金錢草總黃酮提取物的抗血栓作用研究(一)

1、金錢草總黃酮提取物的抗血栓作用研究(一)    【摘要】 目的:觀察金錢草總黃酮提取物對大鼠體內(nèi)血栓形成和血小板凝聚率的影響。方法:制造大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成模型，觀察血栓濕重;采用ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板凝聚，測定血小板在不同時間的聚集率以及最大聚集率。結(jié)果:金錢草總黃酮提取物30、20mg.kg組均不同程度地抑制大鼠體內(nèi)靜脈血栓的形成，減輕血栓濕重和干重;抑制由ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板不同時間點的聚集率和最大聚集率。結(jié)論:金錢草總黃酮提取物可明顯對抗血栓的形成，并且有明顯地降低血小板聚集率的作用。 【關(guān)鍵詞】 金錢草總黃酮;抗血栓;血小板聚集;小鼠金錢草為

2、報春科植物過路黃（Lysinmachia christi-nae Hance）的干燥全草，別名“活血丹”，主要化學(xué)成分為黃酮類，包括:槲皮素（quercetin），槲皮素-3-0-葡萄糖甙，山柰素（kaempferol）及山柰酚等。近年來研究表明，金錢草總黃酮能明顯改善心肌營養(yǎng)性血流，減輕心肌缺血及損傷，與潘生丁作用相似。本實驗通過測定體內(nèi)血栓重量和血小板凝集率來探索其抗血栓的作用機(jī)理，為開發(fā)和應(yīng)用防治血栓性疾病的藥物提供一定的科學(xué)依據(jù)。1 對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響1.1 實驗方法選用Waster大鼠50只，體重200250g，雌雄各半，由長春高新技術(shù)醫(yī)學(xué)動物實驗研究中心提供，隨機(jī)分為空白對照

3、組、陽性對照組、金錢草總黃酮高、中、低劑量5組，每組10只。金錢草總黃酮（長春中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院新藥中心提供），刺五加注射液（批號:20051012，黑龍江省完達(dá)山制藥廠），3%戊巴比妥鈉，1.10000微量電子天平（FA1001，上海天平儀器廠）。所有動物靜脈注射給藥，每日1次。給藥劑量:金錢草總黃酮高、中、低劑量30、20、10mg.kg體重;陽性對照組（刺五加注射液）:80mg.kg體重;對照組給予同等劑量的蒸餾水。連續(xù)給藥7d。末次給藥后30min，大鼠以3%戊巴比妥鈉腹腔給藥麻醉。腹部正中切口切開腹腔，剝離下腔靜脈，與左腎靜脈下方用粗線結(jié)扎下腔靜脈，縫合腹腔，結(jié)扎4h后，處死大鼠

4、，打開腹腔，在結(jié)扎下方2cm處夾閉管腔，取出瘀血段血管，剖開管腔，取出血栓，放在濾紙上，吸干血液，用微量電子天平稱取血栓濕重（mg），然后將血栓在室溫下放置24h，稱取血栓干重（mg）。統(tǒng)計學(xué)處理:各組實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。1.2 實驗結(jié)果見表1。表1 各組大鼠靜脈血栓濕重干重比較（略）結(jié)果表明，金錢草總黃酮高劑量組和中劑量組及陽性對照組的濕重和干重與空白對照組比較均有顯著性差異（P0.05，P0.01），低劑量組與對照組比較未見顯著性差異（P>0.05），提示金錢草總黃酮對大鼠體內(nèi)血栓模型動物的血栓形成有明顯的抑制作用。 2 對大鼠血小板聚集率的影

5、響2.1 實驗方法1選用Waster大鼠50只，體重200250g雌雄各半，由長春高新技術(shù)醫(yī)學(xué)動物實驗中心提供，隨機(jī)分為空白對照組、陽性對照組、金錢草總黃酮高、中、低劑量5組，每組10只。金錢草總黃酮（長春中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院新藥中心提供），刺五加注射液（批號:200510012，黑龍江省完達(dá)山制藥廠），3.8%枸緣酸鈉，ADP（美國Simga公司產(chǎn)品），PH7.4的磷酸鹽緩沖液，離心機(jī)（LDZ2.北京醫(yī)用離心機(jī)廠），1.10000微量電子天平（FA1004，上海天平儀器廠），多功能智能血液凝聚儀TY XN-96（上海通用機(jī)電技術(shù)研究所）。大鼠乙醚麻醉下，腹腔主動脈取血，3.8%枸椽酸鈉抗凝

6、。1000r.min，離心5min，取富含血小板血漿（PRP）備用。血小板促凝劑的準(zhǔn)備:用1.1000天平精確稱取ADP5mg，用PH7.4的0.2M磷酸鹽緩沖液溶解，最終配制成濃度為2um。金錢草總黃酮實驗分別配制成4、2、1mg.ml，超聲震蕩充分溶解，用雙層濾紙過濾。濾液再用0.45m微孔濾膜抽濾，備用。血液凝集儀的準(zhǔn)備:將TYXN-96智能型血液凝集儀按實驗操作步驟，取富含血小板血漿100l，加入試驗測藥10l（分別含金錢草總黃酮4、2、1mg.ml），對照組加同體積生理鹽水。測試時再加入促凝劑ADP11l。觀測血小板聚集曲線變化:每組測試10例，分別計算各級1、5min（PAG-1，

7、PAG-5）的血小板聚集率及血小板聚集性最大峰值（PAG-M）。統(tǒng)計學(xué)方法:實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。2.2 實驗結(jié)果見表2。 表2 各組血小板聚集性的比較（略）結(jié)果表明，與對照組比較，金錢草總黃酮體外4、2mg.ml在3、5min測試點上血小板聚集率明顯小于對照組，血小板聚集最大聚集率也明顯小于對照組，提示一定劑量的金錢草總黃酮體外給藥對ADP所致的血小板聚集均有一定的抑制作用。3 討論血栓的形成涉及到機(jī)體的凝血功能、血小板凝聚功能等多種因素，由其引起栓塞和缺血是許多心血管疾病發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。如能有效地控制血栓的形成并能降低血小板凝聚率，對防治缺血性心腦

8、血管疾病有著深遠(yuǎn)的意義2、3。本實驗通過測定體內(nèi)靜脈血栓的重量觀察金錢草總黃酮對于血栓形成的抑制作用，證明了金錢草總黃酮能顯著減輕病理狀態(tài)下大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的濕重和干重，降低血栓形成的百分率，顯示出顯著的血栓抑制作用，而且這種抗血栓作用部分是通過抑制ADP誘導(dǎo)的血小板凝聚功能而實現(xiàn)的4、5。這一結(jié)果也顯示了金錢草總黃酮的抗血栓，活血化瘀功效是具有一定的理論基礎(chǔ)，為開發(fā)和應(yīng)用防治血栓性疾病的藥物提供一定的科學(xué)依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1徐叔云，卞如濂，陳 修，主編.藥理實驗方法M.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1982.2李自民，徐先俊，殷昌好.地奧心血康抗血栓形成實驗研究J.時珍國醫(yī)國藥，2002，17（7）:390-391.3樓洪剛，何俏軍，吳洪海.雞肝散總黃酮提取物對大鼠實驗性心肌缺血的保護(hù)作用J.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，20