水提物中黃芩苷含量的測定方法

1、水提物中黃芩苷含量的測定方法              作者：王曉琴， 趙瑛， 支德娟， 李紅玉  【關(guān)鍵詞】  黃芩苷；,黃芩水提物；,三波長摘要：目的建立以水作溶劑的水系三波長紫外分光光度法，用于測定水提物中黃芩苷的含量，使之與水煎煮法提取黃芩苷工藝的溶劑體系相兼容，評價從黃芩中浸提黃芩苷的工藝并實現(xiàn)終產(chǎn)品的質(zhì)量控制，以滿足工廠大批量在線檢測的需求。方法以水作溶劑的水系三波長紫外分光光度法，有別于前人以甲醇作溶劑的三波長紫外分光光度法，并進行

2、了精密度實驗，以驗證方法的準確性。結(jié)果水溶黃芩苷標準溶液在0.512.0 g/ml范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程：A0.032 77C0.009 08，相關(guān)系數(shù)r=0.997 08，三組樣品測得的相對標準偏差RSD2.1。結(jié)論 以水作溶劑的水系三波長紫外分光光度法測定水提物中黃芩苷的含量是可行的，操作簡便、快速、準確, 可以廣泛應用于工業(yè)生產(chǎn)中,滿足工業(yè)化需要,具有良好的應用前景。關(guān)鍵詞：黃芩苷；  黃芩水提物；  三波長紫外分光光度法  The Determination of Baicalin in the Water Extraction

3、 of Scutellaria baicalensis GeorgiAbstract：ObjectiveTo establish the water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry to determine baicalin content in water extraction of Scutellaria baicalensis Georgi.MethodsUsing the water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry, whi

4、ch differed from previous researches, then inspecting the accuracy by precision test. ResultsThe range of linearity with concentration and absorbance of standard baicalin dissolved in water was between 0.512.0 g/ml, linearity relationship A0.032 77C0.009 08, correlativity was 0.997 08, RSD < 2.1.

5、 ConclusionThe water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry to determine baicalin content in water extraction of Scutellaria Baicalensis Georgi is advisable, simple, rapid, accurate and has bright future on analysis application.Key words：Baicalin;   Water extraction of Sc

6、utellaria baicalensis Georgi;   Threewavelength UV spectrophotometry     黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。論文論文參考網(wǎng)性寒、味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。在臨床中屬常用中藥，用于治療上呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染、菌痢、肝炎、高血壓等。黃芩主要的有效成分為41種黃酮類化合物，在這些黃酮類成分中，最重要的是黃芩苷（Baicalin）。 目前用于檢測黃芩苷的方法有高壓液相1，高效毛細管電泳2，反相高效液相

7、3，但上述方法要求有較昂貴的儀器，且樣品處理步驟繁瑣，不能滿足工廠大批量在線檢測的需求，因此筆者認為最為簡便、快捷的方法為三波長紫外分光光度法。三波長紫外分光光度法，是一種計算機測定方法。它在干擾組分的吸收光譜上具有線性吸收的三個波長處，對被測組分的吸光度進行測量，然后通過計算而求得被測組分的含量。此法能消除某些干擾組分的影響、溶液混濁、吸收池不潔凈或不完全配對所引起的誤差，還解決了隨濃度不同使本底值漂移，吸收峰不對稱等給定量分析帶來的困難4。 三波長紫外分光光度法已被用于粉刺合劑5，愈風II號合劑6中黃芩苷及黃芩中總黃酮7含量的測定，并且以往該法對黃芩苷標準品及樣品的測定均以甲醇作溶劑。水煎

8、煮法是中藥傳統(tǒng)浸提方法之一，若測定以水煎煮法浸提的黃芩水提物中黃芩苷的含量，應選擇水為溶劑溶解稀釋標準品。另外，要實現(xiàn)對黃芩水提取工藝的研究及終產(chǎn)品質(zhì)量的在線控制，使之能夠滿足工廠大批量在線檢測的需求，也需要簡便、快捷的三波長紫外分光光度法，然而目前對這種浸提物中黃芩苷的三波長紫外分光光度法還很少探索。鑒于以上原因，本文擬探索用三波長紫外分光光度法對水煎煮法浸提的黃芩浸提物進行檢測，以解決上述問題。1  儀器與材料儀器：TU1901紫外可見分光光度計（北京普析通用）；材料：黃芩苷提取液（甘肅農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品儲藏加工研究中心提供）；黃芩苷對照品（南京青澤醫(yī)藥科技有限公司提供）；甲醇。2

9、  方法2.1  水溶黃芩苷對照溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的黃芩苷標準品6.0 mg，置50 ml容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為12.0 g/ml的標準溶液。分別稀釋至0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 g/ml。2.2  甲醇溶黃芩苷對照溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的黃芩苷對照品6.0 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為12.0 g/ml的對照溶液。2.3  測定波長的確定對水溶和甲醇溶解稀釋至12.0 g/ml的標準溶液進行光譜掃描（200400 nm），分別

