下載本文檔
版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、 ?;撬釋?duì)大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí) 細(xì)胞凋亡的影響 摘要目的:研究?;撬?taurine, Tau)對(duì)腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響。方法:建立大鼠全腦缺血再灌注模型,使用DNA片段原位末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotigyl transferase-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)和流式細(xì)胞儀(flow cytometry, FCM)觀察了Tau治療后細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果:海馬及
2、頂葉皮層內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)顯著降低,但在1 mg及2 mg劑量組間無(wú)顯著差異。結(jié)論:Tau對(duì)腦缺血再灌注損傷中神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用可能部分由于降低細(xì)胞凋亡的發(fā)生。主題詞腦;局部缺血;?;撬?The effect of taurine on apoptosis during ischemia-reperfusion injury in ratsZHAO ShiFu,CAI Wen-Qin1Department of Neurology, Xin Qiao Hospital, Third Military Medical College, Chongqing(400037)1 Department of
3、Histology and Embryology, Thrid Military Medical CollegeAbstractAIM and METHOD:In order to recognize the effect of taurine on apoptosis during ischemia-reperfusion injury, the model of rat globle brain ischemia-reperfusion injury was made, the changes of apoptotic cells were observed after taurine t
4、reatment by using methods of terminal deoxynucleotigyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) and flow cytometry(FCM).RESULTS:The number of apoptotic cells decreased significantly in hippocampus and parietal cortex, but there were significant difference between 1 mg and 2 mg dose group.
5、 CONCLUSION:The neural protective effect of taurine against ischemia-reperfusion injury may be partially due to reducing occurrence of apoptosis.MeSHBrain; Ischemia; Taurine近年的研究提示細(xì)胞凋亡是腦缺血損傷的重要形式1。牛磺酸(taurine, Tau)是人體內(nèi)含量較高的自由氨基酸,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有重要生理功能,是一種抑制性作用的氨基酸2。研究發(fā)現(xiàn)Tau對(duì)缺血、驚厥等引起的神經(jīng)元損害具有對(duì)抗作用2,3,這種抗損害作用是
6、通過(guò)對(duì)抗興奮性氨基酸、過(guò)氧化物和調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平實(shí)現(xiàn)的,而興奮性氨基酸、過(guò)氧化物和細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高與細(xì)胞凋亡(apoptosis)的發(fā)生有關(guān)4,5。因此,Tau可能對(duì)缺血后細(xì)胞凋亡有一定影響。本研究通過(guò)建立全腦缺血模型,觀察Tau治療后細(xì)胞凋亡的變化,為腦缺血的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法1.大鼠腦缺血?jiǎng)游锬P停篧istar大鼠,體重250300 g,0.3%戊巴比妥鈉(ip)麻醉后,固定于立體定位儀上,使用四血管阻塞模型,先在第1、2頸椎水平閉合雙側(cè)椎動(dòng)脈,分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈。次日在乙醚麻醉下,用微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈,缺血30 min,松開(kāi)微動(dòng)脈夾,進(jìn)行再灌流,達(dá)到再灌流時(shí)間后取材
