滴通鼻炎水對(duì)黏膜纖毛的毒性評(píng)價(jià)

1、滴通鼻炎水對(duì)黏膜纖毛的毒性評(píng)價(jià)         【摘要】  目的 研究滴通鼻炎水對(duì)蛙口腔黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響。方法 采用蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn),用肉眼觀察給藥后小木屑在蛙上顎黏膜表面移動(dòng)一定距離所需要的時(shí)間；用顯微鏡觀察生理鹽水組和滴通鼻炎水組對(duì)離體蛙口腔上顎黏膜纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間的影響；蛙口腔上顎黏膜用生理鹽水或滴通鼻炎水浸潤30 min后，分離蛙口腔上顎黏膜，用顯微鏡觀察其纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間。結(jié)果 在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水常用濃度、高濃度組給藥前后對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)均無明顯影響（P0.05）；在離體實(shí)驗(yàn)中，滴

2、通鼻炎水常用濃度、高濃度組對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)亦無明顯影響（P0.05）；在半在體法實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間有明顯縮短作用（P0.05），但作用強(qiáng)度顯著弱于陽性對(duì)照藥去氧膽酸鈉。結(jié)論 滴通鼻炎水在整體實(shí)驗(yàn)和離體實(shí)驗(yàn)中對(duì)蛙黏膜纖毛的功能無明顯影響，但滴通鼻炎水浸潤30 min后對(duì)黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)有抑制作用。 【關(guān)鍵詞】  滴通鼻炎水；纖毛運(yùn)動(dòng)；毒性Abstract:Objective To evaluate the influence of Ditong nasitis drop on frog palate mucosa cilia movement. Methods Reco

3、rd the time span of the small chips moving on the surface of frog palate mucosa by eyes; Observation of the time span of frog palate cilium continuing segmental motion in drug solution under microscope; Observation the time span of frog palate cilium continuing segmental motion after sufficient effe

4、ct by drug solution under microscope. The above were used as  indicators to examine the effects of different drug concentrations on frog palate mucosa cilia movement. Result No apparent effect has been found on frog mucosa cilium movement at the normal dosage and high dosage (the concentration

5、of which are 0.395 g crude drug/mL & 1.58g crude drug/mL) of Ditong nasitis drop had dividedly acted on frog mucosa cilia, with the differences of no statistic significance（P 0.05）in animal test; No obvious effect had been found on frog mucosa cilial movement at the normal dosage and high dosage

6、 of Ditong nasitis drop respectively, with the differences of no statistic significance（P 0.05）in vitro; Effect had been observed on weakening the continuing movement of frog mucosa cilia in vitro, indicating that Ditong nasitis drop inhibits cilial movement when acting on frog mucosa cilia for a re

7、latively long time（P 0.05）. But the intensity is much weaker than positive control with deoxysodium cholate. Conclusion Ditong nasitis drop had no remarkable effect on injuring the function of frog mucosa cilia.Key words:Ditong nasitis drop; cilial movement; toxicity滴通鼻炎水由蒲公英、麻黃、黃芩、石菖蒲、蒼耳子、辛夷等組成，具有消

8、炎止痛、抗過敏功能，用于傷風(fēng)鼻塞、急慢性鼻炎。理想的滴鼻劑或噴霧劑在治療疾病的同時(shí)，不應(yīng)對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生抑制作用。為了評(píng)價(jià)滴通鼻炎水對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)有無影響，本研究采用蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)該藥對(duì)鼻黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響，為臨床安全用藥提供參考。1  材料1  藥物 滴通鼻炎水，批號(hào)：M1004，規(guī)格： 10 mL/ 瓶，廣州白云山制藥股份有限公司白云山外用藥廠生產(chǎn)。質(zhì)量濃度為0.395 g生藥/mL，作為低劑量組用藥。滴通鼻炎水浸膏（與配制上述成藥同一批提?。?，按處方投料提取濃縮制成，廣州白云山制藥股份有限公司白云山外用藥廠生產(chǎn)，質(zhì)量濃度為4.266 g生藥/g。試驗(yàn)時(shí)

