內(nèi)毒素肺損傷時(shí)肺淋巴液中淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的變化

1、    內(nèi)毒素肺損傷時(shí)肺淋巴液中淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的變化        中性粒細(xì)胞活化在急性肺損傷中的作用受到廣泛重視，但淋巴 細(xì)胞 與肺損傷的關(guān)系則報(bào)道較少。本文應(yīng)用內(nèi)毒素肺損傷和化學(xué)發(fā)光技術(shù)，觀察肺淋巴液中的淋 巴細(xì)胞的活性，以探討淋巴細(xì)胞在肺損傷中的可能作用。 方法(一)綿羊肺淋巴瘺的制備和肺損傷模型復(fù)制：健康無孕雌性綿羊17只。按Staub法造瘺成功的13只分為內(nèi)毒素組(endotoxin,ET)10只和對(duì) 照(VC)組3只。34 d后，ET組予以大腸桿菌內(nèi)毒素(O55

2、:B5,Sigma)1.5 g/kg體重加生理 鹽液0.1L，恒速靜滴20 min；VC組以生理鹽液0.1L靜滴，速度同上。于給ET前和后0.5、 1 、 2、 4和6 h觀測指標(biāo)變化。(二)生理指標(biāo)的觀測：用生理記錄儀測肺動(dòng)脈壓；用ABL-3型血?dú)夥治鰞x行血?dú)夥治?。?0 min收集淋 巴液1次 。離心后，淋巴細(xì)胞部分用作化學(xué)發(fā)光測定，上清部分用作蛋白含量測定。計(jì)算淋巴/血漿 蛋白比值和肺淋巴蛋白清除率。(三)淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光測定：淋巴細(xì)胞調(diào)成細(xì)胞107個(gè)/mL。先取1 mL 37下溫育20 min ，加入魯米諾(10-3m ol/L) 50L后再溫育10 min。用生物化學(xué)發(fā)光儀(SHG-

3、1型)測定6s×50次的基礎(chǔ)值后，加 入Con A溶液(1 mg/mL)0.1 mL,再測6s×50次。計(jì)算誘發(fā)前(基礎(chǔ))和誘發(fā)后化學(xué)發(fā)光的峰值 及5 min的總強(qiáng)度，并以countsmin-1/104細(xì)胞表示。(四)數(shù)據(jù)處理：數(shù)據(jù)以<"Image361 (850 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310170234973" 14 17>±s表示。兩均數(shù)差異顯著性用t檢驗(yàn)判定。給ET前 、后的差異 用F分析，方差不齊者用F 分析。肺淋巴蛋白清除率與淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的關(guān)系 用直線

4、相關(guān)分析。結(jié)果(一)呼吸頻率、血氧分壓、肺動(dòng)脈壓和肺淋巴蛋白清除率的變化：如表1，給ET 30 min后，ET組呼吸頻率和肺動(dòng)脈壓達(dá)最高值，PaO2于1 h達(dá)最低點(diǎn)，而 肺淋巴蛋白清除率到4 h和6 h達(dá)最大值。表1呼吸頻率、血氧分壓、肺動(dòng)脈壓和肺淋巴蛋白清除率的變化Tab 1 The changes of respiration rate,artery oxygen partial pressu re,pulmonaryartery pressureand the clearance of pulmonary lymph protein(<"Image361 (850 byt

5、es)" src="/med/cano/201003/20100310170234973" 14 17>±s)GroupET(n=10)VC(n= 3)Pre-ETPost-ET(h)1246RRET20.73±6.8958.18±16.4543.09±12.4733.64±7.7930.73 ±6.28?VC19.53±1.1617.33±1.1518.00±2.0018.67±1.1618.00±2.0 0PaO2ET12.47±1.3

6、08.44±2.210.32±1.16? 10.92±1.4110.83±2.07VC12.51±1.2912.11±0.8012.06±0.6712.31±0.8412.10±0.5 2PpaET18.00±0.8931.82±5.6227.27±4.76?23 .15±3.5819.64±2.16VC18.33±0.5818.00±2.0017.67±1.5318.33±0.5818.33±0.5 8C

7、LpET1.56±0.515.15±1.139.37±2.5210.97±2.610.41±3.06VC1.46±0.471.26±0.201.47±0.471.48±0.361.52±0.44     ET=Endotoxin group;VC=Vehicle controlgroup;RR=Respiration rate;Ppa=Pulmonary art ery pressure; CLp=Clearance of lymph protein*P0

8、.05, *P0.01,vs pre-ET; P0.05, P0.01,vs VC(二)淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的變化及與肺淋巴蛋白清除率的關(guān)系：淋巴細(xì)胞基礎(chǔ)發(fā)光峰值和發(fā)光總強(qiáng)度在給ET 4后2 h顯著增強(qiáng)(P0.01)，6 h達(dá)最高點(diǎn) ， 見表2。在給ET和6 h，淋巴細(xì)胞發(fā)光總強(qiáng)度與肺淋巴蛋白清除率顯著相關(guān)(r=0.7458和0 .8436,P0.05)。表2肺淋巴液中淋巴細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的變化Tab 2 The changes of chemiluminescence of lymphocytes in the lun g lymph (×103counts*min-1/104 cells

9、,<"Image361 (850 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310170234973" 14 17>±s)GroupET(n=10)VC(n= 3)Pre-ETPost-ET(h)1246Peak value of BCET0.558±0.1830.723±0.0231.008 ±0.319*1.145±0.369*1.290±0.401*VC0.565±0.0690.573±0.1290.588±0.1270

10、.613±0.1410.633±0.143Total value of BCET11.648±3.46814.629±5.08420.41 5±7.580*23.960±8.795*24.856±8.005*VC12.181±1.30912.329±0.82112.401±0.41112.543±0.61712.501± 0.556Peak value of ConA-ICET2.273±0.9383.432±0.9394.641±1. 041*

11、5.202±1.308?*5.569±1.309?*VC2.221±0.3122.316±0.3292.350±0.3192.432±0.3222.495±0.323Total value of ConA-ICET26.919±10.28451.326±24.427*69.530±20.196?*69.748±14.588?*74.930±17.956?*VC26.335±6.44526.558±6.93427.489±6.97027.834&#

12、177;6 .07528.025±5.731     ET=Endotoxin group;VC=Vehicle control group;BC=Basic chemiluminescence;ConA-IC =ConA-induced chemiluminescence*P0.05;*P0.01,vs pre-ET;P0.05, P0. 01,vs VC 討論淋巴細(xì)胞與肺損傷的關(guān)系，目前尚不清楚。Duke和Meyrick等發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素肺損傷后肺 組織中淋巴細(xì)胞聚集增多并處于活化狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)用化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測淋巴細(xì)胞顯示，給ET 后2 h開始，肺淋巴液中的淋巴細(xì)胞均處于活化狀態(tài)，并在ConA的刺激下，這些細(xì)胞發(fā)生呼 吸爆發(fā)的能力也顯著增強(qiáng)。許多文獻(xiàn)報(bào)道內(nèi)毒素肺損傷分為兩期。期(02 h)以肺動(dòng)脈壓升高為主要特征，期(2 6 h)以肺淋巴蛋白清除率增加