橘黃酮對小鼠抗氧化作用的研究

1、橘黃酮對小鼠抗氧化作用的研究【摘要】目的探討金橘黃酮的抗氧化效果。方法以小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，研究不同產(chǎn)地與不同劑量金橘黃酮對小鼠血清SOD、GSH-Px活性、MDA含量和小鼠平均壽命的影響。結(jié)果與對照組相比，金橘黃酮80 mg/kgbw劑量時，兩地產(chǎn)的金橘黃酮對小鼠血清SOD活性、MDA含量和小鼠平均壽命的影響具有顯著性（P 0.05），瀏陽組可顯著提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05），遂川組可極顯著提高小鼠血清GSH-Px活性（P 0.01）；金橘黃酮160 mg/kgbw劑量對全部試驗(yàn)參數(shù)的影響具有極顯著性（P 0.01）。結(jié)論金橘黃酮有明顯抗氧化作用。 【關(guān)鍵詞】 金橘 黃酮 抗氧化E

2、ffect of Kumquat Flavonoids on the Anti-oxidation in MiceLI Jilie, CUI Peiwu, WU Yaohui, ZENG Chaozhen, LIU Zongmin（Central South University of Forestrial Technology , Changsha 410004 , China）Abstract：ObjectiveTo study the antioxidant effect of kumquat flavonoids. MethodsUsing mouse as the experimen

3、tal object, we studied the effect of kumquat flavonoids from different producing area on SOD, GSH-Px activities and MDA content in mouse serum with different doses, and also the effect on the average life-span of mice was studied.ResultsCompared with the control group, both of Hunan Liuyang kumquat

4、flavonoid and Jiangxi Suichuan kumquat flavonoid could obviously improve SOD activity and MDA content in mouse serum (PKey words：Kumquat； Flavonoids； Anti-oxidation 金橘，系蕓香科柑橘屬常綠小喬木，是熱帶、亞熱帶常綠果樹，在我國長江以南地區(qū)廣泛種植，果實(shí)富含揮發(fā)油、黃酮等生物活性成分，具有抑菌、降脂及防治心腦血管疾病等多種功效13；中國藥植圖鑒也認(rèn)為金橘可“治胸脘痞悶作痛，心悸亢進(jìn)，飲食不佳百日咳”，可見金橘是一種具有很大開發(fā)潛力藥

5、用保健資源。近年來對植物類黃酮藥用保健功能研究是一個熱點(diǎn)，對柑橘類黃酮4，5、大豆異黃酮6、沙棘葉黃酮7、銀杏黃酮8等藥用機(jī)理方面的相關(guān)報(bào)道較多，但是對金橘黃酮的藥理研究相對較少，在動物體內(nèi)抗氧化的研究尚末見報(bào)道。為了更好地開發(fā)利用金橘資源，本實(shí)驗(yàn)以湖南瀏陽和江西遂川金橘鮮果為原料，提取黃酮作為受試物，以小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，測定小鼠血清超氧化歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione perioxidase, GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量和小鼠平均壽命，探討金橘黃酮在小鼠體內(nèi)的抗氧化作用

6、，旨在為金橘的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。1 材料與儀器1.1 藥物1金橘于2005-11采自湖南瀏陽和江西遂川，品種為金彈Fortunella crassifolia Swingle。取新鮮金橘皮，進(jìn)行真空冷凍干燥，將干燥后的金橘皮粉碎過40目篩，用石油醚脫脂回流2 h，脫脂后按金橘粉酒精（80%）=120（W/W）物料比，用MDS-6壓力自控密閉微波萃取系統(tǒng)60 萃取30 min，過濾，濾液用大孔樹脂吸附，洗脫液經(jīng)真空濃縮即為金橘黃酮提取物，測定總黃酮含量分別為32.58%和33.82%，使用時配制成所需濃度。1.2 動物 單一性別昆明種20月齡小鼠，體重為4050 g ，湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動

