實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 細(xì)菌形狀學(xué)檢查細(xì)菌形狀學(xué)檢查 生物平安生物平安n1、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必需穿白大褂，離室時(shí)脫下反折；無(wú)菌操作時(shí)必需戴口、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必需穿白大褂，離室時(shí)脫下反折；無(wú)菌操作時(shí)必需戴口罩。罩。n2、不用要物品勿帶入實(shí)驗(yàn)室，必要的文具、實(shí)驗(yàn)指點(diǎn)和筆記本應(yīng)放在、不用要物品勿帶入實(shí)驗(yàn)室，必要的文具、實(shí)驗(yàn)指點(diǎn)和筆記本應(yīng)放在指定的操作區(qū)。指定的操作區(qū)。n3、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)制止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨意走動(dòng)。、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)制止帶入飲食，抽煙，不得高聲談笑或隨意走動(dòng)。n4、需培育的物品應(yīng)做好標(biāo)志放在指定地點(diǎn)。用過(guò)的有菌器材必需放在、需培育的物品應(yīng)做好標(biāo)志放在指定地點(diǎn)。用過(guò)的有菌器材必需放在消毒缸內(nèi)，小心處置傳

2、染資料、培育物和污染的物品。消毒缸內(nèi)，小心處置傳染資料、培育物和污染的物品。n5、防止任何有菌資料的濺出，假設(shè)不甚污染任務(wù)臺(tái)、手、眼、衣服和、防止任何有菌資料的濺出，假設(shè)不甚污染任務(wù)臺(tái)、手、眼、衣服和地面等處，應(yīng)立刻報(bào)告教師及時(shí)適當(dāng)處置。地面等處，應(yīng)立刻報(bào)告教師及時(shí)適當(dāng)處置。n6、實(shí)驗(yàn)終了后物歸原處，并清潔桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后，、實(shí)驗(yàn)終了后物歸原處，并清潔桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗凈后，封鎖水、電、煤氣和門(mén)窗方可分開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。封鎖水、電、煤氣和門(mén)窗方可分開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹縩1掌握臨床微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么，生物平安及其它掌握臨床微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么，生物平安及其它本卷須知

3、。本卷須知。n2掌握顯微鏡油鏡的運(yùn)用和維護(hù)。掌握顯微鏡油鏡的運(yùn)用和維護(hù)。n3熟習(xí)顯微鏡的構(gòu)造和各部分的功能。熟習(xí)顯微鏡的構(gòu)造和各部分的功能。n4不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡察看。不染色和各種染色標(biāo)本的顯微鏡察看。n5細(xì)菌特殊構(gòu)造的染色與察看。細(xì)菌特殊構(gòu)造的染色與察看。n【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】n光學(xué)顯微鏡的運(yùn)用光學(xué)顯微鏡的運(yùn)用n不染色標(biāo)本的檢查不染色標(biāo)本的檢查n革蘭氏染色和細(xì)菌根本形狀察看革蘭氏染色和細(xì)菌根本形狀察看n細(xì)菌特殊構(gòu)造染色和察看細(xì)菌特殊構(gòu)造染色和察看形狀學(xué)檢查的意義形狀學(xué)檢查的意義n細(xì)菌鑒定的重要手段，有助于細(xì)菌的初步分群細(xì)菌鑒定的重要手段，有助于細(xì)菌的初步分群n是決議采用何種生化

4、反響的重要提示是決議采用何種生化反響的重要提示n初步診斷初步診斷n結(jié)核涂片結(jié)核涂片n淋球菌涂片淋球菌涂片 顯微鏡的運(yùn)用顯微鏡的運(yùn)用n先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡n粗調(diào)粗調(diào)+微調(diào)微調(diào)n香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)空氣折射后不能進(jìn)入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃空氣折射后不能進(jìn)入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃相近，可使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光度加強(qiáng)，物相近，可使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光度加強(qiáng)，物像明晰像明晰n鏡頭要堅(jiān)持清潔可用二甲苯擦拭鏡頭鏡頭要堅(jiān)持清潔可用二甲苯擦拭鏡頭形狀學(xué)檢查的方法形狀學(xué)檢

5、查的方法n不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法n染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法n特殊染色檢查法特殊染色檢查法不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法1n壓片法壓滴法壓片法壓滴法n1.用接種環(huán)分別取細(xì)菌用接種環(huán)分別取細(xì)菌23環(huán)，置于干凈環(huán)，置于干凈載玻片中央載玻片中央n2.悄然覆上蓋玻片悄然覆上蓋玻片n3.油鏡下察看油鏡下察看不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法2n懸滴法懸滴法染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法n染色根本步驟：染色根本步驟：n涂片：涂片：n枯燥：室溫自然枯燥枯燥：室溫自然枯燥n固定：殺死細(xì)菌固定：殺死細(xì)菌;使菌體與玻片粘附使菌體與玻片粘附;菌體蛋菌體蛋白變性易著色白變性易著色n染色：革蘭染色染色：革蘭染

