再造煙葉萃取液與濃縮液固形物含量的測(cè)定氣相色譜法和折光

1、ICS 65.160X85備案號(hào)：XX XXYC中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T>oo<"xxxx再造煙葉萃取液與濃縮液固形物含量的測(cè)定氣相色譜法和折光法Determinationofsolidscontentintobaccowaterextractsandconcentratedextractliquorforreconstitutedtobacco-gaschromatographicmethodandrefractometivemethod（征求意見(jiàn)稿）（在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專(zhuān)利連同支持性文件一并附上）XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)

2、施國(guó)家煙草專(zhuān)賣(mài)局發(fā)布YC/T >00<x xxxx、，、.刖百本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。SAC/TC144/SC1 ）歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家煙草專(zhuān)賣(mài)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)煙草標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)卷煙分技術(shù)委員會(huì)（本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：再造煙葉萃取液與濃縮液固形物含量的測(cè)定氣相色譜法和折光法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了再造煙葉萃取液與濃縮液中固形物（包括總固形物、可溶性固形物和不溶性固形物）含量的測(cè)定方法。其中，標(biāo)準(zhǔn)正文規(guī)定了總固形物含量、可溶性固形物含量和不溶性固形物含量的氣相色譜測(cè)定方法，附錄A規(guī)定了可溶性固形物含量的折光測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于再造煙葉萃取液與濃

3、縮液中固形物（總固形物、可溶性固形物、不溶性固形物）含量的測(cè)定。其中，氣相色譜法適用于再造煙葉萃取液與濃縮液中固形物（總固形物、可溶性固形物、不溶性固形物）含量的確證測(cè)定，折光法適用于再造煙葉萃取液與濃縮液中可溶性固形物含量的常規(guī)測(cè)定。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GBT14454.4-2008香料折光指數(shù)的測(cè)定NY/T2637-2014水果和蔬菜可溶性固形物含量的測(cè)定折射儀法3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用

4、于本文件。3.1 總固形物totalsolids在常溫常壓下，再造煙葉煙草原料萃取液與濃縮液中除去水分后剩余的物質(zhì)。3.2 可溶性固形物solublesolids在常溫常壓下，再造煙葉煙草原料萃取液與濃縮液中可溶解于水的物質(zhì)。3.3 不溶性固形物insolublesolids在常溫常壓下，再造煙葉煙草原料萃取液與濃縮液中不溶于水的物質(zhì)。4 原理4.1 總固形物含量測(cè)定原理在常溫常壓條件下，將一定量的再造煙葉煙草原料萃取液或濃縮液溶解于含有內(nèi)標(biāo)物（異丙醇）的萃取劑中，用配有熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）的氣相色譜進(jìn)行樣品的水分含量測(cè)定，扣除樣品水分含量即為總固形物含量。4.2 可溶性固形物含量測(cè)定原理在常

5、溫常壓條件下，再造煙葉煙草原料萃取液或濃縮液經(jīng)離心處理后，取一定量離心后的溶液溶解于含有內(nèi)標(biāo)物（異丙醇）的萃取劑中，用配有熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）的氣相色譜測(cè)定萃取液的水分含量，扣除水分含量即為可溶性固形物含量。4.3 不溶性固形物含量測(cè)定原理在常溫常壓條件下，同一再造煙葉煙草原料萃取液與濃縮液樣品中總固形物含量與可溶性固形物含量的差值即為不溶性固形物含量。5 試劑5.1 水，GB/T6682，一級(jí)。5.2 乙醇，水分含量應(yīng)低于1.0mg/mL，色譜純。5.3 內(nèi)標(biāo)物，異丙醇，純度不低于99%，色譜純。5.4 萃取劑，含內(nèi)標(biāo)物（5.3）的乙醇溶液，濃度為12.5mL/L。5.5 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液加入一

