雌激素受體基因多態(tài)性與陜西關(guān)中地區(qū)絕經(jīng)后婦女骨密度的相關(guān)性

1、雌激素受體基因多態(tài)性與陜西關(guān)中地區(qū)絕經(jīng)后婦女骨密度的相關(guān)性         11-01-10 13:26:00     編輯：studa20             作者：王金堂，賈光輝，劉廣宇，張銀剛，賈秀紅，李萌，張宏【摘要】  目的 探討雌激素受體(ER)基因多態(tài)性在陜西關(guān)中地區(qū)漢族絕經(jīng)后婦女中的分布及其與骨密度的相關(guān)性。方法 通過對1 20

2、0例陜西關(guān)中地區(qū)漢族絕經(jīng)1-4年、年齡48-56(平均53)歲的婦女測定其不同部位的骨密度(BMD)值，并對每個樣本測其血鈣、血磷、甲狀旁腺激素(PTH)及尿型膠原交聯(lián)N末端肽(NTX)水平，同時檢測雌激素受體基因Pvu、Xba位點的多態(tài)性，方差法分析ER基因多態(tài)性與骨密度的相關(guān)性。結(jié)果 雌激素受體基因Pvu酶切多態(tài)性位點的三種基因型間在股骨頸和Ward三角的BMD存在著顯著性差異(P<0.001)。雌激素受體基因Xba酶切多態(tài)性與各檢測指標無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論 雌激素受體基因Pvu多態(tài)性可能對陜西關(guān)中地區(qū)絕經(jīng)后婦女股骨頸和Ward三角BMD有一定的影響，雌激素受體基

3、因Xba基因型與骨密度間無明顯相關(guān)性。 【關(guān)鍵詞】  骨質(zhì)疏松；雌激素受體；基因多態(tài)性；骨密度；絕經(jīng)后婦女ABSTRACT: Objective  To investigate the relationship between polymorphism of the estrogen receptor (ER) gene and bone mineral density (BMD), and bone metabolism in the healthy postmenopausal women from Guanzhong area, Shaanxi Province. M

4、ethods  In 1 200 postmenopausal healthy Han women, aged 48-56 years (average 53 years), BMD of lumbar spine and femoral neck, Wards and trochanteric areas were measured by dual energy X-ray absorptiometry. Biochemical indexes (serum Ca, serum P, ALP, PTH, CT, urine NTX) were measured and Pvu an

5、d Xbarestriction fragment length polymorphism (RFLP) of ER were analysed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The relationship between polymorphism of the ER gene and BMD, and bone metabolism were evaluate by ANCONA. The RFLP was presented as Pp (Pvu) and

6、 Xx (Xba). Results  Both the femoral neck and Wards triangle BMD values in women with the p carrier genotype were significantly (P<0.001) higher than those in women with the PP genotype, but others had no significant difference. No significant effect of the Xba genotype on BMD and biochemica

7、l indexes was found at any site (P>0.05). Conclusion  Our results suggest that the Pvu polymorphism and the ER- haplotype may be associated with BMD at several femoral neck and Wards triangle sites in postmenopausal women of Guanzhong area, Shaanxi Province.KEY WORDS: osteoporosis; estrogen

8、receptor; polymorphism; bone mineral density; postmenopausal woman    骨密度(bone mineral density, BMD)是反映骨質(zhì)疏松癥骨量減少以及評價骨質(zhì)疏松性骨折較為可靠的指標之一。骨密度的改變受環(huán)境和遺傳等多種因素的影響。其中維生素D受體基因約占遺傳因素的75%1，而雌激素受體(estrogen receptor, ER)基因也對骨密度有一定的影響。研究發(fā)現(xiàn)雌激素受體突變可導(dǎo)致骨密度明顯下降，因此ER基因已成為骨質(zhì)疏松的一個重要的候選基因2。Kobayashi等3在2002年報道

