華南師范大學(xué)實驗報告

1、華 南 師 范 大 學(xué) 實 驗 報 告學(xué)生姓名 莊立棟 學(xué) 號 20072401052 專 業(yè) 理綜2班 年級、班級 2007級 課程名稱 生物化學(xué)實驗 實驗項目 FolinWu法測定血液葡萄糖含量 實驗類型 驗證 設(shè)計 綜合 實驗時間 2008 年 11月 10 日實驗指導(dǎo)老師 陳文利/徐杰 實驗評分 一、實驗?zāi)康模赫莆誇olin-Wu法測定血糖含量的原理和方法。二、實驗原理：因為葡萄糖的半縮醛羥基是具有還原性的，所以通過加熱，葡萄糖的半縮醛羥基被氧化為羧基，同時將堿性銅試劑中的二價銅離子還原為黃色的氧化成黃色的氧化亞銅沉淀。氧化亞銅可使磷鉬酸還原成蘭色的鉬藍(lán)，葡萄糖濃度越大，藍(lán)色越深，故可

2、用比色法測定鉬藍(lán)的光吸收值來測定葡萄糖的濃度。由于血液成分復(fù)雜，血液中的許多種蛋白質(zhì)存在會干擾血糖的測定。因此可用鉬酸法處理抗凝血來制備無蛋白濾液，再用無蛋白濾液來測定濾液在中的葡萄糖含量。血糖的測定結(jié)果還會因氧化亞銅被空氣中的氧氧化而受影響。因此，需用帶有細(xì)頸的Folin吳憲式血糖管來使溶液盡量減少與空氣的接觸。三、材料試劑與器具：（一）、試劑： 抗凝血、草酸鉀、0.25%苯甲酸溶液、10%鎢酸鈉溶液、1/3mol/L硫酸溶液、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（0.1mg/mL）堿性銅試劑、磷鉬酸試劑；（二）、器具： 試管及試管架、小漏斗、水浴鍋、電爐、燒杯、Folin吳憲式血糖管、分光光度計、移液管、比色杯

3、。四、步驟：（一）、制備無蛋白濾液： 取一支試管加入7.5mL蒸餾水；用移液管量取0.5mL抗凝血。小心擦去管外血液后，于試管底部緩緩放出血液。吸取試管內(nèi)蒸餾水吹洗移液管數(shù)次后，充分搖勻，使血液完全溶血；加入1/3mol/L硫酸溶液1mL，邊加邊搖，搖勻后放置5min；加入10%鎢酸鈉溶液1mL，邊加邊搖，搖勻后放置5min；過濾，收集濾液備用（過濾時應(yīng)于漏斗上蓋一表面皿，防止水分蒸發(fā)）。若濾液不清，應(yīng)重新過濾至溶液澄清為止。 血溶液加硫酸、鎢酸鈉除去蛋白質(zhì)（二）、血糖的測定： 1、取血糖管3支，按下表進(jìn)行編號后操作。 （單位：mL） 血糖管編號試劑（mL）空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管蒸餾水2無蛋白血濾

4、液2標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液2堿性銅溶液222混勻，沸水浴中煮8min，勿搖動取出，流水冷卻磷鉬酸試劑222蒸餾水191919 2、充分混勻。3、用分光光度計比色測定620nm吸光值A(chǔ)。（三）、 血糖濃度計算結(jié)果： 測定管A620 100每100mL血液葡萄糖的mg數(shù) = × 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的mg數(shù) × 標(biāo)準(zhǔn)管A620 0.1五、結(jié)果與分析：1、血糖的測定： 現(xiàn)象： 血糖管編號 現(xiàn)象 空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管現(xiàn)象一（沸水浴后）溶液呈淺藍(lán)色磚紅色沉淀產(chǎn)生磚紅色沉淀產(chǎn)生現(xiàn)象二（加磷鉬酸后）冒氣泡，溶液褪色冒氣泡，溶液藍(lán)色加深冒氣泡，溶液藍(lán)色加深 現(xiàn)象一（沸水浴后） 現(xiàn)象二（加磷鉬酸后）比色杯調(diào)零結(jié)果

5、：1號比色杯2號比色杯3號比色杯0.0000.0050.003用分光光度計比色測定620nm吸光值A(chǔ)： 比色杯號測量值 1號比色杯（空白管）2號比色杯（標(biāo)準(zhǔn)管）3號比色杯（測定管）測量值10.0000.4880.321測量值20.0000.4900.320平均值0.0000.4890.3212、血糖濃度計算結(jié)果： 測定管A620 100每100mL血液葡萄糖的mg數(shù) = × 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的mg數(shù) × 標(biāo)準(zhǔn)管A620 0.1 0.321 100= × 0.2mg × 0.489 0.1 = 131mg六、實驗討論：血糖的測定結(jié)果會因氧化亞銅被空氣中的氧氧化而

6、受影響。因此，需用帶有細(xì)頸的Folin吳憲式血糖管來使溶液盡量減少與空氣的接觸。血糖測定時，加入磷鉬酸試劑會有氣泡冒出，是因為堿性銅溶液中含有碳酸鈉，會與呈酸性的磷鉬酸反應(yīng)，產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w。 實驗中鎢酸的作用是讓抗凝血中的蛋白質(zhì)失活，以制取無蛋白溶液。由于血液成分復(fù)雜，血液中的許多種蛋白質(zhì)存在會干擾血糖的測定。我想，是不是可以用加熱的方法也可達(dá)到同樣的目的，因為加熱的方法也較易于操作，且葡萄糖較為穩(wěn)定，應(yīng)該不會受加熱的影響。 實驗中以無蛋白濾液，而不以全血、血漿或血清來測定血糖含量，是因為全血、血漿或血清成分復(fù)雜，其中的許多種蛋白質(zhì)存在會干擾血糖的測定。 七、相關(guān)資料：注意事項：1.欲得準(zhǔn)確

7、結(jié)果，所取血液的量必須準(zhǔn)確。如果由吸管中放出血液的速度太快，會有大量血液粘在吸管內(nèi)壁，容量不準(zhǔn)，所以一般放出1ml血液所用的時間不應(yīng)少于1min。2.沉淀由鮮紅變?yōu)榘底厣且蜴u酸鈉與硫酸作用生成鎢酸，在適當(dāng)酸度時，使血紅蛋白變性、沉淀。如血沉淀放置后不變?yōu)樽丶t色或重濾后仍混濁，可在鎢酸與血混合液中加入10硫酸12滴，待變?yōu)榘底厣笤贋V?！?】常用的葡萄糖的測定方法：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下使鄰聯(lián)甲苯胺生成藍(lán)色物質(zhì)，此有色物質(zhì)在625nm 波長下與葡萄糖濃度成正比。通過測定藍(lán)色物質(zhì)的吸光度可計算樣品中葡萄糖的含量?！?】八、參考文獻(xiàn)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗指導(dǎo) 徐秀珍 梁山 編 暨