精類手性固定相 環(huán)糊精(CD)及其衍生物是最常用的手性選擇劑。CD是一種水溶性的大環(huán)寡聚葡萄糖，通常由6 - 12個

19、互為椅式構(gòu)象手性D - (+)葡萄糖單元通過 - ( 1, 4 ) -糖苷鍵連接而成。根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同可分為 -環(huán)糊精、 -環(huán)糊精和 -環(huán)糊精，其中 -環(huán)糊精應(yīng)用最多。常用衍生化環(huán)糊精有：2, 6 -甲基- -環(huán)糊精 ( DM - - CD )、2, 3, 6 -三甲基- -環(huán)糊精( TM - - CD ) 、2 -羥丙基- -環(huán)糊精( HP - - CD )、羧甲基- -環(huán)糊精( CM - - CD )，都己成功的用于一些手性化合物的拆分22。Thamarai Chelvi SK等23用溴取代 3- ( 2- O - -環(huán)糊精)- 2 -羥基丙氧基 丙基硅制備的手性固定相，該固定相在正相和反相

20、條件下，對芳香位置異構(gòu)體和一些芳香族化合物異構(gòu)體顯示良好的選擇性。周婕等24用分步法制備全苯異氰酸酯基- -環(huán)糊精鍵合硅膠手性固定相，在高效液相色譜儀上，對氟西汀對映體進行拆分，并探討流動相組成及配比、離子強度、pH 值、流速和柱溫等影響分離的因素，結(jié)果表明，在自制手性固定相上外消旋氟西汀得以拆分。 3.4 冠醚類手性固定相 20 世紀 60年代，美國杜邦公司的C.J.Pedersen在研究烯烴聚合催化劑時首次發(fā)現(xiàn)冠醚。冠醚的空穴結(jié)構(gòu)對手性藥物有選擇作用，它主要分離機制是氧原子與對映體的氫原子之間形成氫鍵，對映體與其存在靜電和位阻作用。常見的冠醚有15 -冠- 5和18 -冠- 6。手性冠醚作

21、為手性選擇因子，適用于伯胺類化合物和氨基酸的對映體的分離。其中，(18 -冠- 6)- 2, 3, 11, 12 -四羧酸的應(yīng)用越來越受到重視。如Jeon SH等25用(-) - ( 18 -冠- 6 ) - 2, 3, 11, 12 -四甲酸作為手性固定，分離六個不同的L -甲狀腺素產(chǎn)品和四個市售的D - 和 L -甲狀腺素試劑，實驗結(jié)果良好。金京玉等26利用高效液相色譜法，采用(18 -冠- 6)- 2, 3, 11, 12 -四羧酸衍生的冠醚為手性固定相，對非甾體抗炎藥酰肼衍生物進行手性分離研究，利用此冠醚衍生的手性色譜柱，可拆分手性酸的酰肼衍生物的對映體，此分析方法也適用于其它多種手性

22、酸化合物的對映體的拆分研究。3.5 配體交換手性固定相 配體交換色譜法( ligand exchange chromatography, LEC )是由Davankov等發(fā)展的一種高效手性色譜分離方法。該類固定相多為手性氨基酸或其衍生物與二價金屬離子(Cu2+、Ni2+、Zn2+ 等) 鰲合形成的金屬離子絡(luò)合物，待測對映體與配位體可形成2個非對映的三元絡(luò)合物，經(jīng)色譜過程實現(xiàn)光學(xué)異構(gòu)體的立體選擇性分離。LEC是目前分離氨基酸對映異構(gòu)體最有效的方法之一，通常將氨基酸對映體或青霉胺衍生物通過物理吸附或化學(xué)鍵合結(jié)合到硅膠上，得到手性配體交換色譜固定相。如Liu Q等27建立了氨基酸離子液體作為手性配體

23、手性分離方法。作者用1 -烷基- 3 -甲基咪唑- L -脯氨酸作為一個手性配體與Cu2+ 絡(luò)合，用HPLC和CE分別對DL -苯丙氨酸、DL -組氨酸、DL -色氨酸和DL -酪氨酸成功分離。馬桂娟等28以單分散親水性交聯(lián)聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇雙樹脂為載體，制備新型L-羥脯氨酸聚合物鍵合高效手性配體交換固定相，對衍生和非衍生的D, L -氨基酸和 -羥基酸等9種手性化合物進行了高效液相色譜拆分，所拆分的9種手性化合物，有5種手性化合物能得到基線分離。3.6 分子印跡聚合物手性固定相分子印跡聚合物 ( molecular imprinted polymer, MIP ) 通過分

