吸入及食物過(guò)敏原

1、作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 編號(hào)：DF-JYK-MY-SOP-021 標(biāo)題：特異性過(guò)敏原試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程吸入性及食物性過(guò)敏原特異性IgE 抗體檢測(cè)試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 目的：保證特異性IgE(sIgE)試驗(yàn)的正確操作，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。2 適用范圍：臨床免疫實(shí)驗(yàn)室3 項(xiàng)目名稱：吸入性及食物性過(guò)敏原特異性IgE 抗體檢測(cè)試劑盒4 項(xiàng)目方法：歐蒙印跡法5原理：采用免疫印跡法原理。51 經(jīng)緩沖液預(yù)處理的檢測(cè)膜條與患者樣本進(jìn)行溫育。如果樣本陽(yáng)性，IgE 類特異性抗體與相應(yīng)的過(guò)敏原結(jié)合。52 在洗滌之后，加入酶標(biāo)單克隆的抗人IgE 抗體（酶結(jié)合物）進(jìn)行第二步溫育，以形成復(fù)合物。53 在孵育之后，沖洗掉未結(jié)合的

2、酶-抗-IgE，然后加入底物液，發(fā)生顏色反應(yīng)。54 終止反應(yīng)之后，風(fēng)干判讀結(jié)果。6標(biāo)本種類及收集、運(yùn)送要求：61 病人準(zhǔn)備：要求患者在安靜狀態(tài)下；晨起的精神、體力、情緒等因素的影響較小，是標(biāo)本采集的最佳時(shí)間；抽取肘部靜脈血或毛細(xì)血管血。62 標(biāo)本種類：人血清或者EDTA、肝素或檸檬酸抗凝血漿。63 標(biāo)本穩(wěn)定性：待測(cè)樣本于2-8°C 條件下通?？杀４?4 天。稀釋后的樣本應(yīng)在同一個(gè)工作日內(nèi)檢測(cè)。64 標(biāo)本稀釋：患者樣本不需稀釋，直接檢測(cè)。65 標(biāo)本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（紅色頭蓋）或抗凝管（紫色或綠色頭蓋）。66 標(biāo)本最小用量：血清最小用量 1ml。67 標(biāo)本運(yùn)送：標(biāo)本采

3、集于真空采血管后應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室分析，物流系統(tǒng)可加快標(biāo)本傳遞速度。若標(biāo)本不能及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)將真空采血管內(nèi)的標(biāo)本置冰瓶或冷藏箱內(nèi)，運(yùn)送過(guò)程中應(yīng)避免劇烈震蕩。當(dāng)天無(wú)法運(yùn)送的標(biāo)本應(yīng)分離血清后冷藏。7試劑：71 來(lái)源：歐蒙公司.72 規(guī)格： 16*1人份/盒7. 3 試劑盒組成和代號(hào)：主要組分：16 人份的試劑盒成分 規(guī)格標(biāo)識(shí)包被過(guò)敏原的檢測(cè)膜條：ts20, w1, w6, ds1, h1, e1, e2, i6,ms1, u80, f1, f2, f13, f14, f27, f88, fs33, fs34, f24, f23, CCD16x1 STRIPS酶結(jié)合物：堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgE（

4、小鼠），直接使用1x20mlCONJUGATE通用緩沖液：10 倍濃縮1x100mlBUFFER 10x色原/底物液：NBT/BCIP(四唑硝基苯胺蘭/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸鹽)，直接使用1x30 ml SUBSTRATE溫育盤(pán) 2 x 8 槽TRAY塑料封膜 1 張產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1 份74 儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：2-8°C 保存，不要冰凍。未開(kāi)封前，試劑盒可穩(wěn)定至所標(biāo)示的有效期。已稀釋的緩沖液必須在一個(gè)工作日內(nèi)用完。75 試劑的準(zhǔn)備和穩(wěn)定性：751 試劑在使用前均應(yīng)在室溫（18-25）平衡30分鐘左右。752包被過(guò)敏原的檢測(cè)膜條：直接使用。為防止膜條發(fā)生冷凝，只有當(dāng)膜條平衡到室溫后

5、才可打開(kāi)包裝。取出膜條后應(yīng)立即密封好原包裝并將其保存于2-8°C。753酶結(jié)合物：直接使用。使用前充分混勻。通用緩沖液：10 倍濃縮。在稀釋前應(yīng)充分混勻。用干凈的吸管從瓶中吸取需要量用蒸餾水或去離子水1:10 稀釋。由于歐蒙印跡法中使用了特殊的膜條，因而需要用已稀釋的通用緩沖液稀釋患者樣本和清洗檢測(cè)膜條。如需溫育一條檢測(cè)膜條，可取5ml 濃縮緩沖液用45ml 蒸餾水或去離子水稀釋。稀釋后的緩沖液應(yīng)在同一個(gè)工作日用完。754底物液：直接使用，因?qū)饷舾?，使用后?yīng)立即蓋緊瓶蓋。76 注意事項(xiàng)：7. 6. 1 本檢測(cè)試劑僅用于體外診斷。 7. 6. 2 試劑盒中部分試劑含有毒性的疊氮鈉，應(yīng)

