第一章_植物工廠化育苗的工廠與設備

1、植物工廠化育苗的工廠與設備2第一節(jié)第一節(jié) 實驗室實驗室一一 、實驗室、實驗室 植物組織培養(yǎng)是在嚴格無菌的條件下進行植物組織培養(yǎng)是在嚴格無菌的條件下進行的。要做到無菌的條件，需要一定的設備、器的。要做到無菌的條件，需要一定的設備、器材和用具，同時還需要人工控制溫度、光照、材和用具，同時還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。濕度等培養(yǎng)條件。 實驗室設計原則：實驗室設計原則：保證無菌操作，達到工保證無菌操作，達到工作方便，防止污染。作方便，防止污染。準備室準備室培養(yǎng)室培養(yǎng)室溫溫 室室Text實驗室實驗室接種室接種室接種室接種室實驗室組成：實驗室組成：4基本實驗室布局平面圖基本實驗室布局平面圖實實

2、驗驗臺臺擱擱架架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培培養(yǎng)養(yǎng)架架培培養(yǎng)養(yǎng)架架藥藥品品及及儀儀器器柜柜無菌臺無菌臺無菌臺無菌臺擱擱架架拉拉窗窗冰箱冰箱 擱擱 架架水槽水槽電電爐爐門門4.5m3.0m3.5m4.0m準備室準備室緩沖室緩沖室無菌室無菌室培養(yǎng)室培養(yǎng)室準備實驗室準備實驗室5緩沖室緩沖室6無菌室無菌室7無菌室無菌室89 9無菌室無菌室10101111培養(yǎng)架培養(yǎng)架1212培養(yǎng)室培養(yǎng)室13溫室溫室1414第二節(jié)第二節(jié) 儀器與設備儀器與設備15冰箱冰箱酸度計酸度計電爐電爐1.基本設備基本設備17天平天平純水器純水器18攪拌器攪拌器19蒸汽壓力滅菌鍋蒸汽壓力滅菌鍋2.滅菌設備滅菌設備20212222過濾滅菌

3、裝置過濾滅菌裝置2323紫外滅菌燈管紫外滅菌燈管3、無菌操作設備、無菌操作設備 超凈工作臺超凈工作臺242525超凈工作臺超凈工作臺無菌接種箱無菌接種箱26恒溫振蕩培養(yǎng)箱恒溫振蕩培養(yǎng)箱 光照培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)箱 4、培養(yǎng)設備、培養(yǎng)設備 27搖搖 床床285、細胞學鑒定設備、細胞學鑒定設備 光學研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡光學研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡29倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學顯微鏡光學顯微鏡301、玻璃器皿、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿及實驗用具三、培養(yǎng)器皿及實驗用具培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿三角瓶三角瓶培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶2、金屬材質用具、金屬材質用具鑷子鑷子 解剖刀解剖刀接種針接種針32接種盤接種盤3333

4、第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是決定植物組織培養(yǎng)成敗的關鍵因素培養(yǎng)基是決定植物組織培養(yǎng)成敗的關鍵因素之一。之一。 培養(yǎng)基的構成要素通?？煞譃椋号囵B(yǎng)基的構成要素通常可分為：水分；水分；無機鹽類；有機營養(yǎng)成分；植物生長調節(jié)物無機鹽類；有機營養(yǎng)成分；植物生長調節(jié)物質；天熱物質；質；天熱物質； pH；凝固劑；凝固劑等。等。 3434 構成培養(yǎng)基的絕大部分組分為水分。構成培養(yǎng)基的絕大部分組分為水分。 在研究上在研究上，常用蒸餾水來配制培養(yǎng)基，而最，常用蒸餾水來配制培養(yǎng)基，而最為理想的水應該是純水。為理想的水應該是純水。（一）水分（一）水分大量營養(yǎng)元素大量營養(yǎng)元素：占干物質重量的：占干物質重量的0.1

5、%以上；以上； C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等等9種種微量營養(yǎng)元素微量營養(yǎng)元素：占干物質重量的：占干物質重量的0.1%以下以下 有的只含有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等等7種種按照國際植物生理協(xié)會的建議：按照國際植物生理協(xié)會的建議： 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為大量元素的元素為大量元素 所需濃度所需濃度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素為微量元素的元素為微量元素35（二）礦質元素（二）礦質元素1.大量元素大量元素N是蛋白質、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、是蛋白質、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿

6、等的組成成分，在植物生命活動中占有重生物堿等的組成成分，在植物生命活動中占有重要的位置。要的位置。P是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。等。 K對碳水化合物合成，轉移，以及氮素代謝等有對碳水化合物合成，轉移，以及氮素代謝等有密切關系。密切關系。36MgMg、S S、CaCa是葉綠素的組成成分，又是激酶的是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對核蛋白體結構具有穩(wěn)定作用；活化劑，對核蛋白體結構具有穩(wěn)定作用；S S是含是含S S氨基酸的蛋白質的組成成分。氨基酸的蛋白質的組成成分。CaCa是構成細胞壁的成分，對細胞分裂，穩(wěn)定質是構成細胞壁的成分，

7、對細胞分裂，穩(wěn)定質膜結構有顯著作用，此外，膜結構有顯著作用，此外，CaCa及鈣調素在細胞及鈣調素在細胞信號轉導中起重要作用。信號轉導中起重要作用。2、微量元素、微量元素 在微量元素中，在微量元素中，鐵鐵的使用最大的使用最大 ： 一些氧化酶的組成成分一些氧化酶的組成成分 葉綠素形成的必要條件葉綠素形成的必要條件 使用乙二胺四乙酸鐵（使用乙二胺四乙酸鐵（EDTA-FeEDTA-Fe）鰲合）鰲合物防止鐵的沉淀物防止鐵的沉淀38 硼硼與蛋白質合成、糖類運輸有著密切的關系與蛋白質合成、糖類運輸有著密切的關系 銅銅是某些氧化酶的成分，能夠促進離體根的生是某些氧化酶的成分，能夠促進離體根的生長長 錳錳參與植

8、物的光合、呼吸代謝參與植物的光合、呼吸代謝 鉬鉬參與氮素的代謝參與氮素的代謝 氯氯是光合作用水光解的活化劑是光合作用水光解的活化劑 微量元素的主要作用是作為微量元素的主要作用是作為酶的輔助因子或激活酶的輔助因子或激活劑劑參與代謝的調節(jié)。參與代謝的調節(jié)。39（三）有機營養(yǎng)成分（三）有機營養(yǎng)成分 培養(yǎng)基中的有機營養(yǎng)成分包括培養(yǎng)基中的有機營養(yǎng)成分包括糖類物質糖類物質 、維生素類維生素類 和氨基酸類。和氨基酸類。1. 1.碳源碳源 碳源物質包括糖類物質、醇類物質和有機碳源物質包括糖類物質、醇類物質和有機酸，以酸，以糖類糖類物質最重要。物質最重要。 糖類物質特點：糖類物質特點： 具有熱易變的性質具有熱易

9、變的性質 利于吸收和利用利于吸收和利用 使用濃度一般在使用濃度一般在2%2%5%5% 提供能源和調節(jié)滲透壓提供能源和調節(jié)滲透壓412. 2.維生素類維生素類 以各種以各種輔酶輔酶的形式存在的形式存在 參與多種代謝活動參與多種代謝活動 對生長，分化等有很好的促進作用對生長，分化等有很好的促進作用 主要分為主要分為脂溶性維生素脂溶性維生素和和水溶性維生素水溶性維生素 常用維生素有常用維生素有V VB1B1和和V VB6B6 42 蛋白質的組成成分蛋白質的組成成分 有機氮源有機氮源 可直接被細胞吸收利用可直接被細胞吸收利用 培養(yǎng)基中常用的是培養(yǎng)基中常用的是甘氨酸甘氨酸 3. 3.氨基酸氨基酸434.

