低濃度HBsAg人群HBV DNA與HBV M定量結(jié)果的關(guān)系及評(píng)價(jià)

1、低濃度HBsAg人群HBV DNA與HBV M定量結(jié)果的關(guān)系及評(píng)價(jià)         11-01-28 13:35:00     編輯：studa20            作者：成軍 孫長(zhǎng)貴, 陳瑜, 許志良, 戴玉柱, 孫關(guān)忠, 李曉軍【摘要】  目的: 比較高、 低濃度HBsAg陽性人群乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)與乙型病毒肝炎標(biāo)志物(H

2、BV M)含量之間的差異, 揭示低濃度HBsAg人群HBV DNA與HBV M之間的特點(diǎn)。方法: 對(duì)264例慢性HBV感染者的HBsAg濃度(高濃度HBsAg組、 低濃度HBsAg組)及自然史(免疫耐受期、 免疫清除期、 非活動(dòng)期)進(jìn)行分組, 采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和微粒子酶免疫試驗(yàn)(MEIA)對(duì)147例低濃度HBsA組和117例高濃度HBsAg組的血清標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA和HBV M的定量測(cè)定并進(jìn)行比較。結(jié)果: 低濃度HBsAg組免疫耐受期7例、 免疫清除期4例血清標(biāo)本HBV DNA、 抗HBs、 HBeAg、 抗HBe之間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.5319.181, P&

3、lt;0.010.05), 非活動(dòng)期136例血清標(biāo)本中有94.1%(128/136)HBV DNA處于105copies/L以下, 直接法PCR、 濃縮法PCR對(duì)HBV DNA檢出率分別為10.3%(14/136)、 10.3%(47/136), 且HBV DNA與HBV M各指標(biāo)之間均不存在相關(guān)性(P>0.05); 高濃度HBsAg組免疫耐受期25例HBV DNA與HBeAg、 抗HBe存在相關(guān)性(r=0.7440.772, tr=3.8584.207, P<0.01), 免疫清除期46例和非活動(dòng)期46例HBV DNA則僅與抗HBs存在負(fù)相關(guān)性(r=-0.693-0.598, t

4、r=-4.616-3.936, P<0.010.05)。結(jié)論: 低濃度HBsAg人群具有特殊的血清學(xué)特點(diǎn), 可能與機(jī)體免疫耐受及免疫系統(tǒng)個(gè)體化反應(yīng)有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  乙型肝炎病毒標(biāo)志物; 慢性HBV感染; 乙型肝炎表面抗原    Abstract  AIM:  To analyze the quantitative differences between hepatitis B virus markers (HBV M) and HBV DNA in population with highlevel or lowlevel

5、HBsAg,  and to reveal the characteristics of HBV DNA and HBV M in population with lowlevel HBsAg. METHODS:  A total of 264 chronic HBVinfected patients were enrolled in our study,  and were divided into lowlevel HBsAg group(147 cases) and highlevel HBsAg group(117 cases) based on the

6、HBsAg level or were divided into immune  tolerance stage,  immune clearance stage and nonactive stage based on the natural history. Realtime PCR and microparticle enzyme immunoassay (MEIA) were used to determine the content of HBV DNA and HBV M in serum samples of highlevel and lowlevel HB

7、sAg patients,  respectively,  then the quantitative results were compared. RESULTS:  There were statistically significant differences between HBV DNA and HBV M (antiHBs,  HBeAg and antiHBe) of lowlevel HBsAg patients in immune tolerance stage(7 cases) and immune clearance stage(4

8、 cases)(t=2.531-9.181,  P<0.01-0.05). HBV DNA lower than 105copies/L was found in 94.1%(128/136) of serum samples in nonactive stage,  and the detection rates of direct PCR and enriching PCR were 10.3%(14/136) and 10.3%(47/136) in lowlevel HBsAg group,  respectively,  and ther

9、e were no correlations between HBV DNA and each of HBV M(P>0.05). In highlevel HBsAg group,  HBV DNA was positively correlated with HBeAg and antiHBe in 25 cases of immune tolerance stage(r=0.744-0.772,  tr=3.858-4.207, P<0.01),  and was only negatively correlated with antiHBs i

10、n 46 cases of immune clearance stage and 46 cases of nonactive stage(r=-0.693-0.598, tr=-4.616-3.936, P<0.01-0.05). CONCLUSION:  Population with lowlevel HBsAg have specific serological characteristics,  which may be correlated with organic immune tolerance and individualized immune res

11、ponses.    Keywordshepatitis B virus marker;  chronic HBV infection;  HBsAg    1  材料和方法    11  標(biāo)本  隨機(jī)收集日常門診、 住院患者及體檢人群慢性HBV感染者低濃度HBsAg血清標(biāo)本147份(低濃度HBsAg組, 以衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供的HBsAg定值質(zhì)控血清5 g/L為標(biāo)準(zhǔn), HBsAg含量<5 g/L定義為低濃度, 經(jīng)ELISA篩選后Abbott Ax

