古鉤藤醇提液鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究-

1、 2.4正交實(shí)驗(yàn)選取微波功率(A 、料液比(B 、萃取時(shí)間(C 為考察因素,每個(gè)因素分別取3個(gè)水平值,見表1。正交實(shí)驗(yàn)采用L 9(34正交表,見表2,重復(fù)3次。表1單因素水平表水平A微波功率P /WB料液比/g:m lC萃取時(shí)間t /m in11191:40522311:501033851:6015表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)A B C 吸光度11110.51621220.52831330.47342120.57452230.54362310.51973130.47783210.47593320.493K 1 1.517 1.567 1.51K 2 1.636 1.546 1.595K 3 1.44

2、5 1.485 1.522k 10.5060.5220.500k 20.5450.5150.532k 30.4820.4950.507R0.0630.0270.032由表2可知,在微波萃取川芎多糖過(guò)程中,影響因素由大到小依次是A >C >B ,即微波功率對(duì)提取影響最大,其次是萃取時(shí)間和料液比。根據(jù)表2所得最佳工藝條件為A 2B 1C 2,即微波功率為231W ,料液比為140,萃取時(shí)間為10m in 。將在最佳提取條件下所得溶液濃縮,脫脂,除蛋白,脫色,80%乙醇沉淀多糖,離心并干燥至衡重,即為川芎粗多糖,用蒽酮-硫酸法測(cè)定多糖含量,計(jì)算得提取率為3.06%。3討論采用單因素與正交

3、實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法對(duì)微波輔助提取川芎多糖的影響因素進(jìn)行了研究,確定最佳工藝條件為微波功率為231W ,料液比為140,萃取時(shí)間為10m in 。多糖具有調(diào)節(jié)免疫、抗心肌缺血、降血脂、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老等重要的藥理作用,且無(wú)毒副作用,現(xiàn)在被作為臨床用藥或疫苗,是廣泛研究的焦點(diǎn)3。提取多糖的方法有多種,除了微波法外,還包括超聲波法、酶法、超臨界萃取法、雙水相萃取法和大孔吸附樹脂法等,因此研究選用合適的方法提取川芎多糖非常有必要。我們首次采用微波技術(shù)從川芎中提取多糖,與其他方法相比,具有時(shí)間短、提取率較高的特點(diǎn)46。參考文獻(xiàn):1范智超,張志琪.川芎多糖的提取、純化及抗氧化活性的研究J .天然

4、產(chǎn)物研究與開發(fā),2005,11:561.2易劍平,畢雅靜,宋秀榮,等.蒽酮-硫酸法測(cè)定枸杞多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的研究J .北京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,31(6:643.3初敏,齊錫祥,朱飛,等.多糖研究概述J .中藥研究與信息,2003,5(4:18.4向鳴,王維香.超聲波提取川芎多糖的工藝優(yōu)選J .中成藥,2008,30(11:61.5李玲,王維香,王曉君.果膠酶法提取川芎多糖工藝的研究J .中藥材,2008,31(4:600.6唐崎,王維香,王曉君.堿法提取川芎多糖的研究J .時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(9:81.收稿日期:2008212212;修訂日期:2008206203基金項(xiàng)目:廣西中醫(yī)學(xué)

5、院課題(No .BY L07006作者簡(jiǎn)介:張興燊(19632,男(漢族,廣西南寧人,現(xiàn)任廣西中醫(yī)學(xué)院副教授,學(xué)士學(xué)位,主要從事中藥藥效學(xué)研究工作.古鉤藤醇提液鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究張興燊,文麗艷,秦紅玲,陳紅嵐,雷宗煥,李麗,周芳(廣西中醫(yī)學(xué)院,廣西南寧530001摘要:目的研究古鉤藤醇提液的鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用。方法采用小鼠熱板法和扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),觀察古鉤藤醇提液的鎮(zhèn)痛作用,觀察小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性和二甲苯至小鼠耳廓腫脹的影響,觀察其抗炎作用。結(jié)果古鉤藤醇提液具明顯的鎮(zhèn)痛作用,大劑量能降低毛細(xì)血管通透性,抑制由二甲苯所致的炎癥反應(yīng),可減輕小鼠耳廓腫脹的作用。結(jié)論古鉤藤醇提液有明顯的鎮(zhèn)痛和

6、一定的抗炎作用。關(guān)鍵詞:古鉤藤;鎮(zhèn)痛抗炎;藥理作用中圖分類號(hào):R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B 文章編號(hào):100820805(20091122735202古鉤藤又名海上霸王、白葉藤、牛角藤、大暗消等等,為蘿藦科植物古鉤藤C ryptolepis buchananii Roe m.et Schult 的地上部分。多生于陽(yáng)坡,攀援于其他樹上,分布于廣東、廣西、云南、貴州等地,具有舒筋活絡(luò)、消腫止痛、解毒等功效,用于治療腰痛、腹痛、跌打損傷、骨折、癰瘡、癬等疾病1。目前,鎮(zhèn)痛抗炎作用的藥物多為西藥,且副作用多,而中草藥古鉤藤民間使用也有這方面的作用,是值得研究、開發(fā)的鎮(zhèn)痛抗炎藥。前期我們已經(jīng)做過(guò)古鉤藤根、