6、避免接觸皮膚。77 廢物處理：病人樣本，質(zhì)控血清和溫育過(guò)的膜條必須作為潛在傳染源處理，其余試劑如果沒(méi)有特殊官方規(guī)定不需要單獨(dú)處理。78 生物安全級(jí)別：按級(jí)執(zhí)行。8其它輔助用品： Tip 、判讀軟件Eurolinescan。9使用儀器：EUROBLOTMASTER全自動(dòng)蛋白印跡儀。10.操作步驟： 儀器操作按全自動(dòng)蛋白印跡儀操作標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程進(jìn)行，只需分離血清上機(jī)、加樣，包含溫育、洗滌等各項(xiàng)操作均由儀器自動(dòng)進(jìn)行。11質(zhì)控品的使用水平和頻率：質(zhì)控品：每根膜條上均包含質(zhì)控品，每個(gè)病人每次試驗(yàn)均有質(zhì)控。12參考區(qū)間：<0.35 kUA/l13報(bào)告結(jié)果：131 標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果手工輸入中文電腦，數(shù)據(jù)經(jīng)操作

7、者初次審核，經(jīng)小組負(fù)責(zé)人或中級(jí)職稱以上的授權(quán)代理人再次審核后發(fā)出。132 報(bào)告樣式：歐蒙特異性IgE單位（kUA/l）歐蒙特異性IgE用于測(cè)定特異性IgE抗體，測(cè)定值以kU/l為單位。0.35kU/l的值代表特異性過(guò)敏原抗體的相對(duì)濃度累進(jìn)增加。<0.35kU/l的結(jié)果表明無(wú)或未檢測(cè)到特異性過(guò)敏原抗體的含量。特異性IgE分級(jí)如下：類別濃度 kU/l結(jié)果 0 <0.35 kU/l未檢出特異性抗體。 1 0.35 kU/l -0.7 kU/l特異性抗體滴度很低，通常沒(méi)有臨床癥狀，但比較敏感。 2 0.7 kU/l-3.5 kU/l特異性抗體滴度低，具敏感性，如果濃度在該類別的上限，則通常

8、有臨床癥狀。 3 3.5 kU/l-17.5 kU/l特異性抗體滴度顯著，通常出現(xiàn)臨床癥狀。 4 17.5 kU/l-50 kU/l特異性抗體滴度高，幾乎總是出現(xiàn)臨床癥狀。 5 50 kU/l-100 kU/l特異性抗體滴度很高。 6 > 100 kU/l特異性抗體滴度很高。膜條上包被抗原位置：位置縮寫(xiě)過(guò)敏原 1 ts20樹(shù)組合 2（柳樹(shù)/楊樹(shù)/榆樹(shù)） 2 w1普通豚草 3 w6艾蒿 4 ds1塵螨組合 1（屋塵螨/粉塵螨） 5 h1屋塵 6 e1貓毛 7 e2狗上皮 8 i6蟑螂 9 ms1霉菌組合 1（點(diǎn)青霉 /分枝孢霉 /煙曲霉 /交鏈孢霉） 10 u80律草 11 f1雞蛋白 1

9、2 f2牛奶 13 f13花生 14 f14黃豆 15 f27牛肉 16 f88羊肉/羊羔肉 17 fs33海魚(yú)組合 1（鱈魚(yú)/龍蝦/扇貝） 18 fs34淡水魚(yú)組合 1（鮭魚(yú)/鱸魚(yú)/鯉魚(yú)） 19 f24蝦/對(duì)蝦 20 f23蟹 21 CCD CCD標(biāo)記物 a lnd指示帶 14. 臨床意義：141過(guò)敏反應(yīng)是一種對(duì)異物的超敏反應(yīng)。這些異物通常無(wú)害，但在過(guò)敏反應(yīng)患者中，則產(chǎn)生強(qiáng)烈的反應(yīng)。最常見(jiàn)的過(guò)敏反應(yīng)為I 型過(guò)敏反應(yīng)，其特征是形成特異性IgE 抗體。一旦跟過(guò)敏原接觸很快就會(huì)產(chǎn)生諸如發(fā)紅，水腫以及瘙癢等癥狀。典型的過(guò)敏反應(yīng)有鼻炎、通常所說(shuō)的花粉熱、結(jié)膜炎和哮喘。接觸過(guò)敏原的次數(shù)越多，過(guò)敏反應(yīng)就會(huì)

