九例成人T淋巴細胞白血病的臨床與實驗研究

1、九例成人T淋巴細胞白血病的臨床與實驗研究【摘要】目的探討成人T淋巴細胞白血病(ATL)的臨床、細胞學、免疫學、細胞遺傳學、血清學及分子生物學等特征。方法采用間接免疫熒光法及酶聯免疫吸附法檢測血清HTLV-抗體，建立PCR和液相雜交法檢測前病毒基因序列，結合MIC特征確診ATL。結果和結論確診9例ATL，其臨床特征主要為淋巴結腫大,皮損及溶骨改變少見,外周血及骨髓出現典型的花瓣狀核淋巴細胞，胞體大，核畸形，免疫表型為CD-1、CD+2、CD3+、CD4+、CD-8,還表達CD25等激活標記，染色體核型及HLA分型未發(fā)現有規(guī)律性的變化。8例ATL中有7例血清HTLV-抗體陽性，應用PCR及液相雜交

2、法可檢出整合到宿主細胞DNA中的HTLV-病毒序列，表明在我國HTLV-也是ATL的病因。9例中1例為淋巴瘤型，1例為慢性型，7例為急性型ATL，治療效果及預后均不良?！娟P鍵詞】白血病淋巴瘤，T細胞，急性，HTLV-相關HTLV-聚合酶鏈反應 Clinical and experimental study of 9 cases of adult T cell leukemiaHU Jianda, LU Lianhuang, CHEN Yuanzhong, et al.Union Hospital of Fujian Medical University, Fujian Institute of

3、 Hematology, Fuzhou350001【Abstract】ObjectiveIn order to clarify the clinical and laboratory features of adult T cell leukemia (ATL): morphology, immunology, cytogenetics, serology and molecular biology. MethodsIndirect immunofluorescence assay and ELISA were used to detect serum HTLV- antibody. The

4、HTLV- provirus sequence were amplified by PCR and confirmed by liquid hybridization. Results and Conclusion Nine cases of ATL were diagnosed. The major clinical manifestation was lymph node enlargement found in all patients. Skin involvement and osteolysis were not frequent. The characteristic findi

5、ng was leukemic cells with highly indented or lobulated flower-like nuclei in peripheral blood and bone marrow. ATL cells were CD2，CD3，CD4，CD25 positive and CD8 negative. No specific chromosome abnormality or HLA type was found. Seven of 8 patients examined had HTLV- antibody. The HTLV- provirus gen

6、ome sequence integrated into host cell DNA was amplified by PCR and confirmed by liquid hybridization. All of these results showed that HTLV- was also the etiological agent of ATL in China. One of the 9 cases of ATL was classified as lymphoma type, one as chronic-type, and the rest as acute type.【Ke

7、y words】Leukemia-Lymphoma,T-cell,acute,HTLV-associatedHTLV-Polymerase chain reaction成人T淋巴細胞白血?。╝dult T cell leukemia, ATL）是一種獨特類型的白血病，由型人類T細胞白血病病毒(human T cell leukemia virus type ,HTLV-)引起,最早由日本學者于1977年報告1,其特征性的表現是血及骨髓中出現花瓣狀核淋巴細胞，免疫學表型為CD+2,CD+3,CD+4,CD-8，并有T細胞激活的現象。國內于1989年報告福建沿海地區(qū)存在HTLV-小流行區(qū)2以來，又

8、陸續(xù)報告一些新的病例。我們將經臨床結合各實驗研究確診的9例ATL報告如下，并探討其特征。對象和方法1研究對象9例均為我院收診的患者，男5例，女4例，年齡3064歲，均為福建省籍居民，與日本人均無血緣關系，除1例曾去日本1周外，其余均無外出史，也無與日本人接觸史。按常規(guī)進行檢查、診治。2細胞形態(tài)學檢測細胞化學染色及超微結構觀察：ATL患者的外周血片和骨髓片做瑞氏染色,同時作糖原(PAS)染色、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化物酶(POX)、非特異性酯酶(NAE)及氟化鈉抑制試驗(NaF)、堿性磷酸酶(NAP)、熱鹽水溶解試驗等細胞化學染色。部分患者行淋巴結活檢病理檢查。另外，分離患者外周血白血病細胞

