培養(yǎng)基配制及適用性檢查標準操作規(guī)程

1、僅供個人學習參考操作流程。 / /范圍：適用于微生物檢驗人員對培養(yǎng)基的規(guī)范管理。依據(jù)：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）、中華人民共和國藥典2015年版 第四部職責：-Iz 71.微生物檢驗員：負責實驗室所需求的培養(yǎng)基管理工作，使日常檢驗可以順利進行。2.微生物檢驗主管：負責對日常配制培養(yǎng)基的規(guī)范操作進行監(jiān)督。內(nèi)容1培養(yǎng)基的申購根據(jù)檢驗項目、工作量和工作進度的需求，提前一個月進行所需的培養(yǎng)基申購。申購時需指定培養(yǎng)基供文件名稱培養(yǎng)基配制及適用性檢查標準操作規(guī)程文件編號SMP-10-QC-009版本號00起草部門質(zhì)量控制部審核部門批準人起草人審核人批準日期起草日期審核日期生效日期頒發(fā)部門質(zhì)量控

2、制部分發(fā)號11分發(fā)部門質(zhì)量保證部質(zhì)量控制部目的：建立培 養(yǎng)基配 制及適 用性檢查的標 準操作 規(guī)程，規(guī) 范實驗 人員的僅供個人學習參考應(yīng)商，必要時進行供應(yīng)商審計。2培養(yǎng)基的驗收2.1培養(yǎng)基到貨后，微生物室檢驗員應(yīng)進行驗收。驗收內(nèi)容包括核對品名、數(shù)量、規(guī)格、生產(chǎn)廠商, 應(yīng)與申購單一致；檢查培養(yǎng)基包裝有無破損、包裝是否完整、產(chǎn)品是否在有效期內(nèi)。2.2驗收合格后，登記于培養(yǎng)基領(lǐng)用臺賬（附記錄文件編號：SMP-10-QC-009-02（00）。3培養(yǎng)基的貯藏3.1未開封的脫水培養(yǎng)基貯存于陰涼室，使培養(yǎng)基處于低溫、干燥、和避光條件下。已開封的脫水 培養(yǎng)基應(yīng)蓋緊，貯存于陰涼庫。3.2滅菌好的培養(yǎng)基應(yīng)進行預

3、培養(yǎng)72h檢查無菌后，置48C冷藏保存待用。滅菌后培養(yǎng)基儲存期 為7天。4培養(yǎng)基 的配制4.1培養(yǎng)基的配制和使用應(yīng)填寫培養(yǎng)基配制及使用記錄（附記錄文件編號：SMP-10-QC-009-02（00）。4.2培養(yǎng)基配制批號原則： 原材料批號-配制日期： 比如2011年1月1日配制的培養(yǎng)基， 培養(yǎng)基干 粉批號000000,配制批號為:000000-110101。配制好的培養(yǎng)基貼培養(yǎng)基標簽（附記錄文件編 號：R-SMP-10-QC-009-03。（注：同一天同一培養(yǎng)基配置多次的，在原批號后加“-”加“數(shù)字”I表示，如000000-110101-01）4.3培養(yǎng)基配制方法3.1使用商品化脫水合成培養(yǎng)基時

4、，應(yīng)嚴格按照廠商提供的使用說明配制，如重量/體積、pH滅菌條件和I I . . /:,操作步驟等。實驗室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按照配方準確配制，并記錄相關(guān)信息如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別，每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號，pHS,培養(yǎng)基體積/分裝體積，滅菌條件（滅菌方式、溫度及時間），配制日期、人員等，以便溯源。4.3.2水、容器具要求：培養(yǎng)基配制均采用純化水，特殊說明時采用去離子水和蒸餾水。培養(yǎng)基配制所用容器和配套器具應(yīng)潔凈。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器應(yīng)先進行預滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。4.3.3稱量與分裝：快速稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基（必要時佩戴口罩或在通風柜中

5、操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末）。以免吸潮。先加入適量的水，充分混合。注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊， 然后加水至所需的量。根據(jù)說明書要求選擇是否加熱。分裝體積不超過容器體積的2/3。配制斜面;、I I等含瓊脂的培養(yǎng)基也需加熱煮沸至完全溶解后分裝。僅供個人學習參考4.4pH值的測定和調(diào)整I. ; 8pH值采用pH計進行檢測，溫度252C。取配后培養(yǎng)基10ml進行滅前pH測定。另取20ml于50ml三角瓶與同批配制培養(yǎng)基同時滅菌冷卻至252C檢測滅后PH滅菌前后pH應(yīng)按下表進行控制。滅菌前可使用濃度約為40g/L（約1mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L）的鹽 酸溶液進

