大鼠羊水入血后肺病理變化的研究

1、大鼠羊水入血后肺病理變化的研究         【摘要】  目的 觀察大鼠羊水入血后肺病理的變化。方法 精選雌性Wistar大鼠30只于妊娠20天制作羊水栓塞模型。根據(jù)注入液體性質(zhì)不同隨機分為對照組(10只)、羊水組(10只)、胎糞液組(10只)。對照組除注入生理鹽水外,皆同其余組。實驗后取大鼠左肺行HE染色光鏡下觀察，右肺行MPO檢查。結(jié)果 實驗組肺組織可見大量炎性細(xì)胞浸潤，包括白細(xì)胞（主要為中性粒細(xì)胞）、巨噬細(xì)胞及少量淋巴細(xì)胞；MPO含量明顯升高，差異有顯著性（P0.01）。結(jié)論 大鼠羊水入血后可引起

2、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤及一系列病理變化，由此引起肺損傷及臨床癥狀。 【關(guān)鍵詞】  羊水栓塞; 肺損傷; 大鼠   【Abstract】  Objective  To evaluate the pulmonary pathological changes in amniotic fluid embolism after laboring in rats. Methods  Strictly selected 30 Wistar rats(late pregnancy) and randomly divided into the con

3、trol group, amniotic group, meconium group. The procedure for control group was exactly the same as the experimental group except injecting NS.After the experiment, the left lung of the rat was perfused with 10% formalin,H.E , the right lung of the rat was taken for the activity of MPO examination.

4、Results   There are a lot of infiltration of neutrophil and macrophage in pulmonary tissue of experimental group. MPO was significantly higher in experimental group.（P0.01）. Conclusion  These results suggest that lots of infiltration of neutrophil and macrophage in pulmonary tissue ha

5、s an important role in the pathophysiology of the disease.   【Key words】  amniotic fluid embolism(AFE); pulmonary injury；rat   羊水栓塞(amniotic fluid embolism，AFE)是產(chǎn)科極為罕見的一種急癥，羊水進入母體血循環(huán)后繼發(fā)引起患者肺血管痙攣、休克及DIC為先導(dǎo)的多器官功能衰竭綜合征。發(fā)生迅速、兇險，病理生理機制復(fù)雜。近年，肺的病理變化引起關(guān)注1。筆者檢測了注入不同性狀羊水后大鼠肺的病理改變，探討肺損

6、傷在AFE中的作用。結(jié)果報告如下。   1  材料與方法   1.1  實驗動物及分組  Wistar妊娠晚期大鼠30只，體重在230350g之間，胎齡1921天，由中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院實驗動物中心提供。根據(jù)注入液體的性質(zhì)不同隨機分為3組：對照組（生理鹽水）10只,羊水組10只,胎糞液組10只。   1.2  大鼠羊水收集方法  術(shù)前12h禁食，飲水隨意。按0.35mg/100g從腹腔注入10%水合氯醛麻醉。將孕鼠置于鼠板上，固定頭部和四肢，備皮，取下腹正中切口3cm，行子宮次全切

7、除術(shù)，關(guān)腹。然后抽取羊膜腔內(nèi)的羊水。   1.3  胎糞液的制備  切開胎鼠腹壁，取下胎鼠大腸，輕輕擠壓出胎糞或用原羊水腸腔沖洗液，配制成羊水混有胎糞的胎糞液。   1.4  模型制備  大鼠行子宮次全切除術(shù)，關(guān)腹。分離右頸外靜脈和左頸總動脈，左頸總動脈插管并接通三通管連接于二道生理記錄儀連續(xù)監(jiān)測MAP；右頸外靜脈接通三通管，將制備好的注射液以2.5ml/kg的劑量從其注入。60min后由右頸外靜脈注入10%KCl 5ml 處死動物。剪開胸、腹腔，取左肺、右腎、心、肝、腸道組織適量行組織形態(tài)學(xué)觀察，右肺放入液氮中備

8、用。   1.5  主要設(shè)備和試劑  血壓監(jiān)測儀（Siemens），培養(yǎng)箱，低溫超速離心機 （美國DU PONT-SORVALL SUPER-T21型），勻漿儀（Heidolph），7230型分光光度計。   1.6  檢測方法    1.6.1  MPO測定  將手術(shù)切除的右肺從液氮內(nèi)隨機分批取出，以生理鹽水沖洗器官表面的血液，用濾紙沾干，稱重。將樣品融化后超聲粉碎細(xì)胞成分（30s，3次），60水浴孵化2h；再用超速離心機35000g/min、4離心10 min。取上清0.