7、。2.?;撬峤o藥方式及分組:采用腦室內(nèi)給藥,將大鼠固定于立體定位儀,顱頂保持在同一水平面,以前囟為零點(diǎn),向后0.8 mm,外側(cè)1.5 mm,深4.5 mm,進(jìn)入腦室(右)后推藥時(shí)感阻力小。以1 mg及2 mg兩個(gè)劑量組,分別給以10%?;撬?Sigma)10 L和20 L,每組給藥兩次,于缺血前給1次,缺血再灌流12 h再給1次,對(duì)照組用相同體積的生理鹽水,每組5只,用于FCM測(cè)定;另外每組4只,用于TUNEL染色。3.TUNEL染色:使用德國(guó)BM公司原位末端標(biāo)記盒,原理是應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT) 將熒光素標(biāo)記dUTP連接于DNA片段3-OH末端。切片經(jīng)蛋白酶K(20 mg/L,Si
8、gma)室溫下消化15 min,再用甲醇配制的0.3%H2O2處理30 min,然后浸于TUNEL反應(yīng)混合物中,37 60 min,用TB緩沖液(300 mmol/L NaCl, 30 mmol/L sodium citrate)室溫下孵育15 min終止反應(yīng),再用連有辣根過(guò)氧化物酶(POD)的抗熒光素抗體于濕盒中37孵育30 min,DAB顯色。陰性對(duì)照采用標(biāo)記液(無(wú)TdT)代替TUNEL反應(yīng)混合物。4.FCM測(cè)定:于缺血再灌流24 h斷頭取腦,取給藥同側(cè)海馬分離單細(xì)胞6,固定后按TUNEL方法染色,F(xiàn)CM測(cè)定。5.像處理:使用德國(guó)Leica公司MD20像分析系統(tǒng),測(cè)定單位面積(mm2)陽(yáng)性
9、細(xì)胞核數(shù)。結(jié)果1.FCM測(cè)定:通過(guò)缺血前給予1 mg和2 mg兩種劑量牛磺酸,于缺血再灌流24 h分離海馬單細(xì)胞,經(jīng)TUNEL熒光染色,對(duì)凋亡細(xì)胞數(shù)量、百分比及平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定,生理鹽水對(duì)照組,凋亡細(xì)胞數(shù)為12.36%,1 mg治療組為8.93%,2 mg治療組為8.33%,治療組與生理鹽水對(duì)照組間有顯著差別(P0.05),但兩種劑量之間無(wú)顯著差別(見(jiàn)表1)。表1牛磺酸對(duì)腦缺血再灌流損傷中海馬內(nèi)凋亡細(xì)胞的影響Tab 1 The effect of taurine on apoptosis in hippocampus during ischemia-reperfusion injuryCo
10、ntrol 1 mg2 mgNumber of apop1236±108893±251*833±143*%12.36±1.088.93±2.51*8.33±1.43*Fluo-density26.30±2.3425.00±2.5823.50±1.52 n=5,*P0.05,vs control2.TUNEL染色:在生理鹽水對(duì)照組,缺血再灌流24 h,海馬CA1區(qū)及頂葉皮層可見(jiàn)較多陽(yáng)性細(xì)胞核,表現(xiàn)為核固縮,陽(yáng)性信號(hào)局限在核內(nèi),染色質(zhì)凝集,邊聚,形成半月?tīng)罨颦h(huán)狀
11、。1 mg及2 mg治療組,海馬及頂葉皮層陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少。陽(yáng)性細(xì)胞核的計(jì)數(shù)顯示Tau治療組陽(yáng)性細(xì)胞核數(shù)較對(duì)照組明顯減少(見(jiàn)表2),而兩組之間無(wú)顯著差別。表2牛磺酸治療后缺血再灌流24 h腦內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)的變化Tab 2 The changes of the number of apoptotic cells in brain at 24hof ischemia-reperfusion after taurine treatment (<"g393 (162 bytes)" src="/med/cano/201003/20100310191118172&qu
12、ot; 33 15>)RegionsControl1mg2mgCA118.43±2.0112.63±2.69*11.56±3.01*PC17.50±1.7611.69±2.95*10.44±2.10* n=4;CA1:the sector of hippocampus; PC:parietal cortex; *P0.05,*P0.01, vs control討論近年,研究逐步證實(shí)細(xì)胞凋亡是腦缺血再灌流損傷的重要形式之一,特別在遲發(fā)性神經(jīng)元損害階段1。在腦缺血后?;撬岷吭龈?,可對(duì)
13、抗谷氨酸(glutamate,Glu)等興奮性氨基酸及Ca2+升高引起的神經(jīng)元損傷3,7。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在腦缺血再灌流中,給予Tau后,海馬CA1區(qū)及頂葉皮層內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著降低,1 mg及2 mg治療組,頂葉皮層每平方毫米凋亡細(xì)胞數(shù)分別降至11.69及10.44個(gè)。FCM測(cè)定也顯示海馬內(nèi)凋亡細(xì)胞顯著下降,反映Tau對(duì)腦缺血再灌流細(xì)胞凋亡的發(fā)生具有一定保護(hù)作用。以前對(duì)腦缺血后?;撬嶙兓难芯刻崾?,腦缺血后?;撬岷靠焖偕仙?,隨腦血流的增多,?;撬岷肯陆?,但再灌流4 h后其含量又上升,這種變化與缺血后神經(jīng)元的損傷的發(fā)生一致7。?;撬岬姆植荚谀X內(nèi)不同區(qū)域差別較大,主要分布于細(xì)胞內(nèi),使用微灌注技術(shù)