6、行緩慢調(diào)整，避免反復調(diào)整而增加離子濃度。滅菌后培養(yǎng)基不符合標準時視為不合格， 不 進行使用。4.5培養(yǎng)基火困培養(yǎng)基和試劑應(yīng)采用濕熱滅菌法或過濾除菌法。濕熱滅菌在高壓滅菌鍋或蒸汽滅菌柜中進行，容 器具若需濕熱滅菌時，滅菌條件為121C滅菌30min。培養(yǎng)基嚴格按說明書條件進行滅菌。培養(yǎng)基滅 菌后應(yīng)立即取出，不得存放于高壓滅菌器中。5培養(yǎng)基 的質(zhì)量控制5.1計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查5.1.1菌種及菌液制備菌種：試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代)，并采用 適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和計數(shù)方法I適用性試驗用菌株見表1。

7、菌液制備：按表1規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗菌株。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的 新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，35C培養(yǎng)1824小時，取上述培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%I I . . . / :,無菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀釋至10-7，分取各菌懸液1ml注入平皿中，立 即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml，各菌懸液平行制備兩個平皿，平皿法培養(yǎng)計數(shù)，取小于100CFU/ml的菌液備用；取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，25C培養(yǎng)23天。取上述培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀釋至10-7， 取菌懸

8、液1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基25ml，各菌懸液平行制備兩個平皿，平皿法培養(yǎng)計數(shù)，取小于100CFU/ml的菌液備用；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜 面培養(yǎng)基，經(jīng)25C培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉 溶液，將抱子洗脫。然后吸出抱子懸液至無菌試管內(nèi)，取上述培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀釋至10-7，分取各菌懸液1ml注入平皿中，立即傾注沙 氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml，各菌懸液平行制備兩個平皿，平皿法培養(yǎng)計數(shù)，取小于100CFU/ml的 菌液備用。L* 菌液制備后若在

9、室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2?8C，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉 抱子懸液可保存在2?8C,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。僅供個人學習參考5.1.2陰性對照為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌 生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。5.1.3培養(yǎng)基適用性檢査微生物計數(shù)用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。僅供個人學習參考按表1規(guī)定，接種不大于lOOcfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板 或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，置表1規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗菌株平行制備2管或2個平皿同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代

10、被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5?2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較， 試驗菌應(yīng)生長 良好。表1試驗菌液的制備和使用試驗菌株試驗菌液的制備計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查計數(shù)方法適用性試驗需氧菌總數(shù)計數(shù)霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)需氧菌總數(shù)計數(shù)霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)時間 18?24 小時胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng) 基和胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 30?35

11、C,培養(yǎng)時間不 超過 3 天，接種量不大 100cfu胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基:或胰酪大豆胨液體培養(yǎng) 基（MP 法），培養(yǎng)溫度 30?35C,培養(yǎng)時間不超 過 3 天，接種量不大于 l00cfu銅綠假單胞菌(Pseudo mon asaerug ino sa)CMCC(B)10104胰酪大豆胨瓊脂培 養(yǎng)基或胰酪大豆胨 液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)時間 18?24 小時胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng) 基和胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)時間不 超過 3 天，接種量不大于 l00cfu1_ 1 J胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 或胰酪大豆胨液體培養(yǎng) 基（MP法），培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)

12、時間不超 過 3 天，接種量不大于 l00cfu枯草芽抱桿菌Bacillussubti lis)CMCC(B)63501胰酪大豆胨瓊脂培 養(yǎng)基或胰酪大豆胨 液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)時間 18-24 小時胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng) 基和胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度30-35C，培養(yǎng)時間不 超過 3 天，接種量不大于 100cfu胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 或胰酪大豆胨液體培養(yǎng) 基（MP法），培養(yǎng)溫度 30?35C，培養(yǎng)時間不超 過 3 天，接種量不大 l00cfu白色念珠菌(Ca ndidaalbicans)CMCC(F)98001沙氏葡萄糖瓊脂培 養(yǎng)基或沙氏葡萄糖 液體培養(yǎng)基，培養(yǎng) 溫度

13、20?25C，培養(yǎng)時間 2?3 天胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度30?35C，培養(yǎng)時間不超過 5 天，接種量不大于 l00cfu沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 20?25C，培養(yǎng)時間不超過 5 天, 接種量不大于l00cfu胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（MP 法不適用），培養(yǎng) 溫度30?35C,培養(yǎng)時間 不超過5 天，接種量不大 于 100cfu沙氏葡萄糖瓊脂 培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 2.0?25C，培養(yǎng)時間不超過 5 天，接種量不大 于l00cfu黑曲霉(Aspergillusn iger)CMCC(F)98003沙氏葡萄糖瓊脂培 養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄 糖瓊脂培養(yǎng)基，培 養(yǎng)溫度20?25C，培 養(yǎng)時間5?7