10、越嚴(yán)重。如果發(fā)生系統(tǒng)性過(guò)敏反應(yīng)，可能會(huì)出現(xiàn)危及生命的嚴(yán)重反應(yīng)（全身性過(guò)敏反應(yīng)）。吸入性過(guò)敏反應(yīng)可由季節(jié)性過(guò)敏原(樹(shù)、草或種子的花粉)引起，也可由常年性過(guò)敏原（ 塵螨、霉菌孢子、寵物的唾液和皮屑） 引起。除了空氣傳播的過(guò)敏原（如花粉、灰塵和霉菌）可引起過(guò)敏反應(yīng)外，還有食物也可引起過(guò)敏反應(yīng)。14. 2 最常見(jiàn)的食物過(guò)敏原有花生、大豆、小麥、貝類、魚(yú)、牛奶、蛋類和堅(jiān)果。食物過(guò)敏反應(yīng)是IgE 介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)，在攝入食物后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)可出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀?？赡艿陌Y狀為唇、舌、喉部灼痛或瘙癢、惡心、腹部痙攣、腹瀉和紅斑，甚至可出現(xiàn)哮喘、氣短、心跳加速、恐慌和精神錯(cuò)亂。有時(shí)堅(jiān)果、貝類、魚(yú)和花生甚至能引起全身型過(guò)

11、敏性反應(yīng)或者致死性過(guò)敏反應(yīng)。由于保守的植物性過(guò)敏原引發(fā)的IgE 抗體和相關(guān)植物制作的食物或者非食物類過(guò)敏原發(fā)生交叉反應(yīng)。如對(duì)于白樺樹(shù)花粉過(guò)敏的患者可能對(duì)蘋(píng)果、胡蘿卜、芹菜、榛果、馬鈴薯或者獼猴桃過(guò)敏。許多過(guò)敏原是含有低聚糖側(cè)鏈的糖蛋白類，這些側(cè)鏈結(jié)合在過(guò)敏原的蛋白骨架上。有時(shí)，患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生針對(duì)這種糖類結(jié)構(gòu)的抗體。14. 3 CCD 是“引起交叉反應(yīng)的糖類抗原決定簇”的簡(jiǎn)寫(xiě)。CCD普遍存在于大量植物或動(dòng)物類過(guò)敏原中。由于它們結(jié)構(gòu)的相似性，CCD 可引起很強(qiáng)的交叉反因。但大多數(shù)情況下，認(rèn)為它們與診斷無(wú)關(guān)，但同時(shí)又對(duì)體外診斷陽(yáng)性結(jié)果的解釋造成影響。因此，引入抗CCD 類的特異性IgE 抗體的檢測(cè)可

12、能會(huì)提供有用的信息，尤其當(dāng)IgE 陽(yáng)性結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符時(shí)，會(huì)為我們解釋檢測(cè)結(jié)果提供幫助。14. 4該試驗(yàn)可對(duì)特異性過(guò)敏原IgE進(jìn)行測(cè)定，以確定究竟是對(duì)哪一種物質(zhì)過(guò)敏。15實(shí)驗(yàn)性能參數(shù)：151 檢測(cè)范圍：未稀釋樣本的測(cè)定范圍是>0.35kU/l。 152 精密度：通過(guò)比較同一樣本在相同時(shí)間內(nèi)多次檢測(cè)結(jié)果的差異來(lái)研究批內(nèi)差異；批間 差異為用不同批號(hào)產(chǎn)品在不同時(shí)間對(duì)同一樣本進(jìn)行檢測(cè)所得的差異。每一次實(shí)驗(yàn)，抗原帶著色的深淺都在額定范圍內(nèi)。該歐蒙印跡法試劑具有很好的批內(nèi)和批間重復(fù)性。153靈敏度：采用Pharmacia CAP 系統(tǒng)為參考方法，本檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度對(duì)于牧草(g6)為90%、白樺(t3)為90%、屋塵螨(d1)為83%、粉塵螨（d2）為84%、貓(e1)為97.9%、馬(e3)為82%。154 方法學(xué)比較：與Pharmacia CAP 系統(tǒng)相比較，該試劑具有很好的特異性和靈敏度。15. 5特異性：采用Pharmacia CAP 系統(tǒng)為參考方法，本檢測(cè)系統(tǒng)的特異性為牧草(g6)為100%、白樺(t3)為92%、屋塵螨(d1)為100%、粉塵螨(d2)為86%、貓(e1)為95.7%、馬(e3)為100%。16. 方法的局限性：171 干擾因素：血紅蛋白濃度小于5 mg/ml 的溶血、甘油三脂濃度小于20