14、測(cè)得細(xì)胞外液濃度,在缺血后含量可數(shù)百倍增加8,由于?;撬犭y以通過(guò)血腦屏障,本實(shí)驗(yàn)從腦室內(nèi)給藥,根據(jù)生理時(shí)含量及缺血后變化確定給予1 mg和2 mg兩種劑量,觀察細(xì)胞凋亡的發(fā)生變化,1 mg和2 mg治療組與對(duì)照組比較均有顯著性降低,而兩種劑量之間無(wú)顯著性區(qū)別??赡芤?yàn)閷?shí)驗(yàn)中使用1 mg和2 mg,相對(duì)腦內(nèi)水平,均為大劑量,反映?;撬嵩趧┝窟_(dá)到一定程度后,再增加劑量,其作用上升不明顯。在培養(yǎng)細(xì)胞的研究中有類似結(jié)論,楊忠等9使用0.5-10 mmol/L不同濃度牛磺酸,觀察其對(duì)Glu和使君子酸(quisqualate,Qu)導(dǎo)致的培養(yǎng)小腦神經(jīng)元死亡的作用時(shí),發(fā)現(xiàn)2.0 mmol/L時(shí)效果最佳,再增
15、加濃度其作用效果不再增強(qiáng)。體內(nèi)牛磺酸分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉及心臟內(nèi),具有抑制神經(jīng)元過(guò)度興奮、抗驚厥和增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血的耐受性等廣泛的生理作用2,3。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,給予外源性Tau能降低腦缺血再灌注中細(xì)胞凋亡的發(fā)生,因此,外源Tau對(duì)防治腦缺血再灌流損傷是有益的。?;撬峤档腿毖俟嗔髦屑?xì)胞凋亡的機(jī)制尚未得到認(rèn)識(shí),可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+、對(duì)抗興奮性氨基酸、超氧化物等作用有關(guān)。作者單位:趙士福第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(重慶 630037)蔡文琴第三軍醫(yī)大學(xué)組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室參考文獻(xiàn)1Nitatori T, Sato N, Waguri S, et al. Delayed neurona
16、l death in the CA1 pyramidal cell layer of the gerbil hippocampus following transient ischemia is apoptosis. J Neurosci, 1995, 15:1001.2Huxtable RJ. Physiological action of taurine. Physiol Rev, 1992, 72:101.3溫書(shū)寶,張敏.牛磺酸的細(xì)胞保護(hù)作用.中國(guó)藥學(xué)雜志,1995,30:451.4趙士福,蔡文琴.神經(jīng)元缺血性損傷中的細(xì)胞程序性死亡.國(guó)外醫(yī)學(xué)腦血管病分冊(cè),1996,4:169.5Chan
17、 PH. Role of oxidants in ischemic brain damage. Stroke, 1996,27:1124.6王傳松,蔡文琴,李才安等.流式細(xì)胞計(jì)用于大鼠腦發(fā)育研究.中國(guó)神經(jīng)科學(xué)雜志,1996,3:125.7Matsumoto K, Lo EH, Pierce AR, et al. Secondary elevation of extracellular neurotransmitter amino acids in the reperfusion phase following focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab, 1996, 16:114.8Shibanoki S, Kogure M, Sugahara M, et al. Effect of
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024項(xiàng)目代建合同形式工程
- 2024私人商用房借貸合同
- 環(huán)境檢測(cè)與評(píng)估實(shí)踐作業(yè)指導(dǎo)書(shū)
- 環(huán)保行業(yè)項(xiàng)目立項(xiàng)指南
- 承包商入廠安全培訓(xùn)試題(全套)
- 汽車租賃公司合同
- 智能安防設(shè)備研發(fā)與生產(chǎn)合同
- 年股權(quán)轉(zhuǎn)讓協(xié)議
- 單位向個(gè)人借款合同
- 農(nóng)場(chǎng)房屋買賣合同
- 2024成都中考數(shù)學(xué)二輪重點(diǎn)專題研究 實(shí)數(shù)的相關(guān)概念(課件)
- 老舊小區(qū)加裝電梯工程施工方案
- 2024開(kāi)荒保潔服務(wù)合同范本
- DZ∕T 0215-2020 礦產(chǎn)地質(zhì)勘查規(guī)范 煤(正式版)
- 人教版七級(jí)下《第五章相交線與平行線》單元測(cè)試題含試卷分析答題技巧
- 多圖中華民族共同體概論課件第十一講 中華一家與中華民族格局底定(清前中期)根據(jù)高等教育出版社教材制作
- 不同粒徑范圍的超細(xì)重鈣粉產(chǎn)品分析報(bào)告
- 公文檔案知識(shí)培訓(xùn)
- 上海市浦東新區(qū)2023-2024學(xué)年一年級(jí)上學(xué)期期末考試數(shù)學(xué)試題
- 2024年強(qiáng)基計(jì)劃解讀 課件-2024屆高三下學(xué)期主題班會(huì)
- 2024年中考數(shù)學(xué)專項(xiàng)復(fù)習(xí)模型33旋轉(zhuǎn)-奔馳模型-原卷版+解析
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論