6、色n鏡檢鏡檢革蘭染色革蘭染色-根本步驟根本步驟a ) 初 染 ： 結(jié) 晶 紫初 染 ： 結(jié) 晶 紫 1min；b)媒染：碘液媒染：碘液1min；c)脫色：脫色：95%乙醇乙醇至無(wú)紫色零落為止；至無(wú)紫色零落為止；d)復(fù)染：石碳酸復(fù)紅復(fù)染：石碳酸復(fù)紅30s，自然枯燥后，自然枯燥后鏡檢鏡檢革蘭染色革蘭染色-結(jié)果與本卷須知結(jié)果與本卷須知結(jié)果判別：紫色為革蘭陽(yáng)性菌、紅色為革蘭陰性菌結(jié)果判別：紫色為革蘭陽(yáng)性菌、紅色為革蘭陰性菌本卷須知：本卷須知：涂片不宜過(guò)厚涂片不宜過(guò)厚固定不宜過(guò)熱固定不宜過(guò)熱脫色是關(guān)鍵：脫色不夠：革蘭陰性菌脫色是關(guān)鍵：脫色不夠：革蘭陰性菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陽(yáng)性菌脫色過(guò)度：革蘭陽(yáng)性菌脫色過(guò)度：

7、革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌革蘭陰性菌1824h菌齡最正確菌齡最正確知金葡與大腸作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照知金葡與大腸作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照特殊染色示教特殊染色示教n鞭毛染色鞭毛染色n芽胞染色芽胞染色n莢膜染色莢膜染色鞭毛染色鞭毛染色-套組內(nèi)容及規(guī)格套組內(nèi)容及規(guī)格內(nèi)容內(nèi)容規(guī)格規(guī)格主要成分主要成分復(fù)紅酒精溶液復(fù)紅酒精溶液(A液液)20ml品紅品紅鞣酸水溶液鞣酸水溶液(B液液)20ml鞣酸鞣酸鉀明礬溶液鉀明礬溶液(C液液)20ml鉀明礬鉀明礬任務(wù)液過(guò)濾瓶任務(wù)液過(guò)濾瓶鞭毛染色鞭毛染色-任務(wù)液配制任務(wù)液配制n根據(jù)運(yùn)用量將根據(jù)運(yùn)用量將A液、液、B液、液、C液等比例混合，并置于任液等比例混合，并置于任務(wù)液過(guò)濾瓶?jī)?nèi)，混合均勻靜

8、置務(wù)液過(guò)濾瓶?jī)?nèi)，混合均勻靜置2h后方可運(yùn)用后方可運(yùn)用n任務(wù)液任務(wù)液28約可保管約可保管23天天鞭毛染色鞭毛染色-玻片的處置玻片的處置n鞭毛染色勝利與否，與玻片的干凈度有非常親密的關(guān)鞭毛染色勝利與否，與玻片的干凈度有非常親密的關(guān)系系n取新的載玻片，先用洗潔精清洗干凈后，再浸泡在取新的載玻片，先用洗潔精清洗干凈后，再浸泡在3%鹽酸酒精鹽酸酒精2天以上，運(yùn)用時(shí)從酸性酒精中取出，并天以上，運(yùn)用時(shí)從酸性酒精中取出，并用純水沖洗干凈，再以干凈紗布擦干或自然枯燥后運(yùn)用純水沖洗干凈，再以干凈紗布擦干或自然枯燥后運(yùn)用用鞭毛染色鞭毛染色-涂片的制備涂片的制備n將菌種接種在肉湯管中，經(jīng)將菌種接種在肉湯管中，經(jīng)24h

9、37孵育后離心，孵育后離心，倒掉上清液，用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一倒掉上清液，用接種環(huán)沾取沉淀物一環(huán)置于玻片的一端，并將玻片傾斜，使菌液自然流動(dòng)至玻片的另一端，端，并將玻片傾斜，使菌液自然流動(dòng)至玻片的另一端，室溫下自然枯燥室溫下自然枯燥鞭毛染色鞭毛染色-操作方法操作方法n滴加任務(wù)液于玻片上，染色滴加任務(wù)液于玻片上，染色1015minn將玻片微傾斜，用蒸餾水一滴滴沖洗干凈將玻片微傾斜，用蒸餾水一滴滴沖洗干凈n將玻片直立使水分流盡，自然晾干，鏡檢將玻片直立使水分流盡，自然晾干，鏡檢n結(jié)果：菌體及鞭毛均為紅色結(jié)果：菌體及鞭毛均為紅色芽胞染色芽胞染色-染液規(guī)格染液規(guī)格n石碳酸復(fù)紅液石碳酸復(fù)紅液20ml堿性品紅堿性品紅n脫色液脫色液20ml乙醇乙醇n堿性美藍(lán)液堿性美藍(lán)液20ml亞甲藍(lán)亞甲藍(lán)芽胞染色芽胞染色-染色步驟與方法染色步驟與方法n將有芽胞細(xì)菌制成涂片，自然枯燥后加熱固定將有芽胞細(xì)菌制成涂片，自然枯燥后加熱固定n滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上，并弱火加熱，使染液冒滴加石碳酸復(fù)紅液于涂片上，并弱火加熱，使染液冒蒸氣約蒸氣約5min，冷后水洗，并用脫色液脫色，冷后水洗，并用脫色液脫色2min，水，水洗洗n堿性美藍(lán)復(fù)染堿性美藍(lán)復(fù)染30s，水洗，干后用油鏡鏡檢，水洗，干后用油鏡鏡檢n結(jié)果：