9、了日本絕經(jīng)后婦女的骨密度與ER基因的限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)有關(guān)。我們在本研究中采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)方法，通過研究雌激素受體(ER)基因多態(tài)性在陜西關(guān)中地區(qū)漢族絕經(jīng)后婦女中的分布及其與骨密度的相關(guān)性，從而為進一步探討原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病的分子機制提供客觀依據(jù)。1  材料與方法1.1  研究對象與入選標準 

10、0;研究對象均為在陜西關(guān)中地區(qū)居住三代以上、無親緣關(guān)系、無外地長久居留史的絕經(jīng)后健康漢族婦女，年齡在48-56歲之間，平均年齡53歲，且絕經(jīng)年限大于一年，肝、腎功能正常，無原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進，無其他系統(tǒng)性疾病，無服用影響骨代謝的藥品及影響骨代謝的疾病。全部入選對象填寫健康調(diào)查表。最終樣本量為1 200例。1.2  骨密度的測定 采用雙能X射線骨密度吸收儀(DEXA，美國Norland XR-36，CV為1%)測腰椎(L2-L4)、右股骨頸、大轉(zhuǎn)子和Wards三角骨密度，并使用亞洲人骨密度檢測分析軟件。測定髖部骨密度時，按固定設(shè)計旋轉(zhuǎn)糾正腿部位置。每日開機后均用模體校正，

11、錯誤率為0.5%，常年錯誤率<1%。1.3  骨代謝相關(guān)生物化學(xué)指標的測定 尿型膠原交聯(lián)N末端肽(naltrexone, NTX)的測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。ALP的檢測采用日本HITACHI公司7170型全自動生化分析儀。甲狀旁腺激素(PTH)的檢測采用Sandwich檢測法。血鈣和血磷按實驗室常規(guī)檢測。1.4  DNA的提取 采取外周全血2 mL，用蛋白酶K消化，使用血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒(天為時代公司)提取基因組DNA。1.5  對提取

12、到的DNA進行PCR反應(yīng) 引物設(shè)計參照文獻3，并由北京奧科生物工程公司合成。正引物序列為5-CTG CCA CCC TAT CTG TAT CTT TTC CTA TTC TCC-3，負引物序列為5-TCT TTC TCT GCC ACC CTG GCG TCG ATT ATC TGA-3。反應(yīng)體系：總體積25 L、Taq DNA聚合酶0.5 L(5 u/L)、dNTP 1 L(2.5 mol/L)、P1(引物1)1 L(濃度5 L/mL)、 P2(引物2)1 uL(濃度5 L/mL)、10×PCR緩沖液2.5 L、甘油2.5 L、MgCl2 1.5 L、純水、基因組DNA

13、 11 L、模板4 L。94 預(yù)變性5 min；94 變性40 s，61 退火60 s，72 延伸90 s，35個循環(huán)；循環(huán)完成后72 再延伸10 min，至4 ，備用。1.6  酶切反應(yīng) PCR擴增產(chǎn)物包括ER基因的內(nèi)含子1與外顯子2，用限制性內(nèi)切酶Pvu、Xba(華美公司)消化，酶切產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳，在1.3 kb片斷中檢測Pvu和Xba的多態(tài)性位點。1.7  統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)以均值±標準差(±s)表示；使用2檢驗分析等位基因頻率分布是否符合Hardy-weinberg定律；采用協(xié)方差分析(ANCONA)方法，對各部位BMD值及相關(guān)的生物化學(xué)指標經(jīng)對有關(guān)影響因素調(diào)整后，分析所有受試者與ER基因Pvu、Xba多態(tài)性的關(guān)系。以上采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行顯著性檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2  結(jié) 果2.1  雌激素受體基因的RFLP的檢測結(jié)果 Xba酶切出現(xiàn)3種基因型：缺乏Xba酶切位點的XX型(1.3 kb處一條帶)，雜合子Xx型(1.3 kb、910 bp、390 bp處三條帶)，存在Xba酶切位點的xx型(910 bp、390 bp處兩條帶)；Pvu酶切出現(xiàn)3