14、天，或直 到獲得豐富的抱子胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度30?35C，培養(yǎng)時間不 超過 5 天，接種量不大于 lOOcfu沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 20?25C，培養(yǎng)時間不超過 5 天, 接種量不大于l00cfu胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（MP 法不適用），培養(yǎng) 溫度30?35C,培養(yǎng)時間 不超過5 天，接種量不大 于 l00cfu沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度 20?25C，培養(yǎng)時間不超過 5天， 接種量不大于l00cfu僅供個人學習參考5.2控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查521菌種及菌液制備菌種：試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用 適宜的菌種保藏

15、技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。菌液制備：按表1規(guī)定程序培養(yǎng)各試驗菌株。取大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、乙 型副傷寒沙門菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，35C培養(yǎng)1824小時，取上述培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀釋至10-7，分取各菌懸液1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml，各菌懸液平行制備兩個平皿，平皿法培養(yǎng)計數(shù)，取小于100CFU/ml的菌液備用；取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，25CI培養(yǎng)23天。取上述培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法

16、10倍 稀釋至10-7，取菌懸液1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml，各菌懸液平行制備 兩個平皿，平皿法培養(yǎng)計數(shù)，取小于100CFU/ml的菌液備用；菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2?8C，可在24小時內(nèi)使用。2.1.3陰性對照為確認試驗條件是否符合要求，應(yīng)進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應(yīng)無菌生長。如陰性對照有菌 生長，應(yīng)進行偏差調(diào)查。2.2培養(yǎng)基適用性檢查控制菌檢查用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查?？刂凭鷻z査用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查。各培養(yǎng)基的檢查項目及所用的菌株見表1。

17、表1控制菌檢査用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力和指示特性控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗菌株耐膽鹽革蘭陰性菌腸道菌增菌液體培養(yǎng)基 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基促生長能力抑制能力促生長能力+指示特性大腸埃希菌、銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌大腸埃希菌麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力抑制能力促生長能力+指示特性大腸埃希菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌沙門菌RV 沙門菌增菌液體培養(yǎng)木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基促生長能力抑制能力促生長能力+指示特性指示能力乙型副傷寒沙門菌 金黃色葡萄球菌乙型副傷寒沙門菌 乙型副傷寒沙門菌僅供個人學習參考白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 沙氏葡

18、萄糖瓊脂培養(yǎng)基 念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長能力促生長能力+指示特性 促生長能力+指示能力 抑制能力白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大腸埃希菌2.2.1液體培養(yǎng)基促生長能力檢査分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng) 基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。222固體培養(yǎng)基促生能力檢査用涂布法分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和 對照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢査規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。2.2.

19、3培養(yǎng)基抑制能力檢査接種不少于l00cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在 相應(yīng)控制菌檢査規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不小于規(guī)定的最長培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。I2.2.4培養(yǎng)基指示特性檢査用涂布法分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照 培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及不大于規(guī)定的最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。6培養(yǎng)基銷毀失效、檢測用過培養(yǎng)基（無論是否有菌生長）均按廢物進行高壓蒸汽滅菌處理。參照實驗室 廢棄物管理規(guī)程（文件編號：SMP-10-QC-014（ 00）。相關(guān)文件：文件

20、名稱文件編號檢定菌管理規(guī)程SMP-10-QC-010實驗室廢棄物管理規(guī)程SMP-10-QC-014( 00)相關(guān)記錄:記錄名稱記錄編號培養(yǎng)基登記臺賬R-SMP-10-QC-009-01培養(yǎng)基配制及使用記錄R-SMP-10-QC-009-02培養(yǎng)基配制標簽R-SMP-10-QC-009-03計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查報告R-SMP-10-QC-009-04計數(shù)培養(yǎng)基適用性數(shù)據(jù)記錄R-SMP-10-QC-009-05控制菌培養(yǎng)基適用性測試記錄R-SMP-10-QC-009-06控制菌培養(yǎng)基適用性檢查報告R-SMP-10-QC-009-07僅供個人學習參考文件變更歷史:文件修訂及變更原因生效日期文件編號版本號新修訂。SMP-10-QC-00900僅供個人學習參考培養(yǎng)基領(lǐng)用臺賬R-SMP-10-QC-009-01(00)培養(yǎng)基名稱供應(yīng)商進廠編號規(guī)格安全庫存量日期批號入庫量領(lǐng)用數(shù)量剩余庫存領(lǐng)用人管理人備注年月日年月日年月日年月日1年月日年月日年月日年月日1年月日年月日年月日rn年月日年月日年月日年月日年月日;、1 J 年月日年月日1- -年月日年月日年月日年月日年月日年月日培養(yǎng)基配制及使用記錄R-SMP-10-QC-009-02(00)僅供個人學習參考培養(yǎng)基名稱配制人/日期配制批號有效期至復核人/日期配制方法稱取g于L純化水中，加熱煮沸至完全溶解分裝，分裝體積為ml/