24、子印跡技術(shù)合成的對特定目標(biāo)分子（模板分子）及其結(jié)構(gòu)類似物具有特異性識別和選擇性吸附的聚合物。毫無疑問，分子印跡技術(shù)正在迅猛的發(fā)展，雖然目前主要處于實驗室階段，但其巨大的科研和商業(yè)潛力已經(jīng)展露無余。分子印跡技術(shù)的基本過程如下：(1)在一定溶劑（致孔劑）中，模板分子與功能單體之間通過共價或非共價作用形成主客體配合物；(2)加入交聯(lián)劑，使主客體配合物與交聯(lián)劑通過自由基共聚合在模板分子周圍形成高聯(lián)的剛性聚合物；(3)將聚合物中的模板分子洗脫或解離出來。田曉琴等29結(jié)合 -環(huán)糊精在水相中制備以硅膠為骨架的苯丙氨酸分子印跡聚合物，并進行色譜性能研究，以苯丙氨酸為模板分子，2 -丙烯酸胺基- 2 -甲基-

25、1 -丙磺酸為功能單體，N, N' -亞甲基雙丙烯酸胺為交聯(lián)劑，采用熱聚合法在水相中制得以硅膠為骨架的苯丙氨酸分子印跡聚合物，以此作為固定相，結(jié)果苯丙氨酸在印跡柱上的保留比在空自印跡柱上強，與賴氨酸、甫氨酸達到基線分離。銀珍紅等30以2, 4 -氯苯氧乙酸分子為模板，甲基丙烯酸為單體，乙二醇二甲基丙烯酸酷為交聯(lián)劑，甲苯和乙二醇為混合致孔劑，采用熱引發(fā)原位聚合法制備了作為高效液相色譜固定相的分子印跡整體柱，在優(yōu)化的合成條件下制備的分子印跡整體柱可在15 min 內(nèi)分離2, 4 -氯苯氧乙酸及其類似物苯氧乙酸，分離度為1. 52。3.7 刷型手性固定相 “刷型”手性固定相是HPLC 手性固

26、定相中非常重要的一類CSP，這類一般通過一定的間隔臂，連接一個單分子層的手性有機分子到硅膠載體上而制得，因而被稱之為“刷型”或“束型”CSP。其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是在手性中心附近至少含有下列功能團之一31：(1) -酸性(帶吸電子取代基)或 -堿性(帶推電子取代基)的芳香基團，在手性識別過程中能發(fā)生 -電荷轉(zhuǎn)移相互作用；(2)能形成氫鍵的原子或基團； (3)能發(fā)生偶極-偶極疊合相互作用的極性鍵或基團；(4)能提供立體排斥、范德華相互作用和(或)構(gòu)型控制的較大的非極性基團。顯然，對映體和CSP之間的手性識別是通過上述一種或幾種相互作用來實現(xiàn)的。如唐琴等32以正己烷-異丙醇二元混合劑體系為流動相，在Wh

27、elk - O1、DNB - PG 和 DNB - Leucine 3種刷型手性固定相上將藥物丙卡特羅直接拆分為( R, R /S )和( S, R /S )對映體，分離系數(shù)值達1.4 - 1.8。張美等33采用纖維素-三( 3, 5 -二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷型手性固定相( Chiralcel OD 柱) 、直鏈淀粉-三( 3, 5 -二甲基苯基氨基甲酸酯)涂敷型手性固定相( Chiralpak AD 柱) 、直鏈淀粉-三( 3, 5 -二甲基苯基氨基甲酸酯)鍵合型手性固定相( Chiralpak IA 柱) 和 Pirkle型的( S, S ) - Whelk - 01手性固定相對38種

28、外消旋體化合物進行手性拆分，它們之間的手性識別性能具有一定的互補性。3.8 大環(huán)抗生素類手性固定相 大環(huán)抗生素類鍵合手性固定相已經(jīng)成為非常有效和流行的手性固定相，它具有多個手性中性，有非常廣泛的對映體分離選擇性。由于此類固定相的結(jié)構(gòu)中含有多肽、糖類和其它可離子化基團，因此，在不同的洗脫模式下會表現(xiàn)出不同的對映體選擇性。其作用機制包括離子作用，氫鍵作用， - 鍵合作用，偶極-偶極作用，絡(luò)合作用，空間位阻作用等。常用的抗生素有四類34：糖肽類，安沙霉素類，氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。Mohamde等35使用萬古霉素手性柱，建立了同時測定血漿和藥物制劑中丁呋洛爾對映體含量的 HPLC法。如關(guān)瑾等3