10、 4.肌醇肌醇 環(huán)己六醇環(huán)己六醇 細胞壁的構建材料細胞壁的構建材料 參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動生理活動 促進活性物質發(fā)揮作用促進活性物質發(fā)揮作用44（四）植物生長調節(jié)劑（四）植物生長調節(jié)劑 植物生長調節(jié)劑不僅可以植物生長調節(jié)劑不僅可以促進植物組織的促進植物組織的脫分化和形成愈傷組織，還可以誘導不定芽、不脫分化和形成愈傷組織，還可以誘導不定芽、不定胚的形成。定胚的形成。 最常用的有最常用的有生長素和細胞分裂素生長素和細胞分裂素，有時也，有時也會用到會用到赤霉素和脫落酸赤霉素和脫落酸。 1. 1.生長素類生長素類 促進細胞伸長和分裂促進細胞伸長

11、和分裂 促進生根、抑制器官脫落、性別控制、延促進生根、抑制器官脫落、性別控制、延長休眠、頂端優(yōu)勢、單性結實長休眠、頂端優(yōu)勢、單性結實 誘導愈傷組織形成誘導愈傷組織形成 溶于溶于95%95%酒精或酒精或0.1mol/L0.1mol/L的的NaOHNaOH中，后者的中，后者的溶解效果更好溶解效果更好 常用的生長素：常用的生長素： IAA(IAA(吲哆乙酸吲哆乙酸) ) NAA ( NAA (萘乙酸萘乙酸) ) 2,4-D(2,4 2,4-D(2,4，二氯苯氧乙酸，二氯苯氧乙酸) ) IBA( IBA(吲哆丁酸吲哆丁酸) )462. 2.細胞分裂素類細胞分裂素類 促進細胞分裂和分化促進細胞分裂和分化

12、 誘導胚狀體和不定芽的形成誘導胚狀體和不定芽的形成 延緩組織的衰老并增強蛋白質的合成延緩組織的衰老并增強蛋白質的合成 用于離體成花的調控用于離體成花的調控 溶于溶于0.50.5-1.0mol/L1.0mol/L的鹽酸或稀薄的的鹽酸或稀薄的NaOHNaOH中中 常用的細胞分裂素：常用的細胞分裂素： KT (KT (激動素激動素) ) BA(6- BA(6-卞基腺嘌呤卞基腺嘌呤) ) 2-ip( 2-ip(異戊烯氨基嘌呤異戊烯氨基嘌呤) ) ZT ZT（玉米素）（玉米素）473.赤霉素類和脫落酸赤霉素類和脫落酸A、赤霉素類、赤霉素類 組織培養(yǎng)中不常使用組織培養(yǎng)中不常使用 加速細胞的伸長生長加速細胞

13、的伸長生長 促進細胞的分裂促進細胞的分裂 主要是主要是GA3 B、脫落酸、脫落酸 抑制細胞分裂和伸長抑制細胞分裂和伸長 促進脫落和衰老促進脫落和衰老 促進休眠和提高抗逆能力促進休眠和提高抗逆能力GA3脫落酸脫落酸48 促進某些愈傷組織和器官的生長促進某些愈傷組織和器官的生長 化學成分不明、復雜化學成分不明、復雜 天然營養(yǎng)混合物天然營養(yǎng)混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物（五）天然復合物（五）天然復合物49 50（六）（六）pH 在滅菌前，培養(yǎng)基的在滅菌前，培養(yǎng)基的pH一般被調節(jié)一般被調節(jié)到到5.06.0 之間，最常用的之間，最常用的pH為為5.75.8

14、。 pH過高時，培養(yǎng)基會變硬；過高時，培養(yǎng)基會變硬；pH過過低時，則影響培養(yǎng)基的凝固低時，則影響培養(yǎng)基的凝固。50（七）凝固劑（七）凝固劑瓊脂是使用最普遍的凝固劑瓊脂是使用最普遍的凝固劑用量一般在用量一般在6-10g/L之間之間顏色以淺、透明度高好，潔顏色以淺、透明度高好，潔凈為上品凈為上品 除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)中還可以使用瓊脂糖、結冷膠中還可以使用瓊脂糖、結冷膠等。等。51（八）其他添加物（八）其他添加物521. 1.活性炭活性炭 吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質 抑制外植體褐變抑制外植體褐變 防止玻璃苗的產生防止玻璃苗的產生

