癌痛消顆粒醇提工藝的正交實驗研究

1、癌痛消顆粒醇提工藝的正交實驗研究(1)    【摘要】  目的優(yōu)化癌痛消顆粒醇提工藝。方法采用正交設(shè)計對癌痛消顆粒醇提工藝的提取方法進行優(yōu)化，以不同工藝所提總浸出物、總黃酮及野黃芩苷質(zhì)量分數(shù)作為綜合評價指標。結(jié)果最佳工藝為用80%乙醇回流提取3次，每次加80乙醇10倍/次，回流1.5 h/次。結(jié)論該工藝條件作為癌痛消顆粒醇提工藝是合理的。 【關(guān)鍵詞】  癌痛消顆粒 總黃酮 野黃芩苷 醇提工藝 正交實驗    癌痛消顆粒的處方源于廣西中醫(yī)學院韋艾凌博士十多年的專病特色方癌痛消散，由白花蛇舌草、半枝蓮、三棱、

2、烏藥、元胡、香附、枳殼、黃芪、黨參、甘草等藥組成，具有消積化瘀、清熱解毒、行氣止痛、健脾益氣的功效，能明顯改善肝癌早中期患者的臨床表現(xiàn)如肝區(qū)疼痛、腹脹、納呆、神疲乏力、舌瘀暗脈弦澀以及并發(fā)癥腹水等，并且還能改善患者的生存質(zhì)量，顯示出了良好的抗癌療效前景。動物實驗研究顯示,癌痛消膠囊對小鼠H22移植性肝癌有抑瘤作用，抑制腫瘤生長的機理可能與下調(diào)VEGF，p53和p21ras基因表達的水平，誘導肝癌細胞凋亡有關(guān)1，2。為了使該方劑能夠較方便的應(yīng)用于臨床，根據(jù)各藥味所處的地位和藥物成分的特性，擬將癌痛消散各味藥用合適方法提取后制成顆粒。本實驗通過正交實驗探討癌痛消顆粒醇提工藝，以尋找最佳的提取工藝條

3、件。1   儀器與材料    日本島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀，威瑪龍色譜工作站；島津SPD-10Avp紫外檢測器，METTLERAM100電子天平。    甲醇為色譜純；水為超純水（自制）；其他試劑為分析純。    野黃芩苷對照品（110842-200605）及蘆丁對照品（760706）均購自中國藥品生物制品檢定所；各藥材均購自南寧市醫(yī)藥有限公司，經(jīng)廣西中醫(yī)學院鑒定教研室韋松基教授鑒定。2  方法與結(jié)果2.1  因素水平的確定根據(jù)藥物的特性并結(jié)合生產(chǎn)實際

4、，醇提工藝選取了對提取影響較大的乙醇濃度、加醇量、回流次數(shù)及回流時間作為考察因素，選用L9(34)正交實驗表進行重復實驗（n=2）。結(jié)果見表1。表1   因素與水平（略）2.2  指標的確定考慮到復方多成分作用的特點及方中君藥成分簇群的生物特性，選擇總浸出物、總黃酮及野黃芩苷作為綜合評價指標。見表2。2.3  總浸出物的測定3將藥材適當?shù)姆鬯?，按處方的比例要求精密稱取白花蛇舌草、半枝蓮藥材共3 g 9份,按正交表1選擇的條件回流提取,合并各份提取液，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，水浴鍋上水浴蒸干，105干燥3 h，置干燥器中冷卻0.5 h，迅速精密稱定重量。浸

5、膏得率()=浸膏重/樣品重×100。結(jié)果見表2。2.4  總黃酮的測定3，42.4.1  供試品溶液的制備按處方比例精密稱取白花蛇舌草、半枝蓮等藥材共約5.1 g 9份，分別按各組的工藝要求提取后,將提取液濃縮至30 ml,加石油醚30 ml萃取3次,分取水層并蒸干,殘渣加甲醇80 ml分多次溶解后過濾,濾液移至100 ml量瓶中,另用甲醇20 ml分數(shù)次在分液漏斗中洗滌并過濾殘渣,洗液并入量瓶中,加甲醇至刻度，作為供試品溶液。2.4.2  對照品溶液的制備精密稱取在120減壓干燥至恒重的蘆丁對照品50 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml至水浴上

