島津LC-10AT型HPLC操作規(guī)程ppt課件

1、目的目的:規(guī)范島津規(guī)范島津LC-10AT型高效液相型高效液相色譜儀的運(yùn)用。色譜儀的運(yùn)用。范圍范圍:適用于島津適用于島津LC-10AT型高效液型高效液相色譜儀的運(yùn)用。相色譜儀的運(yùn)用。職責(zé)職責(zé):操作員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施擔(dān)任。操作員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施擔(dān)任。 本系統(tǒng)由本系統(tǒng)由1個(gè)個(gè)LC-10ATvp溶劑保送泵、溶劑保送泵、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、手動(dòng)進(jìn)樣閥、SPD-10Avp紫外紫外-可見(jiàn)檢測(cè)可見(jiàn)檢測(cè)器、器、N2000色譜數(shù)據(jù)任務(wù)站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)。色譜數(shù)據(jù)任務(wù)站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)。1 、預(yù)備所需的流動(dòng)相，用適宜的、預(yù)備所需的流動(dòng)相，用適宜的0.45m濾膜過(guò)濾，超聲脫

2、氣濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。2 、根據(jù)待檢樣品的需求改換適宜的色譜柱留意方向和定、根據(jù)待檢樣品的需求改換適宜的色譜柱留意方向和定量環(huán)。量環(huán)。3、 配制樣品和規(guī)范溶液，用適宜的配制樣品和規(guī)范溶液，用適宜的0.45m濾膜過(guò)濾。留意濾膜過(guò)濾。留意腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑4 、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道能否銜接正、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道能否銜接正常。常。 接通電源，依次開(kāi)啟不延續(xù)電源、接通電源，依次開(kāi)啟不延續(xù)電源、 泵、檢測(cè)器，待泵、檢測(cè)器，待泵和檢測(cè)器自檢終了后，翻開(kāi)打印機(jī)、電腦顯示器、主泵和檢測(cè)器自檢終了后，翻開(kāi)打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后

3、翻開(kāi)色譜任務(wù)站。機(jī)，最后翻開(kāi)色譜任務(wù)站。三、三、 開(kāi)機(jī)開(kāi)機(jī)1、 波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵鍵1次，波長(zhǎng)數(shù)字鍵閃次，波長(zhǎng)數(shù)字鍵閃爍，輸入所需波長(zhǎng)值，按爍，輸入所需波長(zhǎng)值，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出到初始屏幕。鍵退出到初始屏幕。2 、流速設(shè)定：在泵顯示初始屏幕時(shí)，按、流速設(shè)定：在泵顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速流速普通為超越流速流速普通為超越1ml/min，按，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出鍵退出 1： 將管路的吸濾器放入裝有預(yù)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；將管路的吸濾器放入裝

4、有預(yù)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；2 ：逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)泵的排液閥：逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)泵的排液閥180，翻開(kāi)排液閥；，翻開(kāi)排液閥；3 ：按泵的：按泵的purge鍵，鍵，pump指示燈亮，泵大約以指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的高流速?zèng)_洗，的高流速?zèng)_洗，3min可設(shè)定后自動(dòng)停頓，普通視管路無(wú)氣泡即可?？稍O(shè)定后自動(dòng)停頓，普通視管路無(wú)氣泡即可。4 ：將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)究竟，封鎖排液閥。：將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)究竟，封鎖排液閥。5 ：如管路中仍有氣泡，那么反復(fù)以上操作直至氣泡排盡。：如管路中仍有氣泡，那么反復(fù)以上操作直至氣泡排盡。6 ：如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下銜接納，放入廢液瓶中：如按以上方法不能排盡氣

5、泡，從柱入口處拆下銜接納，放入廢液瓶中，設(shè)流速為，設(shè)流速為5ml/min，按，按pump鍵，沖洗鍵，沖洗3min后再按后再按pump鍵停泵，重鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。1、查看基線：、查看基線：1.1：按：按翻開(kāi)翻開(kāi)“在線在線色譜任務(wù)站軟件，色譜任務(wù)站軟件，1.2：輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，：輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，1.3：按下：按下“數(shù)據(jù)搜集頁(yè)的數(shù)據(jù)搜集頁(yè)的 按鈕。按鈕。 2 、 2.1 ：按泵的：按泵的pump鍵，泵啟動(dòng)，鍵，泵啟動(dòng)，pump指指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，普通最少

6、需統(tǒng)，普通最少需6倍柱體積的流動(dòng)相。倍柱體積的流動(dòng)相。 2.2 ：檢查各管路銜接處能否漏液，如漏：檢查各管路銜接處能否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。液應(yīng)予以排除。 2.3 ：察看泵控制屏幕上的壓力值，壓力：察看泵控制屏幕上的壓力值，壓力動(dòng)搖應(yīng)不超越動(dòng)搖應(yīng)不超越1MPa。如超越那么可初步判。如超越那么可初步判別為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再別為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再操作。操作。 2.4 ：察看基線變化。假設(shè)沖洗至基線漂：察看基線變化。假設(shè)沖洗至基線漂移移0.01mV/min，噪聲為，噪聲為25mmol/L的緩沖液的緩沖液4.每天沖洗柱每天沖洗柱5.穩(wěn)定進(jìn)樣條件穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)理流動(dòng)相調(diào)理