15、促進培養(yǎng)物生長和分化促進培養(yǎng)物生長和分化 促進生根促進生根 2.抗生素抗生素 防止外植體內生菌造成的污染防止外植體內生菌造成的污染活性炭活性炭5353二、培養(yǎng)基的基本類型二、培養(yǎng)基的基本類型培養(yǎng)基形態(tài)不同：培養(yǎng)基形態(tài)不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)過程不同：培養(yǎng)過程不同：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基其作用不同：其作用不同：誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基 營養(yǎng)水平不同：營養(yǎng)水平不同：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基的種類（一）培養(yǎng)基的種類成分和濃度不同：成分和濃度不同：含鹽量較高的培養(yǎng)基、硝酸鉀含

16、量含鹽量較高的培養(yǎng)基、硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基、中等無機鹽含量的培養(yǎng)基、低無機鹽含較高的培養(yǎng)基、中等無機鹽含量的培養(yǎng)基、低無機鹽含量的培養(yǎng)基量的培養(yǎng)基54541、MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 無機鹽濃度高無機鹽濃度高 高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽 含有一定數(shù)量的銨鹽含有一定數(shù)量的銨鹽 營養(yǎng)豐富營養(yǎng)豐富 不需要添加更多的有機附加物不需要添加更多的有機附加物（二）幾種常見培養(yǎng)基的特點（二）幾種常見培養(yǎng)基的特點2、White培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1943年由年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設計為培養(yǎng)番茄根尖而設計 1963年作了改良，提高年作了改良，提高MgSO4的濃度和增加硼元素的濃度和增加硼

17、元素 無機鹽濃度較低無機鹽濃度較低 使用廣泛使用廣泛 在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果大量元素大量元素含量含量微量元素微量元素含含量量鐵鹽鐵鹽含量含量有機物有機物含含量量其他其他含量含量KNO380H3BO31.5Fe2(SO4)32.5肌醇肌醇100蔗糖蔗糖30000Ca(NO3)2 4H2O300MnSO4 4H2O7.0煙酸煙酸0.3瓊脂瓊脂8000MgSO4 7H2O720ZnSO4 7H2O3.0鹽酸硫胺鹽酸硫胺素素0.1NaH2PO4 4H2O16.5MoO30.0001鹽酸吡哆鹽酸吡哆辛辛0.1KCl65CuSO4 5H2O0.001甘氨酸甘氨

18、酸3Na2SO4200附表：附表：White培養(yǎng)基培養(yǎng)基563、B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1968年由年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細胞而設計等為培養(yǎng)大豆根細胞而設計 含有較低的銨鹽含有較低的銨鹽 較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l）組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l) KNO3 2500 FeSO47H2O27.8 CaCl22H2O 150 CuSO45H2O 0.025 MgSO47H2O 250 蔗糖蔗糖40 (NH4)2SO4 134 pH 5.5KI 0.75 肌醇肌醇100 H3BO4 3.0 煙酸煙酸 1.0 MnSO44H2O 1

19、0 鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 1.0 ZnSO47H2O 2.0 激動素激動素 0.1 Na2MoO42H2O0.25 2,4D 0.11.0 CoCl26H2O0.025 鹽酸硫銨鹽酸硫銨 10 Na2-EDTA37.3 B5培養(yǎng)基的組成和配方培養(yǎng)基的組成和配方574、N6培養(yǎng)基培養(yǎng)基 1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)設計年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)設計 KNO3和和(NH4)2SO4含量高，不含鉬含量高，不含鉬組成成分組成成分 數(shù)量數(shù)量(mg/l) 組成成分組成成分(mg/l) KNO3 2.3 Na2EDTA 37.3 CaCl22H2O 166 FeSO47H2O 27

20、.8 MgSO47H2O 185蔗糖蔗糖 50 KH2PO4 400 pH 5.8 (NH4)2SO4 463 煙酸煙酸 0.5 KI 0.8 鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 0.5 H3BO3 1.6 甘氨酸甘氨酸 2.0 MnSO44H2O 4.4 鹽酸硫銨鹽酸硫銨 1.0 ZnSO47H2O 1.5N6培養(yǎng)基組成及配方培養(yǎng)基組成及配方58第三章第三章 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 為了減少工作量，減小誤差，最方便為了減少工作量，減小誤差，最方便的方法是預先配制好不同組分的培養(yǎng)基母的方法是預先配制好不同組分的培養(yǎng)基母液。液。 一、培養(yǎng)基母液的配制 601.配制母液原則配制母液原則 相同類型的試劑