6、微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每毫升含無水蘆丁0.2 mg）。2.4.3  測定精密量取對照品1，2，3，4，5，與6 ml，分別置25 ml量瓶中，加水6 ml，加5%亞硝酸鈉溶液1 ml使混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻放置6 min，加氫氧化鈉試液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，照分光光度法，在500 nm的波長處測定收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。另精密量取樣品1.5 ml，置25 ml量瓶中，照標準曲線制備方法，自“加水6 ml”起依法測定吸

7、收度，從曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量(mg)，計算，即得。結(jié)果見表2。本篇論文由網(wǎng)友投稿，讀書人只給大家提供一個交流平臺，請大家參考，如有版權(quán)問題請聯(lián)系我們盡快處理。2.5  野黃芩苷的測定52.5.1  色譜條件色譜柱為Kromasil C18 柱（250 mm ×4.6 mm，5 m），流動相為甲醇-3%乙酸（3070），柱溫為室溫，檢測波長335 nm，流速1.0 ml/min，進樣量10 l。2.5.2  對照品溶液的制備精密稱定野黃芩苷對照品2.61 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇完全溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用（每毫升中含野黃芩苷0.1

8、04 4 mg）。2.5.3  供試品溶液的制備 取“2.4.1”項下樣品，以微孔濾膜過濾，為供試品。2.5.4   測定精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 l，注入HPLC色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算野黃芩苷的量。結(jié)果見表2。表2  樣品中各指標的測定結(jié)果（略）2.6  公式評分在正交實驗結(jié)果的總體評價中，以野黃芩苷含量和總黃酮含量為主 (各占 50和30%)，浸膏得率為輔 (占20)。再按正交實驗分析法中多指標分析的公式法，對結(jié)果進行計算得到公式評分值，以此對評價指標進行綜合評判及方差分析，最佳提取工藝是 A3B3C3D2 。結(jié)果見表

9、3。表3  正交實驗結(jié)果和分析（略）2.7  正交設(shè)計實驗結(jié)果分析按方差分析理論得方差分析結(jié)果見表4。表4表明乙醇濃度、乙醇量及回流次數(shù)有極顯著差異?；亓鲿r間沒有顯著差異。表4  方差分析（略）2.8  驗證實驗為了進一步驗證正交實驗結(jié)果的準確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A3B3C3D2，重復安排3批試驗。結(jié)果見表5。表5  驗證實驗（略）    驗證結(jié)果表明，按水提工藝A3B3C3D2所提得的浸膏得率、總黃酮含量以及野黃芩苷含量都接近正交實驗中的最大值，表明此工藝穩(wěn)定，具有重復性和可操作性。3

10、60; 討論    采用正交設(shè)計，確定了醇提工藝的最佳條件，即：稱取醇提取部分藥材，加入10倍量80乙醇回流提取3次，回流1.5 h/次。 正交結(jié)果分析， 65乙醇和 80乙醇的提取結(jié)果已相當接近，但使用65乙醇提取浸膏得率雖高，野黃芩苷和黃酮含量并未無顯著提高，而且過濾困難，說明浸膏中無效成分較多，而80乙醇提取浸膏中野黃芩苷及黃酮含量高、雜質(zhì)少、操作方便；溶劑量及提取時間對各有效成分提取影響顯著,提取時間隨著時間增加,有效成分反而減少,故將提取時間定在1.5 h。綜合考慮提取條件為：用 10倍量的80乙醇,回流提取3次,為1.5 h/次?！緟⒖嘉墨I】  1韋艾凌,唐健.癌痛消膠囊調(diào)節(jié)小鼠荷H22移植性肝癌細胞VEGF表達的實驗研究J.廣西中醫(yī)藥,2004,27(4):47.2王慶高, 韋艾凌,徐志新.癌痛消膠囊調(diào)節(jié)小鼠荷H22移植性肝癌細胞VEGF,p53和p21ras表達的實驗研究J.廣西中醫(yī)藥,2005,28(