9、1ml加2.9ml反應(yīng)液(0.167mg/ml鄰聯(lián)茴香胺的PBS和0.0005% H2O2)保持溫度25，使用分光光度計（波長460nm）測量30s和90s的吸光度（A）值。 MPO活性（u/g濕組織）=A×(13.5)。A是460nm條件下30s到90s吸收率的變化。系數(shù)13.5由經(jīng)驗確定。（1uMPO活性是減少1mol過氧化物/min所需酶量）。     1.7  統(tǒng)計學(xué)分析  所有計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并進行t檢驗。     

10、0;      2  結(jié)果   2.1  病理學(xué)檢查   實驗組肺組織輕度水腫，血管豐富，肺實質(zhì)局部可見少量出血，血管及支氣管周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤，包括白細(xì)胞（主要為中性粒細(xì)胞）、巨噬細(xì)胞及少量淋巴細(xì)胞。   2.2  肺組織MPO含量  各實驗組肺組織MPO含量較對照組升高，組間有明顯差異（P0.01）。  各組MPO含量變化見表1。 表1  各組肺組織MPO含量注：與對照組相比*P0.01;與胎糞液組相比*P0.01 

11、  3  討論   羊水栓塞的病理生理是以肺血管痙攣、呼吸循環(huán)衰竭及DIC為先導(dǎo)的多器官功能衰竭綜合征。盡管發(fā)生率低，但是死亡率卻高達60%80%2,3。以前認(rèn)為栓塞是主要的病因，現(xiàn)在認(rèn)為羊水進入母體內(nèi)后激發(fā)內(nèi)源性介質(zhì)的釋放是整個過程的關(guān)鍵。從發(fā)病機制上來說，認(rèn)為在某種程度上羊水栓塞的臨床癥狀從血流動力學(xué)及血液學(xué)上與過敏性休克和中毒性休克極為相似。但目前認(rèn)為，AFE并不是IgE參與的I型變態(tài)應(yīng)4。Michael等認(rèn)為AFE的發(fā)病機制可能是無抗體參加的過敏樣反應(yīng)，并將AFE稱之為“妊娠過敏樣綜合征”。在此反應(yīng)中異體物質(zhì)引起肥大細(xì)胞脫顆粒，異常的花生四烯酸代

12、謝產(chǎn)物產(chǎn)生，包括白三烯、前列腺素、血栓素等進入母體血循環(huán)引起一系列嚴(yán)重的病理生理變化5。研究證實這些遞質(zhì)引起的過敏反應(yīng)和敗血癥反應(yīng)的確與羊水栓塞綜合征的臨床癥狀和凝血機制紊亂直接相關(guān)，也可以說羊水栓塞綜合征事實上是一種類過敏反應(yīng)綜合征。   髓過氧化物酶（Myeloperoxidase, MPO）存在于中性粒細(xì)胞（PMN）的嗜天青顆粒中，PMN激活時部分MPO可以釋放，因此MPO可作為中性粒細(xì)胞的標(biāo)志物，敏感地反映出組織中性粒細(xì)胞浸潤的程度4。筆者測定羊水栓塞后的動物肺組織MPO的變化，胎糞液組升高明顯，說明除了胎糞液內(nèi)含有的有形成分造成機械栓塞外導(dǎo)致較多的中性粒細(xì)胞浸潤外

13、，羊水栓塞中大量的補體被激活、消耗，其活化裂解產(chǎn)生的片段C5a是很強的白細(xì)胞趨化因子6，它可募集激活白細(xì)胞，導(dǎo)致白細(xì)胞的浸潤聚集以損傷肺組織，本實驗已經(jīng)證實了這一點。在病理切片觀察中，筆者發(fā)現(xiàn)了多量的巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，這些結(jié)果提示，炎性反應(yīng)參與了羊水栓塞造成的肺損傷，推測不僅混濁羊水栓子對循環(huán)中的中性粒細(xì)胞有化學(xué)趨向的作用，而且補體被激活后募集激活白細(xì)胞至肺內(nèi)，進而肺中性粒細(xì)胞衍生的氧化劑及蛋白酶引起肺微血管損傷。白細(xì)胞向各個器官的實質(zhì)細(xì)胞浸潤，同時在局部通過呼吸爆發(fā)產(chǎn)生氧自由基，并釋放溶酶體酶、前列腺酶、白三烯和PAF等多種炎癥介質(zhì)，引起各生命器官毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、通透性增高，導(dǎo)致實

14、質(zhì)細(xì)胞損傷，從而引起臨床癥狀。【參考文獻】  1 Michael D,Benson MD,Richard K,et al.Immunologic studies in presumed amniotic fluid embolism. Obstet Gynecol,2001, 97: 510-514.2 Clark SL, Hankins GD, Duldley DA, et al. Amniotic fluid embolism: analysis of the national registry. Am J Obstet Gynecol,1995,172:1158.3 Burro

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