嗽寧口服液的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的實驗研究

1、    嗽寧口服液的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的實驗研究嗽寧口服液的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的實驗研究 作者：劉曦,宋鐵玎    作者單位：110032 沈陽，遼寧中醫(yī)藥大學研究生學院（劉曦）；遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院兒科（宋鐵玎）     【摘要】  目的 觀察嗽寧口服液的鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用。方法 采用豚鼠枸櫞酸引咳實驗、小鼠SO2引咳實驗、小鼠酚紅法祛痰實驗、乙酰膽堿組胺豚鼠引喘實驗、卵白蛋白豚鼠引喘實驗方法進行嗽寧口服液鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用的研究。結果 嗽寧口服液在豚鼠枸櫞酸引咳實驗及小鼠

2、SO2引咳實驗中表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)咳作用，在小鼠酚紅法祛痰實驗中祛痰作用顯著，對乙酰膽堿、組織胺引喘實驗豚鼠及卵白蛋白引喘實驗豚鼠具有顯著的平喘作用。結論 嗽寧口服液的中醫(yī)處方具有鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘的功效。     【關鍵詞】  嗽寧口服液,咳嗽/治療,祛痰,喘/治療,動物,實驗 Experiment study on the antitussive,eliminating phlegm and antiasthmatic action of Souning oral liquid  LIU Xi，SONG Tieding.Graduate

3、 College,Liaoning University of TCM,Shenyang 110032，China    【Abstract】  Objective  To study the antitussive，eliminating phlegm and antiasthmatic effects of Souning oral liquid.Methods  Some experiments were done,including cough induced by citric acid in guinea pigs,cou

4、gh induced by SO2 in mice,expectorant tests by phenol red in mice,asthma induced by histamine and acetylcholine in guinea pigs,asthma induced by ovalbumin in guinea pig,to study the antitussive，eliminating phlegm and antiasthmatic effects of Souning oral liquid.Results  Souning oral liquid exhi

5、bited significant effects in the tests of cough induced by citric acid,cough induced by SO2,expectorant tests by phenol red,asthma induced by histamine and acetylcholine,and asthma induced by ovalbumin.Conclusion  The study suggests that Souning oral liquid has  antitussive,eliminating phl

6、egm and antiasthmatic effects.    【Key words】  Souning oral liquid;  Cough/Treatment;  Eliminating phlegm;  Asthma/Treatment;Animal,experiment    嗽寧口服液是根據(jù)祖國傳統(tǒng)醫(yī)學理論，采用目前先進的中藥制劑技術精制而成的純中藥制劑，具有宣肺降逆，清熱化痰之功效，主治小兒發(fā)熱、咽喉疼痛、咳嗽，甚至氣急欲喘等，臨床有較好的療效，為進一步證實該藥的療效，本實驗就

7、其鎮(zhèn)咳、化痰、平喘作用進行了藥效學研究，現(xiàn)報道如下。1  材料與方法    1.1  材料    1.1.1  動物  昆明種小鼠，體質量2023 g用于鎮(zhèn)咳實驗，體質量2426 g用于祛痰實驗。白豚鼠，體質量180200 g，雌雄兩性。上述動物均由大連醫(yī)科大學實驗動物研究室提供，動物飼養(yǎng)條件合格，動物質量合格，合格證號：SCXK（遼）20020002。    1.1.2  藥品  嗽寧口服液（深棕色口服液，每毫升含2 g生藥，由遼寧中醫(yī)藥大學藥

8、學院制劑教研室提供，批號：20061015），兒童用量為60 g/d生藥，兒童平均體質量按25 kg計算，用時按體表面積等效量的折算方法折算成動物劑量，并以蒸餾水稀釋成所需要的濃度灌胃給藥；蜜煉川貝枇杷膏由川貝母、枇杷葉、桔梗、苦杏仁、甘草等組成，具有潤肺化痰、止咳平喘等功效（醫(yī)藥產(chǎn)品注冊證號zc20050012,香港京都念慈菴總廠有限公司），按說明書小兒的日用量為22.5 mL，小兒體質量按25 kg計算，則0.9 mL/kg，按體表面積等效量折算，小鼠劑量為5.73 mL/kg,大鼠劑量4.05 mL/kg,豚鼠劑量4.46 mL/kg,用時以蒸餾水配成所需要的濃度灌胃給藥。 &

