淋巴細胞亞群

1、機體免疫狀態(tài)是衡量機體是否患病的重要指標， 目前多采用流式細胞術(shù)來監(jiān)測機體的免疫狀 態(tài)，其中最重要的指標是檢測 T 、 B 和 NK 淋巴細胞的水平。T 細胞主要包括 T 輔助細胞（ Th）和 T 抑制細胞（ Ts ）細胞亞群。 CD3+細 胞代表外周血中總的成熟 T 細胞，理論上應(yīng)約等于 CD4+細胞和 CD8+細胞的總和，但往往出 現(xiàn) CD4+加 CD8+細胞之和大于 CD3+，這是因為 CD4+細胞包括 CD3+/CD4+細胞（真正 Th 細胞） 和 CD3-CD4+細胞（非 Ts 細胞），而后者包括 CD3-CD8+CD16+56細+ 胞（一部分 NK 細胞）和 CD3-CD8+CD1

2、6+56（- 未知細胞）。由此可見，真正的TH細胞是 CD3+CD4細+ 胞，真正 Ts 細胞是 CD3+CD8細+ 胞。尤其當患者 NK細胞明顯增加時，會使 CD4細胞和 CD8細胞的總和遠大 于 CD3+細胞，因此，用三色熒光標記才能分析真正的輔助性T 細胞和抑制性 T 細胞。首先在淋巴細胞中識別出 CD3細胞，然后在 CD3細胞中再區(qū)分 CD4+和 CD8+ 細胞。 NK細胞的表面無 T細胞和 B細胞表面標志，但有 CD16和 CD56等標志，用 CD16+56 抗體能鑒定出 NK細胞（一定是 CD3陰性） ，CD3-CD16+56+細胞才是真正的 NK細胞。 根據(jù)是 否表達 CD8，又

3、可將 NK細胞分為 CD3-CD8+CD16+56細+ 胞（所占比例小，不影響 CD8比例） 和 CD3-CD8-CD16+56+細胞（主要成分）。B 細胞的表面標志是 CD19，理論上 CD3-CD19+細胞才是真正的 B淋巴細胞。 但 CD3+CD19細+ 胞很少，可忽略不計，所以 CD19+細胞就是 B 淋巴細胞。在抗腫瘤效應(yīng)中， CD4和 CD8分別是 T 淋巴細胞的輔助誘導(dǎo)細胞亞群與 抑制 /細胞毒細胞亞群， CD4細胞的主要功能是通過其分泌的淋巴因子，增強和擴大免疫應(yīng) 答過程，輔助誘導(dǎo)其它免疫細胞如殺傷性T細胞， B細胞等共同發(fā)揮抗腫瘤作用， CD4細胞的減少，導(dǎo)致免疫功能低下。

4、CD4/CD8比值是重要的免疫狀態(tài)監(jiān)測指標，其比例的降低與免 疫系統(tǒng)損害的程度相關(guān)。CD4 降低見于惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷癥、艾滋病、應(yīng)用免疫抑制劑者； CD8降低見于自身免疫性疾病或變態(tài)反應(yīng)性疾病；CD4/CD8比值升高見于惡性腫瘤、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)、病毒感染等；CD4/CD8比值降低見于艾滋病 （ 常小于 0.5） 。監(jiān)測器官 移植排斥反應(yīng)時， CD4/CD8比值升高預(yù)示可能發(fā)生排斥反應(yīng)。淋巴細胞擔(dān)負著免疫的主要功能。淋巴細胞亞群的測定有助于了解機體免疫狀況及一些疾病的監(jiān)測。利用 各種單克隆抗體與淋巴細胞表面的抗原結(jié)合，再配合多色熒光染料，通過流式細胞儀檢測分析即可以把各 種不同

5、功能的淋巴亞群區(qū)分開來，進而得到各亞群的相對比例。最常檢測的亞群包括T細胞( CD3)、 B細胞( CD19)、 NK細胞( CD16+56)、輔助性 T 細胞( CD3+CD4)+和抑制性 T細胞( CD3+CD8)+等等。(1) 應(yīng)用 CD3/CD19區(qū)分 T 淋巴細胞和 B 淋巴細胞CD3是 T 細胞的特異性抗原， CD19則用來識別 B細胞因此應(yīng)用 CD3/CD19雙標試劑即可以區(qū)分和鑒定 T 淋 巴細胞和 B 淋巴細胞亞群； CD3、CD19陽性表達為獨立的陽性細胞群體。如出現(xiàn)雙陽性細胞均為假象。這 樣就可不用同型對照來設(shè)定陰性或陽性界線。此外，此檢測還會出現(xiàn)雙陰性群體，這些都是NK