7、物中心購買，實(shí)驗(yàn)動物合格房號為026號。1.3 藥品及儀器 超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。壓力自控密閉微波萃取系統(tǒng)（MDS-6，上海新儀微波輔助化學(xué)科技有限公司），分光光度計(jì)(7200，尤尼柯儀器有限公司)。2 方法2.1 對小鼠SOD，GSH-Px，MDA影響的實(shí)驗(yàn)9將小鼠按每組10只分為空白對照組，瀏陽金橘黃酮高、中、低劑量組和遂川金橘黃酮高、中、低劑量組。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境7 d，自正式實(shí)驗(yàn)開始各組動物依然以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。空白對照組灌胃以等量的蒸餾水，其余各組灌胃以不同劑量的金橘黃酮提

8、物溶液，灌胃量為0.1 ml/10gbw，灌胃30 d后，禁食12 h，摘眼球取空腹血，4 000 r/min離心15 min，分離血清，測定SOD、GSH-Px活性及MDA含量。GSH-Px活性以分光光度比色法進(jìn)行常規(guī)測定，SOD活性采用NTB法測定，MDA含量采用改良的TBA微量法測定。2.2 對小鼠平均壽命影響的實(shí)驗(yàn)將小鼠按每組20只分組，分組情況同“2.1”項(xiàng)下。各組動物依然以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。空白對照組灌胃以等量的蒸餾水，其余各組每天灌胃不同劑量的金橘黃酮溶液，灌胃量為0.1 ml/10 gbw，記錄小鼠自然死亡的時間。2.3 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示。正態(tài)分布的兩組的均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，

9、統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件處理，顯著性界值P=0.05。3 結(jié)果3.1 金橘黃酮對小鼠血清SOD的影響SOD是生物體內(nèi)的一種重要的酶類自由基清除劑，具有維持活性氧代謝平衡，保護(hù)膜結(jié)構(gòu)的功能?？瞻讓φ战M中SOD為90.26 U/ml，經(jīng)過灌胃金橘黃酮溶液30 d后，與對照組相比，各組小鼠血清SOD活性均有所升高，與劑量呈正相關(guān)的關(guān)系。其中，瀏陽金橘低、中、高劑量組分別升高1.5%，5.8%，12.2%；遂川金橘低、中、高劑量組分別升高了3.6%，9.3%，14.7%。經(jīng)t檢驗(yàn)，當(dāng)攝入量為80 mg/kgbw時，兩產(chǎn)地金橘黃酮可顯著提高小鼠血清SOD活性（P 0.01）。這說明金橘黃酮可在一

10、定程度上提高機(jī)體的抗氧化能力。見表1。表1 金橘黃酮對小鼠SOD活性的影響（略）與空白對照組比較，* P 0.01，* P 0.05；n=103.2 金橘黃酮對小鼠血清GSH-Px的影響GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，能使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，促進(jìn)H2O2的分解，減輕細(xì)胞膜多不飽和脂肪酸的過氧化作用，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能不受過氧化物的干擾及損害，GSH-Px酶的活性高低可影響小鼠體內(nèi)抗氧化能力的強(qiáng)弱。金橘黃酮可以提高血清GSH-Px活性，與金橘黃酮的劑量呈正相關(guān)的關(guān)系。與空白對照組相比，瀏陽金橘低、中、高劑量組分別提高了3.99%，11.59%，22.

11、91 %；遂川金橘低、中、高3個劑量組分別提高了7.12%，19.08%，22.91%。經(jīng)t檢驗(yàn)，瀏陽中劑量組可顯著提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05），高劑量組可極顯著提高小鼠血清GSH-Px活性（P0.05）。見表2。表2 金橘黃酮對小鼠GSH-Px 活性的影響（略）與空白對照組比較，* P 0.01，* P 0.05；n=103.3 金橘黃酮對小鼠血清MDA的影響MDA是超氧自由基作用生物體后引起膜系統(tǒng)脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，它能與蛋白質(zhì)氨基酸殘基或核酸反應(yīng)生成Shiff堿，降低膜的穩(wěn)定性，促進(jìn)膜的滲漏；MDA會降低SOD的活性，加劇膜脂質(zhì)過氧化作用，其含量的高低是衡量生物體氧化衰老程度

