快速液相色譜法與常規(guī)高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關(guān)物

1、快速液相色譜法與常規(guī)高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯及有關(guān)物         作者：張斗勝 李進 許明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤 【摘要】 目的 比較分析快速液相色譜法(UFLC)與常規(guī)液相色譜法(HPLC)測定克林霉素磷酸酯含量及有關(guān)物質(zhì)。 方法 UFLC法色譜柱采用Waters C18雜化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，流速1.5ml/min；HPLC法色譜柱采用Apollo C18         &

2、#160;              作者：張斗勝 李進 許明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤【摘要】  目的 比較分析快速液相色譜法(UFLC)與常規(guī)液相色譜法(HPLC)測定克林霉素磷酸酯含量及有關(guān)物質(zhì)。 方法 UFLC法色譜柱采用Waters C18雜化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，流速1.5ml/min；HPLC法色譜柱采用Apollo C18(250mm×4.6mm，5m)，流速1.0ml/min。兩方法均以0.1mol

3、/L磷酸二氫鉀(85%的磷酸調(diào)pH3.5)乙腈甲醇(700150150)為流動相，檢測波長210nm。結(jié)果 在UFLC法中，克林霉素磷酸酯在0.011.5mg/ml呈良好線性，r=0.9999；最低檢測限為20ng；最低定量限為60ng；精密度RSD為0.41%。與HPLC法相比，該法測定克林霉素磷酸酯含量快速、準確、靈敏度高；但測定有關(guān)物質(zhì)，其專屬性、準確性不如HPLC法，雜質(zhì)檢出數(shù)目少且部分雜質(zhì)分離不完全。結(jié)論 UFLC法可準確、快速、高效測定克林霉素磷酸酯含量，適合在工作量較大的檢測項目如制劑含量、含量均勻度及溶出度中應(yīng)用；但經(jīng)簡單方法轉(zhuǎn)換建立的UFLC方法通常難以勝任對藥物復(fù)雜體系如有

4、關(guān)物質(zhì)的分析。 【關(guān)鍵詞】  快速液相色譜法； 高效液相色譜法； 克林霉素磷酸酯； 有關(guān)物質(zhì)    ABSTRACT  Objective  To compare and analyze the UFLC and HPLC method for determination of the content of clindamycin phosphate and its related substances.  Methods  UFLC: a Waters C18 hybrid column was used, th

5、e flow rate was 1.5ml/min; HPLC: a Apollo C18 Column was applied, the flow rate was 1.0ml/min; 0.1mol/L potassium dihydrogen phosphate (pH was adjusted to 3.5 by 85% phosphoric acid)acetonitrilemethanol (700150150, V/V) as mobile phase; the detective wavelength was 210nm. Results  The linear ra

6、nge of clindamycin phosphate was 0.01 1.5 mg/ml, r=0.9999; the LOD was 20ng and the LOQ was 60ng, and RSD was 0.41%. The accuracy of UFLC method in determination the content of clindamycin phosphate was good, and it was more sensitive and rapid than HPLC, but in determination of related substances,

7、it had a poor performance.  Conclusion  The UFLC method was proved to be simple, accurate, rapid and high efficient, so it could be applied to rapid analysis of the content of clindamycin phosphate in preparations that need detect the test items such as content, uniformity of dosage units,

8、 dissolution and so on, however this UFLC method was not suitable for determination of the related substances in the components.    KEY WORDS  Ultrafast liquid chromatography method;  HPLC;  Clindamycin phosphate;  Related Substances  快速液相色譜(ultrafast liquid c

9、hromatography，UFLC)是一種新的快速分析技術(shù)，它與超高效液相色譜(ultraperformence liquid chromatography，UPLC)的最大區(qū)別是其不需要系統(tǒng)超高壓(485830bar)，在略高于普通液相色譜壓力極限(345bar)下即可實現(xiàn)高流速、高分辨率分析，適用于要求高通量、高效率的分析工作，在藥物分析領(lǐng)域前景廣闊1，2。目前，國內(nèi)外已有UFLC分析藥物的報道24。本文以克林霉素磷酸酯注射液為研究對象，借鑒藥品標(biāo)準中收載的HPLC法5，6，建立了克林霉素磷酸酯UFLC分析方法，并與常規(guī)HPLC法分析克林霉素磷酸酯含量及有關(guān)物質(zhì)的情況進行了比較。結(jié)果表明

10、：UFLC法能準確測定克林霉素磷酸酯含量，適用于工作量較大的檢測項目如制劑含量、含量均勻度及溶出度等的快速測定；但對有關(guān)物質(zhì)的分析，經(jīng)簡單方法轉(zhuǎn)換建立的UFLC方法，雜質(zhì)分離的數(shù)目少，部分雜質(zhì)間的分離度變差，其分離特性不如常規(guī)的HPLC法。    1  儀器與試藥    島津液相色譜儀(LC20AT泵，SIL20AC自動進樣器，SPDM20A檢測器經(jīng)改裝適應(yīng)快速分離，LC Solution色譜工作站)與Waters Alliance色譜分離單元(2690泵，996PDA監(jiān)測器，Millinium 2.3色譜工作站)。克林霉素

11、磷酸酯對照品(批號130486200502，含量79.0%)，克林霉素對照品(批號130422200402，含量86.5%)，林可霉素對照品(批號130432200407，含量86.2%)；克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯化鈉注射液均由中國藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純，水為雙蒸水，乙腈、甲醇為色譜純。    2  方法與結(jié)果    2.1  供試品溶液與對照品溶液的制備    (1)供試品溶液  取克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯

12、化鈉注射液用流動相稀釋成0.3mg/ml的溶液，分別稱為溶液(A)和溶液(B)。另取上述兩供試品溶液同法稀釋成3.0mg/ml的溶液，作有關(guān)物質(zhì)分析供試液。    (2)對照品溶液  分別取克林霉素磷酸酯、克林霉素和林可霉素對照品適量，精密稱定；加流動相溶解定量稀釋制成含上述三種對照品各約0.3mg/ml的混合溶液。    2.2  實驗方法    參考文獻5，6。UFLC分析采用Waters XTerraTM MS C18雜化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，常規(guī)HPL

13、C分析采用Apollo C18(250mm×4.6mm，5m)色譜柱。流動相為0.1mol/L磷酸二氫鉀緩沖鹽(85%磷酸調(diào)pH3.5)乙腈甲醇(700150150)(需用0.22m濾膜過濾)；檢測波長210nm；流速分別為1.5ml/min(UFLC)和1.0ml/min(常規(guī)HPLC)；柱溫25；供試品濃度0.3mg/ml(含測)，3.0mg/ml(有關(guān)物質(zhì))；進樣體積分別為2l(UFLC)和10l(常規(guī)HPLC)。    2.3  結(jié)果    (1)色譜行為  取供試品溶液(A)，分別用UFLC法和

14、常規(guī)HPLC法進行測定，其典型的色譜圖見圖1。    從圖1可知，克林霉素磷酸酯在UFLC測定中的保留時間(tR)約4.3min，56min即可完成分析；在常規(guī)HPLC法中，主峰的tR約14.8min。UFLC法在測定時間上較HPLC法快4倍多，且主峰峰型對稱，理論板數(shù)達7000左右，高于常規(guī)HPLC理論板數(shù)(約3000)。    (2)方法學(xué)驗證    線性范圍和最低檢測限  精密稱取克林霉素磷酸酯對照品約30mg，置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密吸取適量，用流動相稀釋成0.1、0.3