21、混合；相同類型的試劑混合； 易形成沉淀的藥品分開；易形成沉淀的藥品分開； 母液濃度要適宜；母液濃度要適宜； 用量要認真計算和核對；用量要認真計算和核對； 藥品要準確稱量。藥品要準確稱量。 61 2.MS培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基母液的配制 62 MS培養(yǎng)基母液根據(jù)試劑特性通常配成培養(yǎng)基母液根據(jù)試劑特性通常配成五種母五種母液液，即大量元素母液（即大量元素母液（10或或20倍）、微量元素母液倍）、微量元素母液（100或或1000倍）、倍）、Fe鹽（鹽（100倍）、倍）、Ca鹽（鹽（50倍）、倍）、有機物（有機物（100倍）倍）。 633.激素母液的配制激素母液的配制 64生長素類、赤霉素類及脫落酸等用

22、生長素類、赤霉素類及脫落酸等用95乙醇溶解；乙醇溶解；細胞分裂素類用細胞分裂素類用1N HCl或或1N NaOH溶解。溶解。 通常激素母液濃度生長素類為通常激素母液濃度生長素類為0.10.5 mg/ml, 細胞分裂素母液濃度為細胞分裂素母液濃度為0.21.0 mg/ml.二、培養(yǎng)基的配制二、培養(yǎng)基的配制 水水藥品藥品糖糖瓊脂瓊脂混合混合加熱加熱溶解溶解調整調整pH玻璃器皿玻璃器皿水洗水洗干燥干燥分裝分裝滅菌滅菌封口封口冷卻冷卻接種接種1、取出母液并按順序放好。將潔凈的各種玻璃、取出母液并按順序放好。將潔凈的各種玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液槍和玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液槍和玻璃

23、棒等放在指定位置；棒等放在指定位置；2、取一只容量瓶，放入配制培養(yǎng)基總量的、取一只容量瓶，放入配制培養(yǎng)基總量的1/3左左右純水，將母液按順序加入，并不斷攪拌；右純水，將母液按順序加入，并不斷攪拌；3、加入植物生長調節(jié)劑后定容；、加入植物生長調節(jié)劑后定容；培養(yǎng)基的配制的培養(yǎng)基的配制的具體步驟具體步驟：4、將定容的培養(yǎng)基倒入容器中，加入蔗糖和瓊脂，、將定容的培養(yǎng)基倒入容器中，加入蔗糖和瓊脂，并加熱使其完全溶解；并加熱使其完全溶解；5、調整、調整pH；6、將培養(yǎng)基分裝倒培養(yǎng)器皿中，封好瓶口；、將培養(yǎng)基分裝倒培養(yǎng)器皿中，封好瓶口；7、滅菌，用高壓鍋滅菌（、滅菌，用高壓鍋滅菌（121，1520min）或

24、過）或過濾除菌；濾除菌；8、滅菌后待高壓鍋溫度下降到、滅菌后待高壓鍋溫度下降到50以下時，便可以以下時，便可以取出、冷卻凝固后待用。取出、冷卻凝固后待用。 6869三、培養(yǎng)基的保存三、培養(yǎng)基的保存 配制好的培養(yǎng)基一般要在室溫、黑暗且清潔的地方配制好的培養(yǎng)基一般要在室溫、黑暗且清潔的地方放置放置35天再使用天再使用。 保存時間太久，培養(yǎng)基可能會保存時間太久，培養(yǎng)基可能會污染、脫水、易分解的污染、脫水、易分解的成分會發(fā)生分解，培養(yǎng)基成分會發(fā)生較大的變化。成分會發(fā)生分解，培養(yǎng)基成分會發(fā)生較大的變化。 每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標簽。