9、用以電鏡下觀察細胞超微結構。3細胞免疫表型檢測采用活細胞間接免疫熒光法，分化抗原表達30為陽性。所用的單抗FITC標記兔抗鼠IgG均由中國醫(yī)學科學院血液學研究所提供。4染色體核型分析對3例患者進行染色體核型分析，采用G顯帶，按人類細胞遺傳學命名的國際體制分析。5HLA抗原分型4例ATL患者采用微量淋巴細胞毒試驗方法進行HLA-A、B或DR位點檢測。HLA抗血清板由上海中心血站提供。6血清HTLV-I抗體檢測采用間接免疫熒光法及ELISA法檢測。HTLV-I抗體的ELISA試劑盒為Diagnostic Biotechnology公司產品。7HTLV-病毒基因檢測應用聚合酶鏈反應(PCR)結合液相

10、雜交技術檢測整合到宿主細胞DNA中的前病毒基因pol區(qū)及tax序列。PCR及雜交的具體過程見文獻3。結果1ATL患者的臨床特點根據臨床表現、外周血和(或)骨髓出現典型的不規(guī)則或花瓣狀核淋巴細胞,血清HTLV-抗體陽性，共診斷9例ATL，主要臨床特點及實驗室檢查見表1。所有患者均有淋巴結腫大,4例肝脾腫大,僅1例患者出現皮膚損害。血象中血紅蛋白及血小板改變較少,白細胞數量為(2.6220.0)109/L，血象、骨髓象出現不同比例的花瓣狀核淋巴細胞，檢測8例患者的血清HTLV-抗體,7例陽性,1例陰性。2ATL的細胞形態(tài)學、免疫學及細胞遺傳學(MIC)特征9例患者均可見ATL特異的花瓣狀核淋巴細胞

11、，外周血比例為0.020.92，骨髓為00.575。這些ATL細胞胞體較大，胞核不規(guī)則，表現為深切跡，分葉狀或花瓣狀。POX、熱鹽水陰性，PAS及ACP陽性，NAP陰性或陽性,NAE陽性者不被NaF抑制。電鏡超微結構觀察，大部分淋巴細胞體積較大，核型不規(guī)則，大畸形較多，呈不對稱分葉狀，胞質細胞器簡單。1例ATL患者頸淋巴結病理活檢結合免疫組化示彌漫性T細胞淋巴瘤（如1）。免疫學表型主要為CD-1、CD+2、CD3+、CD+4、CD-8，CD4+、CD+8及CD-4、CD-8者各1例。不同程度表達T細胞激活標記，如CD25、CD38、CD71、DR等。分析3例ATL患者染色體核型有2例出現畸變,

12、分別為48,XX,+2,+14及48，XX,+14,+mar，4例患者HLA分型未發(fā)現有規(guī)律性的表型。表1ATL患者的臨床特點例號性別年齡(歲)籍貫臨床體征實驗室檢查皮損淋巴結腫大肝脾腫大溶骨損害Hb(g/L)BPC(109/L)WBC(109/L)血ATL細胞骨髓ATL細胞Ca2LDHHTLV-抗體1女41福建平潭65121220.00.700.5752女31福建莆田7410229.00.600.2353女45福建福州11818020.40.2004女30福建福安1081202.60.0205男58福建南平10513832.00.406男37福建平潭12516829.00.530.1957男