6、細胞，這些細胞也提供了雙陰性群體的對照。(2) 應(yīng)用 CD3/CD4來鑒定 CD4+T細胞首先用 CD3來區(qū)分全部 T細胞而CD3/CD4雙陽性細胞為真正的輔助 /誘導(dǎo)性 T細胞，這是 HIV病毒感染的 主要對象 ;CD3-/CD4+細胞群是由單核細胞組成，這些細胞相對于CD4+和 T 細胞來說弱表達 CD4，在光散射參數(shù)的位置分布也較廣。 所以 CD3/CD4抗體組合能夠完全把 CD4陽性輔助 / 誘導(dǎo)性 T細胞區(qū)分開。 另外，應(yīng) 用適當?shù)碾p色組合如 CD4與 CD29,CD4與 CD45RA也, 可以測定 T 輔助細胞的的亞群。如 CD4+2H4(CD 45RA)+ 細胞是 Ts的誘導(dǎo)細胞

7、 ;CD4+ 4B4 (CD29)+細胞 Th的誘導(dǎo)細胞。同理 ,?利用 CD8+CD45RA和CD8+CD29+ S6F1 可測定 T 抑制細胞的亞群。 T輔助細胞還可分成 Th1、 Th2兩個亞群，同時標記細胞內(nèi)細胞因子 IFN- 和 IL-4 ，可區(qū)分 Th1 細胞( CD4+/IFN- +)和 Th2 細胞( CD4+/IL-4+ )。(3) 應(yīng)用 CD3/CD8鑒定 CD8+T淋巴細胞CD8的表達不只限于細胞毒性 T 細胞，此抗原在部分的 NK細胞上也能檢測到。所以利用 CD3抗體才能把該 細胞亞群分開。若采用三色測定可給出更為準確的各亞群的情況 :如真正的 T輔助細胞應(yīng)是 CD3+

8、 CD4+CD8-真, 正的 T抑制 細胞應(yīng)是 CD3+CD4- CD8+,單標 CD8+細胞中不僅有 T抑制細胞 ,還含有 30%左右的 NK細胞; 而 CD3+CD4-CD8- 細胞群是 T細胞,此類細胞與感染有關(guān) CD3+CD4+ CD8細- 胞+CD3+CD4-CD8細+胞+CD3+CD4-CD8細- 胞 +CD3+CD4+CD8細+胞=CD3+細胞。(4) 自然殺傷細胞( NK)的檢測CD16(FcR ) 表達于大多數(shù) NK細胞上，但也表達于中性粒細胞，此抗原NK細胞的表達比較弱，并在 NK細胞活化時丟失； CD56表達于大多數(shù) NK細胞上，也表達于一些 T 淋巴細胞，與 CD3聯(lián)合

9、使用可以區(qū)分 CD3+/CD56+T淋巴細胞和 CD3-/CD56+NK細胞。聯(lián)合使用 3 種抗體最完全地鑒定所有的 NK細胞。 NK細胞 或表達 CD16，或表達 CD56，但它們不表達 CD3。CD16和 CD56聯(lián)合使用，根據(jù)熒光強度可將 NK細胞從雙陰 性細胞中區(qū)分出來。這樣運用該試劑組合， NK細胞可形成獨立的群體與其它細胞相區(qū)分。圖1 流式分析細胞亞群外周血是臨床檢驗中的重要標本。 FCM分析外周白細胞的主要目的是了解各種白細胞的數(shù) 目與分群情況。以下給出常用細胞亞群的正常范圍供參考 , 請注意同一 CD中有多種克隆的 McAb,同一 CD中 不同 McAb?所測出的數(shù)值不同 ,

10、每個實驗室應(yīng)測定自己實驗室的正常數(shù)值：表1 人外周血各細胞亞群表面抗原和流式檢測的正常參考值細胞表面抗原細胞名稱正常參考值（ %）T 細胞抗原CD2總 T 細胞62.5-89.0CD3成熟 T 細胞61.1-77.0CD4T 輔助 / 誘導(dǎo)性細胞亞群15.8-41.6CD5T 細胞（ B 細胞亞群）69.5-88.0CD8T 細胞 / 細胞毒性細胞亞群18.1-29.6CD28T細胞受體共刺激分子39.5-6408CD8+/CD28+細胞毒性 T 細胞8.6-15.5CD8+/CD28-T抑制性細胞9.9-24.8CD3+/HLA-DR-靜止 T 細胞55.3-77.1B細胞抗原CD19全部 B 細胞7.3-18.2CD20全部 B 細胞7.3-18.2NK細胞抗原CD3-/CD（16+56）+NK細胞8.1-25.6造血干細胞、祖細胞CD33粒細胞前體21.3-30.4CD34多能干細胞0.1-0.5活化細胞表面抗原CD3+/HLA-DR+活化 T 細胞1.2-5.8CD3-/HLA-DR+活化 B 細