12、的一個指標(biāo)。金橘黃酮可以降低血清MDA的含量，與金橘黃酮的劑量呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系，這和上面金橘黃酮可以提高SOD含量的試驗(yàn)結(jié)果相吻合，進(jìn)一步說明金橘黃酮可以起到抗氧化作用。和對照組相比，瀏陽金橘低、中、高劑量組分別降低了5.8%，9.4%，17.5%；遂川金橘低、中、高3個劑量組分別下降了8.4%，11.9%，20.2%。經(jīng)t檢驗(yàn)，兩個中劑量組可顯著降低小鼠血清MDA值（P 0.05），兩個高劑量組可極顯著降低小鼠血清MDA值（P 0.01）。這說明金橘黃酮在一定程度上具有減緩小鼠的膜脂質(zhì)過氧化進(jìn)程的作用。見表3。表3 金橘黃酮對小鼠MDA含量的影響（略）與空白對照組比較，* P 0.01，* P

13、 0.05；n=103.4 金橘黃酮對小鼠平均壽命的影響在灌胃金橘黃酮溶液30 d后，各組小鼠平均壽命均有不同程度的延長?？瞻讓φ战M平均壽命為660 d，遂川金橘組小鼠的平均壽命分別為：730，715，690 d，瀏陽金橘組小鼠的平均壽命分別為：725 ，706，680 d，與空白對照組相比，兩中劑量組可顯著延長小鼠平均壽命（P 0.05），兩高劑量組可極顯著延長小鼠平均壽命（P 0.01）。這主要是因?yàn)榻痖冱S酮具有抗氧化性，減少自由基對機(jī)體的損害，從而起到了延長壽命的作用。見表4。表4 金橘黃酮對小鼠平均壽命的影響（略）與空白對照組比較，* P 0.01，* P 0.05；n=204 結(jié)論

14、衰老是機(jī)體在細(xì)胞水平上受自由基損害的結(jié)果，是自由基干擾細(xì)胞的新陳代謝過程。血清中活性氧自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化而產(chǎn)生大量的MDA；SOD、GSH-Px是體內(nèi)生物防護(hù)體系中最重要的抗氧化酶，是體內(nèi)自由基清除劑，在機(jī)體抗自由基損傷中起著重要作用。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金橘黃酮可以提高小鼠血清SOD、GSH-Px活性，延長小鼠的平均壽命，這說明金橘黃酮可直接淬滅自由基，清除自由基對機(jī)體的損害，從而恢復(fù)老年機(jī)體自由基代謝的平衡。它還可能絡(luò)合有催化作用的金屬離子，抑制自由基形成，減少自由基對不飽和脂肪酸的氧化，從而降低血清MDA含量。金橘黃酮還可能減少自由基對機(jī)體的蛋白質(zhì)和DNA等的損害和對機(jī)體新陳代謝的干擾，

15、并通過抗氧化作用保護(hù)線粒體內(nèi)過氧化氫酶的活性，起到了延長小鼠平均壽命的作用。 實(shí)驗(yàn)藥物金橘提取物中黃酮含量只有33.82%，還有很多的未知成分，除黃酮類起抗氧化作用外，究竟金橘提取物中還有哪些成分在起作用，有待于進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 黎繼烈，李忠海，鐘海雁，等金橘黃酮對小鼠血糖的影響J中藥藥理與臨床，2007，3：56.2 黎繼烈，王 衛(wèi)，曾超珍，等. 金橘黃酮對肥胖型高血脂大鼠的降血脂功能研究J.中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008，28（5）：61.3 黎繼烈，劉宗敏，鐘海雁，等金橘總黃酮對小鼠胃腸吸收功能的影響J中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，27（2）：50.4 Sandra Stojanovic, Helmut Sprinz. Efficiency and Mechanism of the Antioxidant Action of trans-Resveratrol and its Analogues in theRadical Liposome Oxidation J. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2001，391（1）：79.5 潘一峰，瞿偉菁越柑果渣中黃酮類成分抗氧化活性的研