13、36福建福安1101408.0濃縮片易找到8男61福建福安974787.80.920.3459男64福建莆田1001204.50.100.030 3PCR檢測HTLV-基因共對6例患者進行HTLV-前病毒基因檢測，pol區(qū)及tax片段均能被擴增，并能與相應的32P標記的寡核苷酸探針雜交，敏感性及特異性均好。這6例中5例即例15血清HTLV-抗體陽性，1例(例9)陰性。通過檢測HTLV-病毒基因，從分子水平上確診ATL。49例患者除例9臨床表現較輕外，其余進展較快，化療療效差，預后不良，在發(fā)病后數月內相繼死亡。 討論HTLV-是第一個被發(fā)現的人類逆轉錄病毒，已知它是ATL的外源性致病因子4。AT

14、L患者表現獨特的臨床病理學特征，如皮膚損害,高鈣血癥,溶骨破壞,肝、脾、淋巴結腫大,乳酸脫氫酶(LDH)升高及出現特異的花瓣狀核淋巴細胞，血清HTLV-抗體陽性，免疫表型為CD+4、CD8-。我們共報告9例ATL患者，男女比例為1.251，發(fā)病年齡為3064歲，平均44.8歲，職業(yè)以農民為主，均為福建籍，與日本人無血緣關系，除例5曾于1984年去過日本1周外，余未到過國外，也無接觸史，臨床上所有患者均有淋巴結腫大，4例肝、脾腫大，皮損、溶骨改變及高鈣血癥少見，血象、骨髓象中白細胞計數及花瓣狀核ATL細胞比例高低不一，骨髓中ATL細胞比例較外周血低，與日本報告的臨床表現有一定的差異。Takats

15、uki等5調查187例ATL,平均年齡55歲,皮損及高鈣血癥較常見。國外根據臨床表現等將ATL分成5個類型：急性型、慢性型、冒煙型、危象型及淋巴瘤型6。我們報告的9例ATL患者中例4為淋巴瘤型，例9可診為慢性型ATL，其余均為急性型。ATL細胞是較成熟的淋巴細胞，核畸變，免疫表型常為CD+4、CD8-,少數為CD+4、CD8+或CD-4、CD8-，還表達CD25等T細胞激活標記。ATL細胞常會出現染色體畸變,但未見特征性畸變的報告7,在對HLA分型的研究中也未發(fā)現肯定的證據支持其發(fā)病與遺傳因素有關8。本組9例中除例4淋巴瘤型ATL出現數量較少的ATL細胞外,其余患者均有相當比例的ATL細胞，免

16、疫學表型主要為CD4+、CD-8，還不同程度表達CD25等，染色體核型分析顯示無明顯規(guī)律的畸變，HLA分型4例中有3例表達A2位點，A9及B75位點各2例，但因例數少，不足以說明問題。以上臨床病理學特征亦不總是ATL所特有，特別是在非流行區(qū)，一些與HTLV-I無關的T細胞腫瘤也會表現出一些或全部特征9，血清學抗體檢測可以確定HTLV-I感染的個體，但會有假陰性或假陽性結果，因此，僅以臨床及血清學證據來確定T細胞腫瘤是否與HTLV-I有關，尚缺乏足夠的特異性和靈敏性。ATL確診有賴于患者細胞DNA檢出整合的HTLV-I基因，本研究中例4臨床表現不典型，ATL細胞比例少，例9血清抗體陰性，最后均經

17、PCR及液相雜交技術檢出HTLV-I基因而獲確診。本課題受福建省衛(wèi)生廳科研基金(94147)資助作者單位：350001福州,福建醫(yī)科大學附屬協和醫(yī)院,福建省血液病研究所參考文獻1 Uchiyama T, Yodoi J, Sagawa K, et al. Adult T-cell leukemia:clinical and hematologic features of 16 cases.Blood,1977,50:481-492.2 呂聯煌,葉榆生,黃淑樺,等.福建省沿海地區(qū)人類T淋巴細胞白血病病毒小流行區(qū)的發(fā)現. 中華血液學雜志,1989,10:225-227.3 胡建達,呂聯煌,張萍容,

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