10、以水和甲醇為對照，用作圖法求得一個主檢測波長和兩個參比波長。2.4  測定方法應用TU1901定量測定程序，在測定波長處分別測定樣品的吸光度。從標準曲線上求出相應的濃度，再換算出樣品中黃芩苷的含量。2.5  精密度實驗取8.0 g/ml的水溶黃芩苷標準溶液5份，以水為對照，在3個測定波長處測定溶液的吸光度。2.6  數(shù)據(jù)處理參見陶增寧等（1985）8相對標準偏差RSD= n     i=1(i-)2     n-1（其中xi為每個樣本數(shù)據(jù)， 為樣本全部數(shù)據(jù)之平均值，n為樣本數(shù)目）。論文

11、論文參考網(wǎng) 3  結(jié)果3.1  測定波長的確定3.1.1  水溶黃芩苷對照品的光譜掃描圖譜水溶黃芩苷對照品（12.0 g/ml），以水做對照，在200400 nm范圍的光譜掃描圖譜，見圖1；甲醇溶黃芩苷對照品(12.0 g/ml)，以甲醇作對照，在200400 nm范圍內(nèi)的光譜掃描圖譜，見圖2。圖1  水溶黃芩苷標準品光譜掃描圖譜（略）圖2  甲醇溶黃芩苷標準品光譜掃描圖譜（略）由圖12可見，不論以水或甲醇作對照，黃芩苷在250400 nm范圍內(nèi)均有兩個吸收峰，分別是275.5 nm和316.0 nm。以水或甲醇作溶劑，黃芩苷的吸收光譜在250

12、400 nm范圍內(nèi)完全一致，這表明可用水作溶劑進行黃芩苷的三波長的測定。3.1.2  測定波長的確定根據(jù)上述光譜掃描結(jié)果，采用作圖法求得水溶和甲醇溶的黃芩苷標準品的三個測定波長均為275.5，250.0，298.0 nm。3.2  水溶黃芩苷標準溶液的工藝曲線的建立將12.0 g/ml的水溶黃芩苷標準溶液分別稀釋至0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 g/ml，以水為對照，在250.0，275.5，298.0 nm處測定吸光度，TU1901程序自動給出A值，做工作曲線。結(jié)果見圖3。得出的線性回歸方程為：A0.03277C0.00908。由圖3可見，水溶黃

13、芩苷標準溶液在0.512.0 g/ml范圍內(nèi)，分別在三個測定波長處測其吸光度，A與濃度C呈良好的線性關(guān)系 (r=0.997 08) ，可按標準曲線對黃芩苷進行定量測定。3.3  水系三波長紫外光譜法對供試樣品的檢測結(jié)果選取3組樣品，檢測。結(jié)果見表1（n=5）。表1  樣品檢測結(jié)果（略）圖3  水溶黃芩苷標準品的工藝曲線（略）3.4  方法的精密度實驗取8.0 g/ml的水溶黃芩苷標準溶液5份，以水為空白，測定結(jié)果列于表2中。表2  精密度實驗結(jié)果（略）4  討論本實驗結(jié)果表明，不論選擇水或是甲醇作溶劑，都不影響黃芩苷在250400 n

14、m的光譜峰形，也不影響黃芩苷的主峰及側(cè)峰的吸光值，只是在遠紫外處的峰形上稍有差異，但這并不影響對黃芩苷含量的測定，由此可見以水作溶劑來測定水浸提液中的黃芩苷含量原理上是可行的。以水系三波長紫外分光光度法的工作曲線定量水溶黃芩苷標準品，測定濃度與實際濃度基本吻合，且樣品檢測數(shù)據(jù)重復性好，表明三波長紫外分光光度法同樣適用于水浸提液中的黃芩苷含量測定，較好地解決了甲醇溶劑體系與以水煎煮法浸提獲得的黃芩浸提物的溶劑體系不兼容的問題，更有利于對水浸提液中黃芩苷含量的準確測定。且該方法簡單，快捷，不需要價格昂貴的儀器，能夠?qū)崿F(xiàn)工廠的在線檢測需求。實驗中發(fā)現(xiàn)，以甲醇作溶劑時，比色皿易受污染，檢測多個用甲醇溶

15、解稀釋的黃芩苷標準溶液后，掃描圖譜峰形發(fā)生較大變化，吸光值變小，使測量數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大偏差，工作曲線的線性范圍變小。如果發(fā)生上述現(xiàn)象，可將比色皿用10硝酸或洗液浸泡過夜。在這一點，選用水系三波長紫外分光光度法測定水煎煮黃芩苷提取液樣品優(yōu)于以甲醇做溶劑進行測定。參考文獻：1  李光慧，李  虹，侯曉明，等.HPLC測定御感袋泡茶中葛根素和黃芩苷的含量J.中國藥學雜志，1996，21（11）：680.2  高山林，劉  峻，謝小群.高效毛細管電泳法測定黃芩多倍體株系中黃芩苷的含量J.藥物生物技術(shù)，2002，9(6) ：349.3  劉美蘭，楊立新，萬元吉，等.RPHPLC法測定7種藥用黃芩中黃芩苷和漢黃芩苷的含量J.藥物分析雜志，2002，22(2)：99.4  羅慶堯，鄧延倬，蔡汝秀，等.分光光度分析M.北京：科學出版社，1992：233.5  陳珍鳳，焦  正，鄭基蒙，等.三波長分光光度法測定粉刺合劑中黃芩苷的含量J.上海醫(yī)科大學