9、用生理鹽水配成質(zhì)量濃度為1.58 g生藥/mL，為成藥濃度的4 倍，作為高劑量組用藥。去氧膽酸鈉，Sigma產(chǎn)品，批號(hào)（lot）：61H0536。試驗(yàn)時(shí)，用生理鹽水配成 =1%去氧膽酸鈉溶液備用。2  動(dòng)物 蛙80只，體質(zhì)量6080 g，雌雄兼用,粵監(jiān)正字2006C081號(hào)。2  方法與結(jié)果2.1  滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響取30只蛙，隨機(jī)分成3組，即滴通鼻炎水低劑量組、滴通鼻炎水高劑量組、1%去氧膽酸鈉組。將蛙仰位固定于蛙板上，下頜扳開，用線貫穿，拉向下方并固定。并用圖釘釘住上頜，使上頜的黏膜面得以充分暴露，不時(shí)用生理鹽水少許濕潤暴露的黏膜面。于兩眼窩前

10、緣間的黏膜上置放芝麻大小的軟木屑一粒。由于黏膜上皮的纖毛運(yùn)動(dòng)，將能看到小木屑逐漸向食道口方向移動(dòng)。以上下頜角之間作為終點(diǎn)，用秒表記錄木屑從起始線移動(dòng)到終點(diǎn)線所需時(shí)間(s)，連試3次，求出其平均值。然后用滴管加供試液0.1 mL于上頜的黏膜面，3 min后再以同法測(cè)試木屑從起始線移動(dòng)到終點(diǎn)線所需時(shí)間3次，求其平均值，并與加藥前的結(jié)果比較，計(jì)算相對(duì)運(yùn)動(dòng)比。如給藥后木屑移行所需時(shí)間超過360 s，按360 s計(jì)。相對(duì)運(yùn)動(dòng)比=（給藥前木屑移行所需平均時(shí)間/給藥后木屑移行所需平均時(shí)間）×100%表1  滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響（略）Tab.1  Effect of

11、the Ditong nasitis drop on the nasal mucocilia movement與去氧膽酸鈉比較: *P0.01 （F檢驗(yàn)）；給藥前后對(duì)照: #P0.01 （t檢驗(yàn)）  表1說明, 滴通鼻炎水低、高劑量對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯的影響，給藥前后纖毛運(yùn)動(dòng)的差異無顯著性。陽性對(duì)照藥1%去氧膽酸鈉能顯著抑制蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)。         2.2  離體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響1取10只蛙，同2.1法將蛙仰臥固定在蛙板上，使口腔張開，用手術(shù)剪分離上腭黏膜。

12、取約3 mm×3 mm黏膜，生理鹽水洗凈血塊及雜物，黏膜面向上，平鋪于載玻片上。于黏膜表面滴加0.2 mL藥液，輕輕蓋上蓋玻片，于40倍光學(xué)顯微鏡下觀察黏膜纖毛的運(yùn)動(dòng)情況，隨后擱置于加有少量蒸餾水的層析缸中，密閉。使水蒸氣近飽和狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為25 。此后每5 min取出標(biāo)本，顯微鏡觀察，如纖毛繼續(xù)運(yùn)動(dòng)，放回層析缸中，直至纖毛運(yùn)動(dòng)停止，記錄從給藥開始至纖毛運(yùn)動(dòng)停止所持續(xù)的時(shí)間。結(jié)果見表2。以上試驗(yàn)中，取自同一蛙上腭的黏膜分成4小塊，隨機(jī)分到各試驗(yàn)組中，以減少試驗(yàn)誤差。以給藥組的纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間除以對(duì)照組（給生理鹽水）時(shí)間得纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間（t）的相對(duì)百分率。百分率越接近100%

13、，表示藥物對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的影響越小。表2  離體法觀察滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響（略）Tab.2  Effect of the Ditong nasitis drop on the nasal mucocilia movement in vitro frog palate model與生理鹽水比較: *P0.01 (F檢驗(yàn));與1%去氧膽酸鈉組比較:  #P0.01 (F檢驗(yàn))表2說明，滴通鼻炎水低、高劑量組與生理鹽水組差異無顯著性，但這兩組與去氧膽酸鈉組比較差異均有顯著性。提示滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯影響，不像1%去氧膽酸鈉那樣有顯著抑制作用。2.3&

