T∕CVMA 66-2021 犬貓交叉配血試驗操作規(guī)范

1、ICS 11.220CCS B 41團體標準T/CVMA 662021犬貓交叉配血試驗操作規(guī)范Technical specification for cross-matching test in canine and feline2021 - 12 - 22 發(fā)布2021 - 12 - 22 實施中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā) 布T/CVMA 662021目次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 術(shù)語和定義14 樣本、材料和設(shè)備14.1 材料和設(shè)備14.2 樣本15 操作方法15.1 主側(cè)交叉配血試驗15.2 副側(cè)交叉配血試驗25.3 陰性對照26 結(jié)果判定26.1 溶血26.2 凝集26.3 判定標準2

2、附錄A （規(guī)范性） 紅細胞懸浮液的制備方法3附錄B （規(guī)范性） 血清制備方法4I庫七七 標準下載前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由北京中農(nóng)大動物醫(yī)院有限公司提出。 本文件由中國獸醫(yī)協(xié)會歸口。本文件起草單位：北京中農(nóng)大動物醫(yī)院有限公司、中國農(nóng)業(yè)大學、北京小動物診療行業(yè)協(xié)會、北京美聯(lián)眾合動物醫(yī)院股份有限公司、愛德士緬因生物制品貿(mào)易（上海）有限公司。本文件主要起草人：劉洋、許楚楚、夏兆飛、呂艷麗、耿文靜、孫玉祝、張瓊、張兆霞、黃薇。II犬貓交叉配血試驗操作規(guī)范1 范圍本文件規(guī)定了交叉配血試驗所需的樣本和材料、操作方法以及結(jié)果

3、判定。 本文件適用于犬貓交叉配血試驗操作及結(jié)果判定。2 規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1交叉配血試驗cross-matching test通過檢查供血和受血動物血液是否匹配，判斷雙方血液是否存在可探及的抗原-抗體成分，是確定能否輸血的重要依據(jù)。4 樣本、材料和設(shè)備4.1 材料和設(shè)備EDTA抗凝血、新鮮非抗凝全血、吸管、生理鹽水、離心管、低速離心機、恒溫箱、計時器、載玻 片、蓋玻片。4.2 樣本4.2.1 紅細胞懸浮液用動物EDTA抗凝血樣制備的2%4%的紅細胞懸浮液，制作方法符合附錄A。4.2.2 血清用動物新鮮非抗凝全血分離血清，制作方

4、法符合附錄B。5 操作方法5.1 主側(cè)交叉配血試驗主側(cè)交叉配血試驗的操作方法如下：a) 向離心管中滴加 1 滴供血動物紅細胞懸浮液和 2 滴受血動物血清，混勻。1b) 將離心管置于 37 恒溫箱孵育 20 min?？闪硗庵苽湟环菹嗤幕旌衔锊⒂?4 孵育，后續(xù)操作與 37 孵育的樣本相同。c) 取出離心管觀察上清顏色有無變紅，若觀察上清顏色受紅細胞干擾，可 450 g 離心 15 s 后觀察上清。d) 將紅細胞與血清混勻后，滴加一滴混合液于載玻片上，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下觀察。5.2 副側(cè)交叉配血試驗副側(cè)交叉配血試驗的操作方法如下：a) 向離心管中滴加 1 滴受血動物紅細胞懸浮液和 2 滴供血

5、動物血清，混勻。b) 將離心管置于 37 恒溫箱孵育 20 min。可另外制備一份相同的混合物并于 4 孵育，后續(xù)操作與 37 孵育的樣本相同。c) 其他操作同 5.1c）和 d）。5.3 陰性對照陰性對照的操作方法如下：a) 供血動物對照：向離心管中滴加 1 滴供血動物紅細胞懸浮液和 2 滴供血動物血清，混勻。b) 受血動物對照：向離心管中滴加 1 滴受血動物紅細胞懸浮液和 2 滴受血動物血清，混勻。c) 操作同 5.1b）、c）和 d）。6 結(jié)果判定6.1 溶血觀察到上清呈淡粉色至紅色，表明發(fā)生溶血。6.2 凝集顯微鏡下觀察到紅細胞呈葡萄串樣、雜亂無序的堆疊，而非錢串樣規(guī)則堆疊，表明發(fā)生凝

6、集。6.3 判定依據(jù)供血動物應為臨床健康動物，結(jié)果判定依據(jù)是：陰性對照無溶血或凝集，某一側(cè)交叉配血試驗無溶血且未出現(xiàn)凝集，則該側(cè)交叉配血試驗結(jié)果 為相配。陰性對照無溶血或凝集，某一側(cè)交叉配血試驗發(fā)生溶血或凝集，則該側(cè)交叉配血試驗結(jié)果為不 相配。供血動物陰性對照出現(xiàn)溶血或凝集，操作無效，不可判定結(jié)果。若供血動物陰性對照無溶血或凝集，而受血動物陰性對照出現(xiàn)溶血或凝集，則操作有效，但交 叉配血試驗結(jié)果不可靠。2附錄A（規(guī)范性）紅細胞懸浮液的制備方法A.1 準備材料EDTA抗凝血、離心管、生理鹽水、吸管、低速離心機、移液槍及槍頭、1 mL及5 mL注射器。A.2 制備方法紅細胞懸浮液的制備方法如下：a

7、) 取 0.2 mLEDTA 抗凝血于離心管中。b) 向離心管中沿管壁緩慢注入 5 mL 生理鹽水，將離心管管口密封后，輕柔地上下顛倒 10 次。c) 450 g 離心 35 min，用吸管棄去上清。d) 重復操作 b）和 c）3 次。e) 用移液槍伸入沉淀的紅細胞中間，取 30L 濃縮紅細胞加入另一裝有 1 mL 生理鹽水的潔凈離心管中，輕柔地上下顛倒混勻，制成紅細胞懸液。A.3 注意事項加入生理鹽水時，以及紅細胞與生理鹽水混勻時應輕柔操作，避免用吸管吹打混勻。樣本離心后， 避免采用傾倒的方法棄上清。3附錄B（規(guī)范性） 血清制備方法B.1 準備材料新鮮非抗凝全血、低速離心機、吸管或移液槍和槍頭、離心管。B.2 制備方法血清的制備方法如下：a) 新鮮非抗凝全血于室溫下靜置 30 min；或直至傾斜促凝管時無血液移動，并且可觀察到液體析出。b) 1000 g 離心 5 min10 min。c) 用吸管或