探討腫瘤藥敏試驗(yàn)對(duì)結(jié)直腸癌患者個(gè)體化化療的應(yīng)用價(jià)值

1、探討腫瘤藥敏試驗(yàn)對(duì)結(jié)直腸癌患者個(gè)體化化療的應(yīng)用價(jià)值摘要：目的探討腫瘤藥敏試驗(yàn)對(duì)結(jié)直腸癌患者個(gè)體化化療的應(yīng)用價(jià)值。方法采用組織塊 培養(yǎng)終點(diǎn)染色訃算機(jī)圖像分析法（TECIA）,測(cè)左47例結(jié)直腸癌想者對(duì)阿霊素（ADM）、5 氟腺嚅嚨（5 Fu）、絲裂蠱素（MMC）.卡鉗（CBP）、順鉗（DDP）、氨甲喋吟（MTX）6種化療 藥物的體外敏感性。結(jié)果47例結(jié)直腸癌對(duì)腫瘤組織的平均抑制率由髙到低依次為 5 FuMMCADMMTXDDP. 聯(lián) 合 用 藥 的 抑 制 率 為 MMC+DDP+5 FuMMC+5 FuDDP+5 Fu.結(jié)論結(jié)直腸癌是對(duì)化療藥物敏感性較好的腫 瘤，且存在著明顯的異質(zhì)性。體外腫瘤藥

2、敏試驗(yàn)在指導(dǎo)結(jié)直腸癌的臨床用藥及個(gè)體化化療方 而具有重要的指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌：藥敏試驗(yàn)：TECIA法：化療結(jié)直腸癌是胃腸道中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)，隨著人民生活方式和膳食結(jié)構(gòu)的改變， 結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前外科手術(shù)是治療結(jié)直腸癌的主要手段，但仍有相當(dāng)多的 患者就診時(shí)已屬晚期，失去手術(shù)的機(jī)會(huì)：接受根治術(shù)后的患者也有較高的復(fù)發(fā)率，因此化學(xué) 藥物治療在結(jié)直腸癌的治療中占有十分重要的地位，它可以殺死生長(zhǎng)中的腫瘤細(xì)胞，可以減 少或預(yù)防術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，提高結(jié)直腸癌的療效。然而臨床使用的化療藥物種類繁多， 腫瘤對(duì)各種化療藥物存在著明顯的個(gè)體差異，為了提高療效，我們采用TECIA法作

3、了結(jié)直 腸癌的體外藥物敏感性試驗(yàn)，探討不同的結(jié)直腸癌患者對(duì)不同化療藥物的敏感和耐受情況, 為臨床結(jié)直腸癌化療藥物的選擇提供參考依據(jù)。1材料與方法1.1病例標(biāo)本47例結(jié)直腸癌新鮮標(biāo)本均取自本院手術(shù)標(biāo)本，其中男32例，女15例。所有 標(biāo)本都經(jīng)病理診斷為結(jié)直腸腺癌。所有病例均為首次治療，術(shù)前未化療。標(biāo)本于無(wú)菌條件下 快速送到實(shí)驗(yàn)室。1.2藥品與試劑選用目前常用的6種結(jié)直腸癌化療藥物:阿霉素（ADM,意大利產(chǎn)）;5氟 腺初定（5 Fu,上海啟東制藥廠）;絲裂霉素（MMC.日本產(chǎn)）;卡鉗（CBP,齊魯制藥）;順鉗（DDP.齊 魯制藥）;氨甲喋吟（MTX上海華聯(lián)制藥）。MTT （美國(guó)Sigma公司）,配制

4、濃度為5 mg/mL過(guò) 濾火菌，避光冷藏。培養(yǎng)液RPMT 1640 （GIBCO公司產(chǎn)品）含20%小牛血清，-20 °C凍存。 100級(jí)凈化工作臺(tái)（吳江市偉峰凈化設(shè)備廠），二氧化碳培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公 司），計(jì)算機(jī)圖像分析儀由江蘇先聲藥業(yè)有限公司提供。13標(biāo)本處理 無(wú)菌切取腫瘤組織1 cm3大小，用D hanks反復(fù)沖洗3次，加200 U/mL的青、 鏈靈素適量浸泡10 min。剪除脂肪、纖維及壞死組織，選取邊緣生長(zhǎng)好、無(wú)壞死的癌組織 塊，在層流超凈工作臺(tái)上，細(xì)切成0.51 mm3大小的組織塊。將組織塊堆放到有1640培 養(yǎng)液的24孔板中，每組設(shè)4孔，37°C C