14、#160; 半在體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響2,3取40只蛙，隨機(jī)分成4組，即生理鹽水組、滴通鼻炎水低劑量組、滴通鼻炎水高劑量組、去氧膽酸鈉組。同2.1法將蛙仰臥固定在蛙板上，使口腔張開，于上腭黏膜處滴加供試液0.5 mL使完全浸沒上腭，接觸30 min后用生理鹽水洗凈藥物，分離上腭黏膜以供顯微鏡觀察纖毛運(yùn)動(dòng)情況。黏膜分離后立即洗凈，平鋪于載玻片上，于黏膜表面滴加生理鹽水，蓋上蓋玻片，參照2.2法（離體法）觀察并記錄纖毛運(yùn)動(dòng)的持續(xù)時(shí)間及恢復(fù)情況。并計(jì)算給藥組纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)的相對(duì)百分率。結(jié)果見表3。表3  半在體法觀察滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響（略）Tab.3 

15、Effect of the Ditong nasitis drop on the nasal mucocilia movement in situ frog palate model與生理鹽水組比較: *P0.01（F檢驗(yàn)）；與1%去氧膽酸鈉組比較: #P0.01（F檢驗(yàn)）表3數(shù)據(jù)表明：滴通鼻炎水低、高劑量組與生理鹽水組比較,纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間差異有顯著性，且與去氧膽酸組比較差異均有顯著性。提示滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)有明顯抑制作用，但顯著弱于1%去氧膽酸鈉。3  討論鼻腔表面襯以黏膜，黏膜表面是一層頂部長有纖毛的假復(fù)層柱狀上皮， 內(nèi)有分泌黏液的杯狀細(xì)胞，所分泌的黏液覆蓋在纖毛上。在正常

16、情況下，纖毛協(xié)調(diào)一致地?cái)[動(dòng), 清除鼻腔內(nèi)異物, 具有清除作用。在病理狀態(tài)下, 纖毛運(yùn)動(dòng)和黏液分泌受到影響, 就很容易感染各種急慢性呼吸道疾病。正因?yàn)槿绱?，近年來，關(guān)于滴鼻劑對(duì)黏膜纖毛的毒性評(píng)價(jià)越來越受到關(guān)注。對(duì)于滴鼻劑和噴霧劑等鼻腔給藥制劑, 特別是需要較長時(shí)間用藥的, 應(yīng)研究其對(duì)鼻黏膜組織和黏膜纖毛的毒性，從而避免對(duì)鼻黏膜組織及黏膜纖毛產(chǎn)生毒性作用，妨礙鼻腔的正常生理功能, 增加感染幾率。滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的研究表明：在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水低、高劑量（質(zhì)量濃度分別為0.395 g生藥/mL和1.58 g生藥/mL）對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)無明顯的影響(P0.05)，提示無明顯纖毛毒性；在離體法研究滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水亦無明顯毒性；用半在體法觀察滴通鼻炎水對(duì)蛙黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)的影響實(shí)驗(yàn)中，滴通鼻炎水對(duì)蛙纖毛運(yùn)動(dòng)持續(xù)時(shí)間有縮短作用，提示滴通鼻炎水較長時(shí)間（30 min）浸潤于蛙黏膜纖毛后，可能對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)有抑制作用。在臨床用藥中，滴鼻或噴霧后，藥物難以長時(shí)間高濃度浸潤于鼻黏膜上，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床實(shí)際用藥情況不盡相符，不可簡(jiǎn)單套用于臨床，但可供臨床用藥參考。從方法學(xué)來看，整體動(dòng)物黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能試驗(yàn)最為可靠。離體法試驗(yàn)由于黏膜離體后與實(shí)際用藥情況不符，可供參考。本文所說的半在體法，在一些文獻(xiàn)中