6、定量水于萃取劑（5.4）中，混合均勻，制備至少5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其濃度應(yīng)覆蓋預(yù)計(jì)樣品溶液中檢測(cè)到的水分濃度（一般最高濃度為16mg/mL），其中一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中不加水。注：適宜的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制備方法為稱(chēng)取0mg、50mg、100mg、200mg、400mg、600mg、800mg水，精確至0.1mg,分別加入50mL萃取劑（5.4）,混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度（單位體積萃取液中的水分含量）分別為0mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、8mg/mL、12mg/mL、16mg/mL。為了防止吸水，盛放溶劑的容器應(yīng)配備去水裝置，且所有溶液均應(yīng)密封。萃取劑在使用前應(yīng)持續(xù)搖動(dòng)，使水分均

7、勻。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制備所用萃取劑應(yīng)與測(cè)試樣品所用萃取劑為同一批。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液轉(zhuǎn)移到色譜進(jìn)樣瓶后，應(yīng)立刻加蓋密封。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液有效期為一周。6 儀器設(shè)備及材料常用實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及下述各項(xiàng)。6.1 氣相色譜儀，配有熱導(dǎo)池檢測(cè)器、記錄儀和積分儀或其他合適的數(shù)據(jù)處理設(shè)備。色譜柱可根據(jù)所使用設(shè)備情況，于6.2與6.3中任選其一。6.2 填充色譜柱，內(nèi)徑2mm4mm，最佳長(zhǎng)度1.5m2m。固定相為100目80目的乙基乙烯苯和二乙烯苯共聚物。色譜柱宜使用去活的不銹鋼柱，其他材料如玻璃或鎳色譜柱亦可使用。6.3 毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格為30m（長(zhǎng)度）X0.53mm（內(nèi)徑）X40.0m（膜厚）,固定相為鍵合聚苯乙烯-二

8、乙烯基苯6.4 具塞錐形瓶，100mL,使用前應(yīng)在105Ci5C下加熱至少1h,并在放有干燥劑的干燥器中冷卻后備用。6.5 振蕩器，往復(fù)式或回旋式。6.6 離心機(jī)，最大使用轉(zhuǎn)速不小于8000r/min。6.7 注射器，10mL，貯存于干燥器中直至使用。6.8 離心管，10mL，貯存于干燥器中直至使用。6.9 電子天平，感量為0.0001g。6.10 加液器，配備干燥管，可移取50mL液體。加液器在加液前應(yīng)使用50mL萃取劑沖洗，貯存于干燥器中直至使用。6.11 有機(jī)濾膜，0.45噸，貯存于干燥器中直至使用。6.12 載氣，氦氣或氮?dú)狻?.13 干燥劑，活性硅膠。7 取樣取再造煙葉生產(chǎn)過(guò)程中的煙

9、草原料萃取液和濃縮液，取樣后立即存放在適當(dāng)體積的密閉容器中，若樣品需要在冷藏、冷凍條件下存放，應(yīng)在測(cè)定前同密閉容器一起平衡至室溫。稱(chēng)取樣品前應(yīng)將樣品搖晃均勻后再稱(chēng)取，以免溶液底部有沉淀，混合不均勻。8 分析步驟8.1 總固形物含量測(cè)定試樣制備準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5g搖勻后的樣品，精確至0.0001g,置于100mL具塞錐形瓶（6.4）中。準(zhǔn)確移取50mL萃取劑（5.4）于該錐形瓶中，立刻上蓋密封。在振蕩器（6.5）上于室溫下振蕩20min，使用注射器（6.7）移取約5mL萃取液，在注射器上裝孔徑0.45m的有機(jī)濾膜（6.11）,先放出部分侈3mL）萃取液以沖洗濾膜，然后將后續(xù)過(guò)濾的萃取液轉(zhuǎn)移至色譜瓶中

10、，上蓋密封，以作分析用。同一樣品最少制備兩個(gè)測(cè)試樣品。處理后的試樣建議在30h內(nèi)完成氣相色譜分析。8.2 可溶性固形物含量測(cè)定試樣制備取約10mL搖勻后的樣品，置于10mL離心管（6.8）中，在室溫下，于8000r/min條件下離心15min,準(zhǔn)確稱(chēng)取離心后上層清液0.5g,精確至0.0001g,置于100mL具塞錐形瓶（6.4）中。同一樣品最少制備兩個(gè)測(cè)試樣品。準(zhǔn)確移取50mL萃取劑（5.4）于該錐形瓶中，立刻上蓋密封。在振蕩器（6.5）上于室溫下振蕩20min，使用注射器（6.7）移取約5mL萃取液，在注射器上裝孔徑0.45m的有機(jī)濾膜（6.11）,先放出部分侈3mL）萃取液以沖洗濾膜，然