25、顯標簽。 四、培養(yǎng)條件四、培養(yǎng)條件71溫度溫度光照光照濕度濕度氣體氣體培養(yǎng)基的滲透壓培養(yǎng)基的滲透壓pH值值植物材料一般最適溫度在植物材料一般最適溫度在252之間之間環(huán)境條件環(huán)境條件光強：光強： 10006000 lx一般情況下，培養(yǎng)器內相對濕度應達一般情況下，培養(yǎng)器內相對濕度應達100%，培養(yǎng)室內環(huán)境的相對濕度在培養(yǎng)室內環(huán)境的相對濕度在70%80% 氧氣是愈傷組織生長所必需的氧氣是愈傷組織生長所必需的 調節(jié)滲透壓常常從糖入手調節(jié)滲透壓常常從糖入手 植物組織培養(yǎng)時培養(yǎng)基的植物組織培養(yǎng)時培養(yǎng)基的pH值大多在值大多在5.06.5光質：光質：影響細胞分裂和器官分化影響細胞分裂和器官分化光周期：光周期：

26、光照光照16h，黑暗，黑暗8h 第三節(jié)第三節(jié) 基本操作基本操作一、洗滌一、洗滌1、玻璃器皿洗滌、玻璃器皿洗滌新購置玻新購置玻璃器皿璃器皿1%稀稀HCl浸漬浸漬12h洗衣粉洗衣粉洗滌洗滌清水清水沖洗沖洗晾干晾干備用備用已用過的已用過的玻璃器皿玻璃器皿2、塑料用品洗滌、塑料用品洗滌塑料器皿塑料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水清水沖洗沖洗2%5%鹽鹽酸浸泡酸浸泡30min清水清水沖洗沖洗蒸餾水蒸餾水沖洗沖洗晾干備用晾干備用733、金屬用品洗滌、金屬用品洗滌熱洗衣粉水熱洗衣粉水洗凈洗凈沖洗沖洗擦干擦干74751. 1.滅菌方法：滅菌方法：（1 1）物理方法：）物理方法： 物理滅菌干熱、濕熱、射線處理

27、、物理除菌、過物理滅菌干熱、濕熱、射線處理、物理除菌、過濾、離心、沉淀等濾、離心、沉淀等（2 2）化學方法：）化學方法： 消毒劑、抗菌素滅菌消毒劑、抗菌素滅菌 75二、消毒滅菌二、消毒滅菌2、滅菌、滅菌（1）培養(yǎng)基滅菌：）培養(yǎng)基滅菌：高溫高壓濕熱滅菌法高溫高壓濕熱滅菌法 壓力在壓力在9.810410.8104Pa 溫度在溫度在121 滅菌滅菌2030min（2）玻璃器皿滅菌：）玻璃器皿滅菌：蒸汽高壓消毒滅菌蒸汽高壓消毒滅菌 干熱消毒滅菌干熱消毒滅菌76飽和蒸汽壓力與其對應的溫度飽和蒸汽壓力與其對應的溫度飽和蒸汽壓力溫度（）飽和蒸汽壓力溫度（）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00

28、.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0001.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.677（3）塑料器皿滅菌：塑料器皿滅菌： 多采用多采用高壓蒸汽消毒滅菌高壓蒸汽消毒滅菌（4）金屬用具滅菌：）金屬用具滅菌：灼燒滅菌灼燒滅菌 浸入浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用（5）過濾滅菌：）過濾滅

29、菌： 一些一些生長調節(jié)劑生長調節(jié)劑，如，如赤霉素、玉米素、脫落酸和某些維赤霉素、玉米素、脫落酸和某些維生素生素。 78（6）接種室滅菌）接種室滅菌空氣消空氣消毒滅菌毒滅菌接種室接種室超凈工超凈工作臺作臺紫外燈紫外燈照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培養(yǎng)材料培養(yǎng)材料的接種的接種紫外燈紫外燈照射照射79（7）外植體滅菌）外植體滅菌流水沖洗流水沖洗1020min或更長時間或更長時間70%75%酒精中浸泡酒精中浸泡30s0.1%0.2%氯化汞氯化汞液中浸泡液中浸泡10min左右左右蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗45次次在在10%的次氯酸鈉、的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡飽和漂白粉浸泡30min左右左右備用備用80常用消毒劑消毒滅菌比較表常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9102飽和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易最易較難易中較難53053