9、#160;  1.1.3  試劑  枸櫞酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20050122）；無水亞硫酸鈉（沈陽市興順化學試劑廠，批號：19990412）；濃硫酸（錦西市化學試劑廠，批號：20050326），配制濃度50%；酚紅（沈陽市試劑三廠，批號：20030801），用時配制成濃度0.5%；氯化乙酰膽堿（上海試劑三廠，批號：20020501）配制濃度2%；磷酸組織胺（上海東風生物技術有限公司，批號：20011011）配制濃度0.1%；卵白蛋白（上海生物化學試劑公司，批號：20041015）。    1.1.4  儀器&

10、#160; 超聲波霧化器（廣東省汕頭市奧華醫(yī)療器械廠）；可見紫外分光光度計（日本島津公司）。    1.2  方法    1.2.1  鎮(zhèn)咳作用    1.2.1.1  豚鼠枸櫞酸引咳實驗  選用無異常行為體征，外觀健康活潑，體質量180200 g，雌雄兩性白色豚鼠進行預選。將17.5%的枸櫞酸溶液盛于超聲霧化器霧化室的霧化杯內(nèi)，排霧口連于鐘罩下方扣板開口處，使枸櫞酸溶液霧化氣由鐘罩底部噴入。將豚鼠扣于4 L的鐘罩內(nèi)，調(diào)節(jié)超聲霧化器的風速、霧化量及噴霧頭的口徑于適當

11、，向鐘罩內(nèi)恒速噴入枸櫞酸溶液霧化氣1 min，記錄5 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。豚鼠咳嗽聲音響亮，以聽到咳嗽聲音計1次咳嗽，淘汰5 min內(nèi)咳嗽次數(shù)少15次的預選例，將預選合格的50只豚鼠按體質量和性別隨機分成生理鹽水對照組、嗽寧口服液低劑量組（12 g/kg）、中劑量組（18 g/kg）、高劑量組（27 g/kg）及陽性對照組（4.5 mL/kg蜜煉川貝枇杷膏），每組10只，雌雄各半。將嗽寧口服液配成30%原濃度(內(nèi)含60 g生藥)用于低劑量組、45%原濃度(內(nèi)含90 g生藥)用于中劑量組、67.5%原濃度(內(nèi)含135 g生藥)用于高劑量組，蜜煉川貝枇杷膏配成22.3%原濃度。各組灌胃給藥，灌胃容

12、積均為20 mL/kg，每日給藥2次，連續(xù)給藥3 d。于末次給藥1 h后，將豚鼠扣于4 L的鐘罩內(nèi)，按預選的條件，向鐘罩內(nèi)恒速噴入枸櫞酸溶液霧化氣1 min，記錄5 min內(nèi)豚鼠咳嗽的次數(shù)。對各組豚鼠5 min內(nèi)咳嗽的次數(shù)進行t檢驗1。    1.2.1.2  小鼠SO2引咳實驗  選用無異常行為體征，外觀健康活潑，體質量2023 g，雌雄兩性小鼠50只用于實驗，按體質量、性別隨機分成生理鹽水對照組、嗽寧口服液低劑量組（15 g/kg生藥）、中劑量組（22.5 g/kg生藥）、高劑量組（33.75 g/kg）及陽性對照組（蜜煉川貝枇杷膏5.73

13、 mL/kg），每組10只，雌雄各半。嗽寧口服液配成37.5%原濃度（內(nèi)含75 g生藥）用于低劑量組，56.25%原濃度（內(nèi)含112.5 g生藥）用于中劑量組，84.38%原濃度（內(nèi)含168.75 g生藥）用于高劑量組，蜜煉川貝枇杷膏配成28.65%原濃度，各組灌胃給藥，灌胃容積為20 mL/kg,每日給藥2次，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥1 h后，將小鼠扣于500 mL的燒杯內(nèi)。在1個25 mL蒸發(fā)皿內(nèi)盛0.5 g無水亞硫酸鈉，將50%硫酸5 mL迅速倒入蒸發(fā)皿內(nèi)，隨即將燒杯連同小鼠扣于蒸發(fā)皿上，記錄小鼠咳嗽的潛伏期（從將小鼠扣于充滿SO2氣體的燒杯內(nèi)開始到小鼠第1次出現(xiàn)咳嗽的時間）及2 mi