11、后將后續(xù)過(guò)濾的萃取液轉(zhuǎn)移至色譜瓶中，上蓋密封，以作分析用。處理后的試樣建議在30h內(nèi)完成氣相色譜分析。8.3 空白實(shí)驗(yàn)不加樣品，重復(fù)步驟8.1、8.2，進(jìn)行氣相色譜分析。8.4 色譜分析條件以下分析條件可供參考，采用其它條件應(yīng)驗(yàn)證其適用性。8.4.1 填充色譜柱分析條件填充色譜柱推薦分析條件如下： 柱箱溫度：170（等溫線）； 進(jìn)樣口溫度：250； 檢測(cè)器溫度：250； 載氣：氦氣，流量30mL/min；進(jìn)樣體積：1L8.4.2 毛細(xì)管色譜柱操作條件毛細(xì)管色譜柱推薦操作條件如下： 柱箱溫度：170（等溫線）； 進(jìn)樣口溫度：150； 檢測(cè)器溫度：250，參比流量20mL/min； 載氣：氦氣，流

12、量5mL/min；進(jìn)樣體積：1L; 分流比：20:1。注：若檢測(cè)器靈敏度足夠高，亦可使用氮?dú)狻２捎貌环至鬟M(jìn)樣口時(shí)，進(jìn)樣體積為0.5人8.5 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作按照氣相色譜分析條件對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.5）進(jìn)行氣相色譜測(cè)定，保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。記錄水分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)溶液中水分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（或峰高比），以峰面積比（或峰高比）為縱坐標(biāo)，水分濃度為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。由于萃取劑含有水分，回歸曲線應(yīng)不過(guò)原點(diǎn)。若標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2低于0.99,則應(yīng)重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。若標(biāo)準(zhǔn)溶液擬合濃度值偏離實(shí)際濃度10%以上，則該標(biāo)準(zhǔn)溶液點(diǎn)應(yīng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上去除。每檢驗(yàn)批進(jìn)行一次標(biāo)準(zhǔn)

13、曲線的制作，另外，每20個(gè)樣品測(cè)定后應(yīng)注入一中等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。若所得結(jié)果與原濃度相差超過(guò)3%，則應(yīng)重新制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。若使用新配制萃取劑，應(yīng)重新制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線萃取劑與樣品萃取劑必須是同一批次。若萃取劑水分含量超過(guò)1.0mg/mL，則不應(yīng)使用該批萃取劑。8.6樣品測(cè)定按照色譜分析條件（8.4）對(duì)樣品萃取溶液（8.1）（8.2）進(jìn)行氣相色譜分析，每個(gè)樣品平行測(cè)定兩次，根據(jù)水和內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（或峰高比），使用標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程計(jì)算試樣中水分含量。由于萃取劑會(huì)吸收水分，每批樣品至少做一組平行空白測(cè)試?？瞻讟悠罚?.3）色譜分析條件（8.4）和樣品萃取溶液相同。9結(jié)果計(jì)算與表述9.1

14、水分含量的計(jì)算YC/T >00<X XXXX試樣中水分含量由式（1）計(jì)算得出:X=ctcbMVtMl00%（1）1000m0式中：X試樣中水分含量，單位以百分比（）表示；Ct試樣中水分濃度測(cè)定值，單位為毫克每毫升（mg/mL）;Cb空白試樣中水分濃度測(cè)定值，單位為毫克每毫升（mg/mL）;Vt萃取劑體積，單位為毫升（mL）;m0稱(chēng)取試樣質(zhì)量，單位為克（g）。取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為樣品測(cè)試結(jié)果，精確至0.01%。兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于3%。9.2 總固形物含量的計(jì)算2)試樣中總固形物含量由式（2）計(jì)算得出:W1=100%-X1式中：W1試樣中總固形物的含量，單

