透射電鏡使用及常規(guī)樣品觀察

1、電鏡技術實驗報告姓名：專業(yè)：日期：成績：學號：任課老師：實驗名稱： 實驗二：透射電鏡使用及常規(guī)樣品觀察一、 實驗目的：了解透射電子顯微鏡的基本原理、電鏡生物標本的制備方法及電鏡金屬標本的制備方法和觀察。二、 實驗原理：透射電子顯微鏡是以圖象方式提供樣品的檢測結(jié)果，其成像的決定因素是樣品對入射電子的散射，包括彈性散射和非彈性散射兩個過程。薄樣品成像時，未經(jīng)散射的電子構(gòu)成背景，而像的襯度取決于樣品各部分對電子的不同散射特性。采用不同的實驗條件可以得到不同的襯度像。透射電子顯微鏡不僅能顯示樣品顯微組織的形貌，而且可以利用電子衍射效應同樣獲得樣品晶體學信息。透射電鏡的構(gòu)造及與光學顯微鏡比較：三、 儀器

2、與材料：儀器：JEM-2100型透射電子顯微鏡、超薄切片機、恒溫箱、400目銅網(wǎng)等材料：金樣品四、 實驗內(nèi)容：1、了解透射電鏡生物標本超薄切片的制備：取材：用鋒利的刀片切取1mm3目標樣本組織，立即投入固定液中，取材要迅速，以防止細胞缺氧發(fā)生超微結(jié)果變化；固定：把樣本立即投入到0.1mol/L（pH7.4）的二甲砷酸鈉緩沖液配制的2.5%戊二醛中，4固定2小時。然后用0.1mol/L（pH7.4）的二甲砷酸鈉緩沖液洗三次，再放入用相同緩沖液配制的1%鋨酸中固定2小時（4）；脫水；浸透；包埋；聚合：把裝有標本和包埋劑的膠囊置35、45、60溫箱中各24小時，使包埋劑聚合，硬化，由流體變?yōu)榫鶆虻墓?/p>

3、體；超薄切片：一般透射電鏡的切片厚度不能超過100nm，通常超薄切片厚度為50-70nm；染色：將樣本置于枸緣酸鉛染液中染色，1%NaOH溶液洗一次，水洗二次，干燥后觀察。2、透射電鏡標本的制備（由老師完成）：一個金樣品超薄切片2、用透射電鏡觀察金樣品3、對所觀察樣品進行拍照五、 實驗結(jié)果及思考：實驗結(jié)果以照片形式附在最后。思考：1、透射電鏡的制樣目的：要使樣品做的很薄，以利于電子束的穿過。2、什么是超薄切片技術：超薄切片技術包括：取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片及染色。 電鏡樣品采用戊二醛和鋨酸雙重固定，用酒精或丙酮脫水，環(huán)氧樹脂進行包埋。3、銅網(wǎng)的構(gòu)造及其作用：銅網(wǎng)一般直徑為3毫米，上面銃有許多微米大小的孔，在銅網(wǎng)上覆蓋了一層很薄的火棉膠膜并在上面蒸鍍了碳層以增加其膜的強度，被分析樣品就承載在這種支撐膜上。4、SEM照片與TEM照片比較：SEM圖象是三維的，而TEM圖象是平面二維的；SEM圖象的標尺一般比TEM的大近十倍；SEM圖象反應的是樣品表面的信息，而TEM圖象反應的是樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 銅 網(wǎng) 銅 網(wǎng) 網(wǎng) 孔 金 樣 本 金 顆 粒測量金顆粒：一個長度為5.85nm，一個長度為5.03nm 銅網(wǎng)上的膜 金顆粒電子衍射圖測量金顆粒電