14、n內(nèi)小鼠咳嗽的次數(shù)。對各組小鼠咳嗽的潛伏期和2 min內(nèi)小鼠咳嗽的次數(shù)進行t檢驗1。    1.2.2  祛痰作用  小鼠酚紅法祛痰實驗：選用無異常行為體征，外觀健康活潑，體質量2427 g雌雄兩性小鼠60只用于實驗，按體質量和性別隨機分成生理鹽水對照組、嗽寧口服液低劑量組（15 g/kg生藥）、中劑量組（22.5 g/kg）、高劑量組（33.75 g/kg生藥）及陽性對照組（5.73 mL/kg蜜煉川貝枇杷膏），每組12只，雌雄各半。藥物的稀釋濃度同小鼠SO2引咳實驗，各組小鼠灌胃給藥，灌胃容積均為20 mL/kg，每日給藥2次，連續(xù)給藥3

15、d。末次給藥前饑餓過夜(只供水)，末次給藥后1 h，腹腔注射0.5%酚紅生理鹽水溶液25 mL/kg,酚紅劑量為125 mg/kg。注射酚紅后30 min，麻醉后脫臼處死小鼠，背位固定，分離氣管。在氣管上端用注射針頭刺一小口，插入連接7號針頭（針頭前端剪短磨平）內(nèi)抽5%碳酸氫鈉溶液0.8 mL的2 mL注射器，插入支氣管的深度為0.40.5 cm，并用手術線結扎氣管與插入的針頭，用碳酸氫鈉溶液反復緩慢沖洗小鼠肺部10次，抽出沖洗液留存。以同樣的方法共沖洗7次。將留存的沖洗液2 500 r/min離心，取其上清液，在分光光度計波長546 nm處測其吸光度（A值），并以A值間接表示酚紅由小鼠支氣管

16、的分泌量，對A值進行組間t檢驗2。    1.2.3  平喘作用    1.2.3.1  乙酰膽堿組胺豚鼠引喘實驗  選擇無異常行為體征，外觀活潑健康，體質量180200 g，雌雄兩性的白色豚鼠。首先對豚鼠引喘的潛伏期進行預選，將豚鼠扣于4 L鐘罩內(nèi)，按預實驗調(diào)定的參數(shù)調(diào)節(jié)超聲霧化器的風速、霧化量及噴霧頭的口徑，從鐘罩底部扣板向鐘罩內(nèi)恒速噴入2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺混合液霧化氣15 s，觀察、記錄豚鼠從噴霧開始到哮喘發(fā)作的引喘潛伏期，豚鼠出現(xiàn)明顯呼吸急促、困難，口周發(fā)紺，腹肌隨呼吸快速大幅度地

17、收縮、舒張，頭隨呼吸頻率點頭式震顫，躁動不安，步態(tài)蹣跚，抽搐即將跌倒，即為哮喘發(fā)作。迅速將豚鼠移至通風良好處，必要時輔以人工呼吸。選擇潛伏期小于100 s的豚鼠用于正式實驗，并以此潛伏期作為給藥前潛伏期。將篩選出敏感的豚鼠按潛伏期的長短，并兼顧體質量和性別隨機分成生理鹽水對照組、嗽寧口服液低劑量組（12 g/kg生藥）、中劑量組（18 g/kg生藥）、高劑量組（27 g/kg生藥）及陽性對照組（4.5 mL/kg蜜煉川貝枇杷膏），每組10只。藥物稀釋濃度同豚鼠枸櫞酸引咳實驗。各組灌胃給藥，20 mL/kg，每日給藥2次，連續(xù)給藥3 d。末次給藥后1 h，以同樣條件測定各組每只豚鼠的引喘潛伏期（

18、如豚鼠用藥后在6 min內(nèi)無喘息發(fā)作，則該豚鼠的引喘潛伏期按6 min計算）。對各實驗組豚鼠的引喘潛伏期進行組間t檢驗1，3。    1.2.3.2  卵白蛋白豚鼠引喘實驗  選擇無異常行為體征，外觀活潑健康，體質量180200 g白色豚鼠，分別腹腔注射10%卵白蛋白1 mL進行致敏，致敏后的第14天，應用2%卵白蛋白，以超聲霧化器噴霧引喘。將豚鼠置于4 L鐘罩內(nèi)，將超聲霧化器按預實驗已調(diào)定的參數(shù)調(diào)節(jié)風速、霧化量及噴霧頭的口徑，從鐘罩底部扣板向鐘罩內(nèi)恒速噴入2%卵白蛋白溶液霧化氣30 s，觀察記錄從噴霧開始到哮喘發(fā)作的引喘潛伏期。豚鼠出現(xiàn)明顯的