15、位以百分比（）表示；X1試樣中水分含量，單位以百分比（）表示。取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為樣品測(cè)試結(jié)果，精確至0.01%。萃取液樣品兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于5%;濃縮液樣品兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于3%。9.3 可溶性固形物含量的計(jì)算試樣中可溶性固形物含量由式（3）計(jì)算得出：W2=100%-X2（3）式中：W2試樣中可溶性固形物的含量，單位以百分比（）表示；X2試樣（離心處理后）中水分含量，單位以百分比（）表示；取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為樣品測(cè)試結(jié)果，精確至0.01%。萃取液樣品兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于5%;濃縮液樣品兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)

16、小于3%。9.4 不溶性固形物含量的計(jì)算試樣中不溶性固形物含量由式（4）計(jì)算得出:W3=W1-W2（4）式中：W3試樣中不溶性固形物的含量，單位以百分比（）表示;W1試樣中總固形物的含量，單位以百分比（）表示；W2試樣中可溶性固形物的含量，單位以百分比（）表示。取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為樣品測(cè)試結(jié)果，精確至0.01%。10回收率、檢出限和定量限本方法水分含量測(cè)定的回收率、檢出限和定量限結(jié)果見(jiàn)表1。表1方法回收率、檢出限和定量限結(jié)果色譜柱類(lèi)型回收率%檢出限%定量限%填充色譜柱96.73101.790.461.55毛細(xì)管色譜柱95.62102.020.943.1211試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)說(shuō)明：

17、 識(shí)別被測(cè)試樣需要的所有信息； 參照本標(biāo)準(zhǔn)所使用的試驗(yàn)方法； 測(cè)定結(jié)果，包括各單次測(cè)定結(jié)果及其平均值; 與本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的分析步驟的差異； 在試驗(yàn)中觀察到的異常現(xiàn)象； 試驗(yàn)日期； 測(cè)定人員。YC/T >00<x xxxx附錄A（規(guī)范性附錄）折光法A.1原理按所用儀器的類(lèi)型，直接測(cè)量折射角或者觀察全反射的臨界線。A.2儀器及設(shè)備A.2.1折光儀，有溫度補(bǔ)償功能，糖度（Brix）精度為0.01%。光源為鈉光。A.2.2天平，感量為0.01g。A.3試劑A.3.1水，GB/T6682,三級(jí)，20c時(shí)的折光指數(shù)為1.3330。A.3.2對(duì)異丙基甲苯，20c時(shí)的折光指數(shù)為1.4906。A.3.3

18、苯甲酸節(jié)酯，20c時(shí)的折光指數(shù)為1.5685。A.3.41-澳泰，20c時(shí)的折光指數(shù)為1.6585。A.4分析步驟A.4.1試樣制備取再造煙葉生產(chǎn)過(guò)程的煙草萃取液或濃縮液，混均，稱(chēng)取適量后制作試樣。（萃取液稱(chēng)取約25g;濃縮液稱(chēng)取約5g,用水稀釋至20g25g）。A.4.2儀器校準(zhǔn)在20c條件下，按GB/T14454.1中規(guī)定方法校準(zhǔn)儀器。設(shè)置儀器的讀數(shù)顯示為糖度（Brix）。注：有些儀器可以設(shè)置為同時(shí)顯示折光指數(shù)、糖度的測(cè)量結(jié)果。A.4.3樣液測(cè)定保持儀器測(cè)定溫度穩(wěn)定，用柔軟絨布擦凈或蒸儲(chǔ)水沖洗測(cè)量池，滴加23滴或注入待測(cè)試樣，使樣液均勻分布于檢測(cè)池，記錄儀器顯示的測(cè)量讀數(shù)。A.5結(jié)果計(jì)算與表達(dá)A.5.1試樣的可溶性固形物含量未經(jīng)稀釋的試樣，儀器顯示的讀數(shù)即為試樣可溶性固形物含量。加水稀釋過(guò)的濃縮液試樣，其