7、莖水煎液大、小劑量組鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用的研究,證明水煎液具備一定的鎮(zhèn)痛抗炎作用,或有這種作用的趨勢(shì),其鎮(zhèn)痛抗炎作用不穩(wěn)定2。本科研小組現(xiàn)在對(duì)古鉤藤醇提液鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,旨在對(duì)其進(jìn)一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。1材料1.1動(dòng)物小鼠,雌雄兼用,體質(zhì)量(20±2g,均由廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物證號(hào)1104,根據(jù)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)和性別分籠喂養(yǎng),自由采食飲水。1.2儀器臺(tái)式離心機(jī);XZ B -2B 型自控溫度熱板儀,山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備供應(yīng)維修站制造,設(shè)備號(hào)為:3-109-1-7-6;722型光柵分光光度計(jì),上海第三分析儀器廠,設(shè)備號(hào)為:3-109-4-4-93。1.3藥品與

8、試劑干燥古鉤藤全草,采自廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物園;硫酸羅通定注射液,廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn),批號(hào)020902;醋酸地塞米松,天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公5372L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESE ARCH 2009VOL .20NO.11時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥2009年第20卷第11期 司生產(chǎn),批號(hào)070823;醋酸,上海試一化學(xué)試劑有限公司。伊文思藍(lán),上海化學(xué)試劑公司進(jìn)口分裝,批號(hào)F -9800。二甲苯,齊魯石化公司研究院試劑公司;生理鹽水,濟(jì)南永寧制藥廠。1.4制備古鉤藤水煎劑古鉤藤全草300g,加8倍水浸泡1h,煎

9、煮40m in,煎煮2次,合并藥液過(guò)濾濃縮至200m l (1.00g/m l ,后再加同等劑量的濃度為95%的酒精放置24h 后醇提,按所需要的劑量配成溶液大劑量為30g/kg,小劑量為15g/kg,以備用。2方法和結(jié)果2.1小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)3取雌性小鼠,放入(55±0.5熱板測(cè)痛儀中,以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標(biāo),預(yù)測(cè)小鼠藥前痛閾值。以痛閾值小于30s 視為合格小鼠,將痛閾值合格的40只小鼠隨機(jī)分為4組,每組10只。分別是古鉤藤大劑量組,劑量為30g/kg;古鉤藤小劑量組,劑量為15g/kg;陽(yáng)性對(duì)照藥羅通定組,劑量30mg/kg;生理鹽水對(duì)照組,劑量為20m l/kg 。灌胃給藥

10、兩次,時(shí)間間隔為4h 。末次給藥后30,60,90,120m in 分別測(cè)定痛閾值。在測(cè)定中,如60s 內(nèi)無(wú)痛反應(yīng),應(yīng)立即取出,并以60s 計(jì)算。各給藥組與對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以 x ±s 表示,統(tǒng)計(jì)方法用t 檢驗(yàn)法。結(jié)果見表1。表1古鉤藤醇提液對(duì)熱板法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用( x ±s 組別劑量C /g kg -1給藥前痛閾t /s給藥后痛閾值t /s30m in 60m in 90m in 120m in 生理鹽水-21.08±6.1016.396±7.8819.779±14.15913.344±9.03717.707±11

11、.125羅通定0.0319.51±28.0055.678±9.15455.227±15.09050.640±16.13141.830±16.828古鉤藤(大3020.67±7.7621.604±4.96732.098±6.242329.568±8.72831.527±6.573古鉤藤(小1523.56±8.3828.570±10.939333.074±7.783327.555±9.36029.417±6.064與生理鹽水組比較,3P <0.

12、05,P <0.01;n =10痛閾值提高百分率(%=(藥后痛閾值-藥前痛閾值/藥前痛閾值×100%。表1結(jié)果表明,古鉤藤醇提液大劑量組在藥后60,90,120m in 能明顯提高小鼠痛閾值,而古鉤藤醇提液小劑量組在藥后30,60,90,120m in 也能明顯提高小鼠痛閾值,從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以看出古鉤藤醇提液有鎮(zhèn)痛作用。2.2小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)3取體質(zhì)量1822g 健康小鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)分為4組,分組及給藥方法同“2.1”項(xiàng)。末次給藥后30m in 腹腔注射0.6%冰醋酸0.2m l /只,同時(shí)用秒表計(jì)時(shí),記錄小鼠15m in 內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)。各給藥組與對(duì)照組比較,