29、6利用反相高效液相色譜法在大環(huán)抗生素類手性固定相萬古霉素鍵合手性固定相上直接分離了泰妥拉唑?qū)τ丑w。許哲等37采用高效液相色譜法在人環(huán)糖膚抗牛素鍵合固定相手性柱上拆分了卡巴拉汀對映體。4 小結(jié)手性化合物在醫(yī)學(xué)工業(yè)和人體代謝方面重要性已引起人們越來越多的關(guān)注，且手性藥物分離成為藥物研發(fā)領(lǐng)域的熱點。液相色譜是手性藥物拆分的主要方法，應(yīng)用最為廣泛，對大部分手性藥物幾乎都能實現(xiàn)分離。HPLC手性識別能力除了與映體的結(jié)構(gòu)有關(guān)外，其它多種因素如涂層溶劑、溶液pH 值、操作溫度等分離條件都會產(chǎn)生大的影響。因此，優(yōu)化分離條件可提高分離效率。但HPLC手性色譜柱價格昂貴，大大增加應(yīng)用成本，開發(fā)成本低、柱效高的新手

30、性柱高效液相色譜手性固定相的將來發(fā)展的一個重要的方向?？傊?，HPLC在手性藥物代謝、質(zhì)量控制及手性新藥研究等方面發(fā)揮重要作用，具有十分廣闊的應(yīng)用和發(fā)展前景。參考文獻1孫璐,楊業(yè)楠,嚴靜.手性藥物的立體選擇性藥物動力學(xué)J.中國藥物化學(xué)雜志, 2009, 16(9): 498-5022閆長會,彭雙清.手性藥物的毒理學(xué)特點及安全性評價要點J.中國新藥雜志,2008,17(16): 1372-13753MURAKAM I H. From racemates to single enantiomers chiral synthetic drugs over the last 20 yearsJ. Top

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34、iquid chromatography using new chiral derivatizing reagents synthesized from s-triazine chlorideJ. Journal of Chromatography A, 2008, 1201(1):35-4211郭娜,高新星,徐國防,等.高效液相色譜手性流動相添加法拆分奧昔布寧對映體J.色譜, 2008,26(2):259-26112劉學(xué)斌,安穗偉,滿鳳,等.高效液相色譜法手性流動相添加劑法拆分尤利沙星對映體J.藥物分析雜志,2010,30(3):425-43713劉愛寧,侯文穎,王欣.手性色譜法在體內(nèi)藥物分

35、析的應(yīng)用進展J.分析試驗室,2010,29 (S1): 183-18614穆惠英,敦惠娟,苗鳳,等.高效液相色譜中的蛋白質(zhì)手性固定相J.河北師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)2009,33(3):362-36815Mallik R, Xuan H, Hage DS. Development of an affinity silica monolith containing alpha1- acid glycoprotein for chiral separationsJ. Chromatogr A, 2007, 1149(2):294-30416尹燕杰,張啟明,田頌.蛋白質(zhì)及纖維素衍生物手性固定相分離

36、鹽酸昂丹司瓊對映體J. 藥物分析雜志,2009,29(6):971-97517林麗娜,張華燕,郭興杰. 1 -酸性糖蛋白柱分離甲溴后馬托品溴化物及硫酸阿托品對映體J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2010,27(1):52-5618Peng L, Jayapalan S, Chankvetadze B, et al. Reversed-phase chiral HPLC and LC/MS analysis with tris(chloromethylphenylcarbamate) derivatives of cellulose and amylose as chiral stationary pha

37、sesJ. Journal of Chromatography A, 2010,1217(44):6942-695519Caccamese S, Bianca S, Carter GT. Direct high-performance liquid chromatographic separation of the enantiomers of an aromatic amine and four aminoalcohols using polysaccharide chiral stationary phases and acidic additiveJ. Chirality, 2007,

38、19(8):647-653 20黃虎,金京玉,李元宰多糖衍生物手性固定相上采用酸性或堿性添加劑的流動相拆分 受體阻滯劑對映體J.色譜,2009,27(4):467-47121趙峰,遲紹明,袁黎明.寡糖對甲基苯甲酸酯手性固定相在高效液相色譜中的應(yīng)用J.分析化學(xué),2009,(2):259-26222祝芳.環(huán)糊精及其衍生物在手性藥物分離分析中的應(yīng)用J.藥學(xué)實踐雜志,2010,28(2):94-9823Thamarai Chelvi SK, Yong EL, Gong Y. Application of bromoacetate-substituted beta - CD - bonded silica particles as chiral stationary phase for HPLCJ. Journal of Seperation Science,2010, 33(1): 74-78 24周婕,施秀芳,張振中.新型環(huán)糊精手性固定相對氟西汀對映體的拆分J.鄭州大學(xué)學(xué)報(理