19、呼吸急促，呼吸困難，口周發(fā)紺，腹肌隨呼吸快速大幅度地收縮、舒張，頭隨呼吸頻率點頭式震顫，躁動不安，步態(tài)蹣跚，抽搐將要跌倒，即為哮喘發(fā)作。迅速將豚鼠移至通風良好處，必要時輔以人工呼吸。選擇哮喘潛伏期在120 s內(nèi)的豚鼠用于正式實驗，并以此潛伏期作為給藥前的潛伏期。將預選出的豚鼠，按潛伏期的長短，并兼顧性別和體質量隨機分成生理鹽水對照組、嗽寧口服液低劑量組（12 g/kg生藥）、中劑量組（18 g/kg生藥）、高劑量組（27 g/kg生藥）、陽性對照組（4.5 mL/kg蜜煉川貝枇杷膏），每組10只。藥物稀釋濃度同豚鼠枸櫞酸引咳實驗。各組灌胃給藥，20 mL/kg，每日給藥2次，連續(xù)給藥3 d。末

20、次給藥后1 h，仍將豚鼠扣入4 L鐘罩內(nèi),以相同的條件向鐘罩內(nèi)恒速噴入2%卵白蛋白30 s,記錄各實驗組各豚鼠的引喘潛伏期（如豚鼠用藥后在6 min內(nèi)無哮喘發(fā)作，則該豚鼠的引喘潛伏期按6 min計算）。對各組引喘潛伏期進行組間t檢驗3，4。2  結果    2.1  嗽寧口服液對霧化枸櫞酸引咳豚鼠咳嗽次數(shù)的影響  見表1。表1  嗽寧口服液對霧化枸櫞酸引咳豚鼠咳嗽次數(shù)的影響注：與生理鹽水對照組比較,aP<0.05,bP<0.01。    2.2  嗽寧口服液對SO2引咳小鼠

21、咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響  見表2。表2  嗽寧口服液對SO2引咳小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響注：與生理鹽水對照組比較，aP<0.05,bP<0.01。    2.3  嗽寧口服液對小白鼠支氣管酚紅分泌量吸光度值的影響  見表3。表3  嗽寧口服液對小白鼠支氣管酚紅分泌量吸光度值的影響注：與生理鹽水對照組比較，aP<0.05,bP<0.01。    2.4  嗽寧口服液對乙酰膽堿組胺引喘豚鼠引喘潛伏期的影響  見表4。表4  嗽

22、寧口服液對乙酰膽堿組胺引喘豚鼠引喘潛伏期的影響(±s，n=10)注：與生理鹽水對照組比較，aP<0.05,bP<0.01。    2.5  嗽寧口服液對卵白蛋白引喘豚鼠引喘潛伏期的影響  見表5。表5  嗽寧口服液對卵白蛋白引喘豚鼠引喘潛伏期的影響注：與生理鹽水對照組比較，aP<0.05，bP<0.01。3  討論    嗽寧口服液由蜜炙桑白皮、炒杏仁、前胡、炒牛蒡子、桔梗、甘草等組成，具有止咳、祛痰、平喘、發(fā)散風熱等功效。方中重用桑白皮為君藥，杏仁為臣藥，桔梗、前胡、牛蒡子為佐藥，甘草為使藥。桑白皮甘寒清肺，杏仁苦溫降肺，又兼宣散止咳，二者配伍杏仁助君降肺化痰而兼清熱，一升一降而助肺之宣肅。桔梗、前胡苦辛微寒，宣散肺氣兼化痰，二者以化為主。牛蒡子辛苦寒以宣散肺熱利咽為主，再加甘草調(diào)和諸藥。使肺熱得清、痰濁得化，肺氣清肅之氣下行，咳逆諸癥得平。從表1可見，嗽寧口服液低、中、高劑量組均能顯著減少豚鼠5 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，作用呈量效關系，在臨床等效劑量下，其作用與蜜煉川貝枇杷膏相似。實驗結果表明嗽寧口服液對霧化枸櫞酸引咳豚鼠具有顯著的鎮(zhèn)咳作用。從表2可見，嗽寧口服液低、中、高劑量組均