13、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以 x ±s 表示,統(tǒng)計(jì)方法用t 檢驗(yàn)法。結(jié)果見表2。藥物鎮(zhèn)痛百分率(%=(對(duì)照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)/對(duì)照組扭體次數(shù)×100%。表2古鉤藤醇提液對(duì)冰醋酸致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用( x ±s 組別劑量C /g kg -115m in 內(nèi)扭體次數(shù)鎮(zhèn)痛率(%生理鹽水-33.80±14.574-羅通定0.039.40±8.59272.19古鉤藤(大3019.00±5.24943.79古鉤藤(小1520.30±10.771339.95與生理鹽水組比較,3P <0.05,P <0.01;n =10表2結(jié)果表明,古鉤藤

14、醇提液大、小劑量組對(duì)冰醋酸致痛小鼠能顯著減少小鼠的扭體次數(shù),具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。但從各劑量組的鎮(zhèn)痛百分率來(lái)看,鎮(zhèn)痛百分率提高不明顯。2.3小鼠二甲苯耳腫脹實(shí)驗(yàn)3取體質(zhì)量1822g 健康雄性小鼠48只,陽(yáng)性對(duì)照組藥物改地塞米松,劑量為4.5mg/kg,其他分組與給藥均同“2.1”項(xiàng)。第8天每只小鼠右耳廓前后均勻涂擦當(dāng)日配制的二甲苯0.1m l/只,致炎15m in 后將小鼠脫頸椎處死,剪下小鼠左右耳,用打孔器(直徑6mm 分別在左、右耳同一部位打下等大的圓形耳片,分別在電子天平上稱重后,計(jì)算耳腫脹度。各給藥組與對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以 x ±s 表示,統(tǒng)計(jì)方法用t 檢驗(yàn)法。耳腫脹度=右耳

15、重量-左耳重量;腫脹抑制率(%=(對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度/對(duì)照組腫脹度×100%。結(jié)果見表3。表3古鉤藤醇提液對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響( x ±s 組別劑量C /g kg -1耳廓腫脹度m /mg 抑制率(%生理鹽水- 5.72±1.97-地塞米松0.0045 2.89±1.35349.47古鉤藤(大30 3.29±2.27342.66古鉤藤(小15 5.33±2.5833 6.82與生理鹽水組比較,3P <0.05,33P 0.05;n =12表3結(jié)果表明,古鉤藤醇提液大劑量組能明顯抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹,而小劑量組對(duì)

16、此作用則無(wú)明顯抑制作用。從抑制率看,大劑量組具有一定抑制耳廓腫脹的趨勢(shì),而古鉤藤根小劑量組的抑制率為最差。2.4對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性影響的實(shí)驗(yàn)3取體質(zhì)量1822g 健康小鼠48只,雌雄各半,分組及給藥方法同“2.3”項(xiàng)。第8天,每只小鼠尾靜脈注射2.5%伊文思藍(lán)0.1m l /10g (體重,并同時(shí)腹腔注射0.6%冰醋酸0.2m l /只,15m in 后用6m l 生理鹽水腹腔注射,輕柔小鼠腹部,然后斷頭處死小鼠,剪開腹腔,用吸管吸取腹腔洗出液約56m l,3000r /m in 離心5m in,取上清液3m l 在722分光光度計(jì)590n m 處測(cè)定吸收度(OD 值。各給藥組與對(duì)照組比較,

17、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以 x ±s 表示,統(tǒng)計(jì)方法用t 檢驗(yàn)法。結(jié)果見表4。表4古鉤藤醇提液對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響( x ±s 組別劑量C /g kg -1吸收度(OD 值生理鹽水-0.27±0.15地塞米松0.00450.50±0.253古鉤藤(大300.51±0.223古鉤藤(小150.44±0.2833與生理鹽水組比較,3P <0.05,33P 0.05;n =12表4結(jié)果表明,古鉤藤醇提液大劑量組能降低小鼠毛細(xì)血管通透性,減少腹腔液體的滲出,具有明顯的抗炎作用。而古鉤藤小劑量組效果不明顯。3討論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,古鉤藤醇提液大、小劑量組都具有一定的鎮(zhèn)痛作用,并從中也看到其鎮(zhèn)痛作用較好;而抗炎作用只在大劑量組存在,小劑量組抗炎作用不明顯,但至少可以看出古鉤藤醇提液或有這種作用的趨勢(shì),這點(diǎn)以后再做進(jìn)一步的深入研究,其鎮(zhèn)痛和抗炎作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究,以后在研究中應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行藥物提純?cè)僮鲅芯?。古鉤藤是瑤族人民民間長(zhǎng)期使用的藥材,有舒筋活絡(luò)、消腫止痛等功效,主要用于治療腰腿痛、風(fēng)濕痛、痛經(jīng)、軟組織扭傷等,療效顯著,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與民間臨床使用基本一致。本實(shí)