5、O2孵箱培養(yǎng)24 h,以圖像分析儀測(cè)立每孔組織塊面 積A,每孔加入相應(yīng)的化療藥10 L,繼續(xù)培養(yǎng)4 d后，加入卜ITT染料再培養(yǎng)4 h。再次測(cè)左 組織塊的染色面積（ BA）,并按下式算出化療藥物的抑制率（IR）。IR%=1-（BA處理/A處 理）/（BA對(duì)照/A對(duì)照） 100%。1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)指標(biāo)為化療藥物的抑制率（IR）： IR50為高度敏感，302結(jié)果47例結(jié)直腸癌體外藥敏試驗(yàn)對(duì)不同化療藥物的敏感率、抑制率范弗和平均抑制率見(jiàn)附表U 表1結(jié)直腸癌對(duì)不同藥物的敏感率、抑制率范圍和平均抑制率3討論化療方案?jìng)€(gè)體化一直是惡性腫瘤治療的一個(gè)難題，為此人們建立了多種腫瘤藥敏測(cè)試方法。 但由于惡

6、性腫瘤存在著較強(qiáng)的異質(zhì)性1,造成腫瘤對(duì)各種化療藥物有著明顯的個(gè)體差異， 忽視個(gè)體差異僅憑經(jīng)驗(yàn)用藥，存在著盲目性，使得總體療效不佳。建立可靠的體外腫瘤藥敏 檢測(cè)方法，可以幫助臨床醫(yī)師了解不同患者對(duì)不同化療藥物的敏感和耐受情況，設(shè)計(jì)合理治 療方案，避免無(wú)效藥物所致的副作用，從而實(shí)現(xiàn)個(gè)體化化療。目前的抗腫瘤藥物的藥敏試驗(yàn) 方法可分為體內(nèi)和體外檢測(cè)法。體內(nèi)腫瘤藥敏試驗(yàn)有裸鼠模型法和腫瘤腎包膜下移植法，但 因?qū)嶒?yàn)條件復(fù)雜，價(jià)格貴，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)等限制，未能在臨床推廣應(yīng)用：體外腫瘤藥敏試驗(yàn)常 用的有三磷酸腺昔生物發(fā)光法（ATP CSA）、四甲基偶氮哇鹽比色法（MTT法）、四氮 哇衍生物比色法（XTT法）、組織

7、塊培養(yǎng)終點(diǎn)染色計(jì)算機(jī)圖像分析法（TECIA）、膠原凝 膠小滴植入法（CD DST）。本文所采用的組織塊培養(yǎng)一終點(diǎn)染色一計(jì)算機(jī)圖像分析法（TECIA）操作步驟少、簡(jiǎn)便易行、需標(biāo)本量小、成功率高：本法能夠保持實(shí)體瘤的組織結(jié) 構(gòu)，有利于細(xì)胞存活，同時(shí)能夠模擬體內(nèi)實(shí)體瘤細(xì)胞的環(huán)境，提高了藥敏的準(zhǔn)確性，是一種 較實(shí)用的微量化體外藥敏試驗(yàn)方法，具有很好的臨床應(yīng)用前景，能為臨床制泄個(gè)體化化療方 案提供參考依據(jù)。本文的結(jié)果提示不同個(gè)體的結(jié)直腸癌患者對(duì)同一化療藥物的敏感性存在著明顯的個(gè)體差異， 這可能與惡性腫瘤存在著先天性或獲得性的耐藥性及多重耐藥性有關(guān)2。所以結(jié)直腸癌的 化療應(yīng)該通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)確左不同患者對(duì)每一

8、個(gè)化療藥物的敏感性，從而為結(jié)直腸癌患者建立 量體裁衣（tailor）式的個(gè)體化化療。結(jié)直腸癌是對(duì)化療藥物敏感性較好的腫瘤，至今5 Fu仍是結(jié)直腸癌最常用、療效相對(duì)較好 的藥物3。從本文的藥敏結(jié)果可以看出，最敏感的單藥為5 Fu,英次為MMC. DDP,按 平均抑制率 5 Fu MMC DDP CBP MTX ADM o 聯(lián)合用藥 MMC+DDP+5 Fu MMC+5 Fu DDP+5 Fiu結(jié)果表明了結(jié)直腸癌對(duì)各種藥物單藥治療療效均不佳，聯(lián)合化 療可提高療效，聯(lián)合化療效果優(yōu)于任何一種單一藥物。因此選擇結(jié)直腸癌化療方案時(shí)應(yīng)盡量 選擇單藥敏感的兩種或兩種以上的藥物進(jìn)行化療，可提髙結(jié)直腸癌化療的療效。結(jié)直腸癌的體外藥敏檢測(cè)技術(shù)對(duì)于評(píng)估、組合和篩選化療方案、實(shí)施個(gè)體化化療具有重要指 導(dǎo)意義。隨著分子生物與技術(shù)的發(fā)展，腫瘤藥敏試驗(yàn)正步入分子基因水平，腫瘤藥敏試驗(yàn)方 法也不斷改進(jìn)與完善，這必將大大提高腫瘤藥敏試驗(yàn)的實(shí)用性和準(zhǔn)確性，腫瘤藥敏試驗(yàn)在指 導(dǎo)臨床用藥及個(gè)體化療方而發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1曾益新主編.腫瘤學(xué)M.北