7、流動(dòng)相6.采用維護(hù)柱采用維護(hù)柱1.流速添加流速添加2.樣品超載樣品超載3.鍵合相流失鍵合相流失4.流動(dòng)相組成變化流動(dòng)相組成變化5.溫度添加溫度添加1.檢查泵檢查泵,重新設(shè)定流速重新設(shè)定流速2.降低樣品量降低樣品量3.流動(dòng)相流動(dòng)相PH值堅(jiān)持在值堅(jiān)持在37.5檢查柱的方向檢查柱的方向4.防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫柱恒溫1.流速下降流速下降2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化硅膠柱上活性點(diǎn)變化3.鍵合相流失鍵合相流失4.流動(dòng)相組成變化流動(dòng)相組成變化5.溫度降低溫度降低1.管路走漏管路走漏,改換泵密封圈改換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡排除泵內(nèi)氣泡2.用流動(dòng)相改性劑用流動(dòng)相改性劑,如加三如加三乙胺乙

8、胺,或采用堿至鈍化柱或采用堿至鈍化柱3.流動(dòng)相流動(dòng)相PH值堅(jiān)持在值堅(jiān)持在37.5檢查柱的方向檢查柱的方向4.防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫柱恒溫1.樣品體積過(guò)大樣品體積過(guò)大2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)樣品溶劑過(guò)強(qiáng)3.柱塌陷或構(gòu)成短路通道柱塌陷或構(gòu)成短路通道4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.進(jìn)樣器損壞進(jìn)樣器損壞1.用流動(dòng)相配樣用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的總的樣品體積小于第一峰的15%2.采用較弱的樣品溶劑采用較弱的樣品溶劑3.改換色譜柱改換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件4.改換燒結(jié)不銹鋼改換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品過(guò)濾樣品5.改換進(jìn)

9、樣器轉(zhuǎn)子改換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子1.進(jìn)樣閥剩余峰進(jìn)樣閥剩余峰2.樣品中未知物樣品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽譜肽譜)5.水污染水污染(反相反相)1.每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改良閥和樣品的改良閥和樣品的清洗清洗2.處置樣品處置樣品3.重新平衡柱重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離尤其是離子對(duì)色譜子對(duì)色譜)4.每天新配每天新配,用抗氧化劑用抗氧化劑5.經(jīng)過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用經(jīng)過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)級(jí)的水的水1.氣泡氣泡(鋒利峰鋒利峰)2.污染污染(隨機(jī)噪聲隨機(jī)噪聲)3.檢測(cè)器燈延續(xù)噪聲檢測(cè)器燈延續(xù)

10、噪聲4.電干擾電干擾(偶爾噪聲偶爾噪聲)5.檢測(cè)器中有氣泡檢測(cè)器中有氣泡1.流動(dòng)相脫氣流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓加柱后背壓2.清洗柱清洗柱,凈化樣品凈化樣品,用用HPLC級(jí)試劑級(jí)試劑3.改換氘燈改換氘燈4.采用穩(wěn)壓電源采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的檢查干擾的來(lái)源來(lái)源(如水浴等如水浴等)5.流動(dòng)相脫氣流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓加柱后背壓1.柱超載柱超載2.峰干擾峰干擾3.硅羥基作用硅羥基作用4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.柱塌陷或構(gòu)成短路通道柱塌陷或構(gòu)成短路通道6.死體積或柱外體積過(guò)大死體積或柱外體積過(guò)大7.柱效下降柱效下降1.降低樣品量降低樣品量,添加柱直徑采用較高容量的固定相添加柱直徑采用較高

11、容量的固定相2.清潔樣品清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相調(diào)整流動(dòng)相3.加三乙胺加三乙胺,用堿致鈍化柱添加緩沖液或鹽的濃度降低用堿致鈍化柱添加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相流動(dòng)相PH值值,鈍化樣品鈍化樣品4.改換燒結(jié)不銹鋼改換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品過(guò)濾樣品5.改換色譜柱改換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件6.銜接點(diǎn)降至最低銜接點(diǎn)降至最低,對(duì)一切銜接點(diǎn)作適宜調(diào)整對(duì)一切銜接點(diǎn)作適宜調(diào)整,盡能夠盡能夠采用細(xì)內(nèi)徑的銜接納采用細(xì)內(nèi)徑的銜接納7.用較低腐蝕條件用較低腐蝕條件,改換柱改換柱,采用維護(hù)柱采用維護(hù)柱1.進(jìn)樣體積過(guò)大進(jìn)樣體積過(guò)大2.在進(jìn)樣閥中呵斥峰擴(kuò)展在進(jìn)樣閥中呵斥峰擴(kuò)展3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大1. 用流動(dòng)相配樣用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小總的樣品體積小于第一峰的于第一峰的15%2.進(jìn)樣前后排出氣泡以降低分散進(jìn)樣前后排出氣泡以降低分散3.設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)點(diǎn)4.設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的寬的10%5.流動(dòng)相粘度過(guò)高流動(dòng)相粘度過(guò)高6.檢測(cè)池體積過(guò)大檢測(cè)池體積過(guò)大