12、sym免疫分析儀測(cè)定低濃度HBsAg含量<72±6.8S/N, 且經(jīng)中和試驗(yàn)確證, 其中HBsAg/HBeAg/抗HBc陽性4例, HBsAg/抗HBe/抗HBc陽性137例, HBsAg/抗HBc陽性6例), 通過隨訪排除了HBV感染早期或恢復(fù)期HBsAg/抗HBs轉(zhuǎn)換階段出現(xiàn)的低濃度HBsAg標(biāo)本, 并且排除HBsAg/抗HBs陽性長(zhǎng)期共存的標(biāo)本9, 根據(jù)自然史7, 8分為免疫耐受期4例、 免疫活動(dòng)期7例、 非活動(dòng)或低/非復(fù)制期(非活動(dòng)期)136例; 采集標(biāo)本前無保肝、 降酶、 免疫調(diào)節(jié)劑和抗病毒藥物應(yīng)用史; 另隨機(jī)收集慢性HBV感染者高濃度HBsAg血清標(biāo)本117份(高濃

13、度HBsAg組, HBsAg含量>79S/N), 其中免疫耐受期25例、 免疫活動(dòng)期46例、 非活動(dòng)期46例;  HBsAg/HBeAg/抗HBc陽性31例, HBsAg/抗HBe/抗HBc陽性86例; 血清標(biāo)本分裝置-70保存。    12  試劑與儀器  ABI 7000型熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI公司); 核酸濃縮液、 HBV DNA熒光定量PCR試劑(上海申友生物工程有限公司); AXSYM自動(dòng)免疫分析儀及其檢測(cè)HBsAg、  抗HBs、  HBeAg、  抗HBe、  抗HBc

14、試劑(美國(guó)Abbott公司)。    13  方法  (1)采用實(shí)時(shí)熒光PCR定量測(cè)定兩組血清標(biāo)本的HBV DNA, 對(duì)未檢測(cè)到HBV DNA的低濃度HBsAg組及高濃度HBsAg組標(biāo)本采用濃縮法: 血清500 L+500 L核酸濃縮液(臨界對(duì)照、 陰性對(duì)照、 陽性對(duì)照與血清標(biāo)本同樣處理, 參比品無需處理), 振蕩混勻4靜置5 min, 15 000 r/min離心5 min棄上清, 加入50 L裂解緩沖液(直接法: 血清50 L+50 L裂解緩沖液, 以下步驟濃縮法與直接法相同), 劇烈振蕩或用槍頭攪碎至無沉淀后短暫離心, 沸水浴10 min

15、, 15 000 r/min離心5 min取上清液備用, 或置-70保存1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)。 (2)采用MEIA定量測(cè)定兩組血清標(biāo)本的HBV M, 具體按試劑說明書進(jìn)行操作。(3)收集兩組血清標(biāo)本的HBV DNA和HBV M定量結(jié)果并以HBV DNA拷貝數(shù)進(jìn)行分組: 即A組HBV DNA為105copies/L以下; B組為106copies/L以此類推, G組為1011copies/L以上。    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:  HBV DNA以拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)平均值表示, 未檢測(cè)到HBV DNA的標(biāo)本其HBV DNA對(duì)數(shù)值直接以0計(jì)算; HBsAg(S/N)、 抗HBs(IU

16、/L)、 HBeAg(S/N)、 抗HBe(S/CO)、 抗HBc(S/CO)均以x±s表示; 均數(shù)之間的差異比較采用t檢驗(yàn), 兩組非活動(dòng)期的HBV DNA檢出率比較采用2檢驗(yàn), 對(duì)HBV DNA與HBV M進(jìn)行相關(guān)性分析, 所有數(shù)據(jù)均使用SPSS12.01軟件完成。    2  結(jié)果    對(duì)低濃度HBsAg組中的免疫耐受期4份和免疫清除期7份血清標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA和HBV M定量測(cè)定發(fā)現(xiàn): 免疫耐受期的HBV DNA處于D和E組, 而免疫清除期的HBV DNA處于BD組, 對(duì)兩者各指標(biāo)的均數(shù)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)HB

17、V DNA對(duì)數(shù)均值(t=3.708, P=0.005)、 抗HBs (t=2.531, P=0.032)、 HBeAg(t=9.181, P=0.002)、 抗HBe(t=7.943,  P=0.004)之間的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 結(jié)果見表1。表1  低濃度HBsAg組免疫耐受期和免疫清除期HBV DNA與HBV M定量結(jié)果    對(duì)低濃度HBsAg組非活動(dòng)期136份血清標(biāo)本的HBV DNA和HBV M定量測(cè)定發(fā)現(xiàn): 有94.1%(128/136)的標(biāo)本HBV DNA處于105copies/L以下, 且直接法PCR檢測(cè)HBV DNA僅有10.3%(14/136)的檢出率, 對(duì)未檢測(cè)到的標(biāo)本采用濃縮法PCR則可以將檢出率提高到10.3%(47/136); 經(jīng)相關(guān)性分析, 低濃度HBsAg組的HBV DNA與HBV M各指標(biāo)之間均不存在相關(guān)性(P>0.05), 結(jié)果見表2。    對(duì)高濃度HBsAg組各分期的HBV DNA和HBV M定量測(cè)定結(jié)果: 免疫耐受期HBV DNA與HBeAg(r=0.744, tr=3.858, P=0.002)、 抗HBe(