色譜分析法在藥物分析中應(yīng)用

1、文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.色譜分析法在藥物分析中的運(yùn)用氣相色譜法測(cè)定丁香藥材中丁香酚的含量丁香 Eugenia caryopbllata Thunb藥材來(lái)源于桃金娘科植物的干燥花蕾，收載于中國(guó)藥典 1995 年版一部。在 95 版藥典中，丁香藥材的音量測(cè)定只收載了測(cè)定揮發(fā)油音量的方法，但沒(méi)有測(cè)定揮發(fā)油中丁香酚 (C10H12O2)的音量。為進(jìn)一步控制和考察丁香藥材中丁香酚的音量，我們分別采用了浸潰法和揮發(fā)油提取法，提取后用 氣相色譜 法分別來(lái)測(cè)定丁香藥材中丁香酚的音量。1 儀器與試磚GC-9A 和 GC-14B 氣相色譜議 (日本島津 )。10%PEG

2、-20M 色譜柱。丁香酚耐照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物錨品檢定所(批號(hào)： 7258802)，經(jīng)標(biāo)化其音量為 98%以上，其它試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2 1 色譜條件廈系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 色譜柱：lO%PEG-20M ，檢測(cè)器 FID ，N2：60kPa，柱溫： 180，進(jìn)樣口溫度： 250，衰減 2。在上述條件下丁香酚峰與其它組分峰均能達(dá)到基線分離，且出峰對(duì)間較快，峰形較好，陰性樣品無(wú)干擾。吸取上述對(duì)照品溶液 1L，注人氣相色譜儀，結(jié)果理論塔板數(shù) n> 1200。拖尾因子在 0.951.05 之間，校正因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于 2.0%。28 供試品和對(duì)照品溶液的制備22 1 提潰時(shí)間的確定：

3、在試驗(yàn)研究中比較了不同浸漬時(shí)同丁香藥材中丁香酚的含量。上述結(jié)果表明，浸漬 24 h 以上，丁香藥材中的丁香酚已浸漬完全。222 供試品溶液的制備：取本品粗粉約 0.6g，精密稱定，量具塞錐形瓶中，精密加入乙醇 2OmL ，稱定重量，搖勻 t 宣溫放量 24h 以上，再稱定重量，補(bǔ)足損失重量，振搖后放量，用濾紙濾過(guò)。精密量取濾液 5mL，量 25mL 的容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。22 3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解，制得0.492mgmL 的溶液，作為對(duì)照品溶液。23 線性范圍的考察分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.

4、0、4、5L，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱座標(biāo)，丁香酚音量為橫座標(biāo)，計(jì)算得回歸方程Y= 9.26 ×10000X 一 35.94，r=0.9999，表明丁香酚在0.246 2.46ng 具有良好的線性關(guān)系。24 精密度試驗(yàn)：精密吸取丁香酚對(duì)照品溶液1L，重復(fù)進(jìn)樣 6 次，結(jié)果測(cè)得平均峰面積為 151654， RSD 為 1.3%。2. 5 重現(xiàn)性試驗(yàn)： 取同一批藥材 5 份，按丁香酚音量測(cè)定方法操作， 結(jié)果丁香酚音量的平均值為 121.02mg g，RSD 為 0.7%。1文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.26 回收率試驗(yàn)： 采用加樣

5、回收法， 精密稱取已知音量的丁香藥材 0.1 g(每克藥材吉丁香酚 121.6mg)，分別加對(duì)照品適量，按音量測(cè)定方法試驗(yàn)，結(jié)果平均回收率為 98.6， RSD 為 0.5%。27 樣品音量的測(cè)定分別取不同來(lái)源的5 批丁香藥材，按吉量測(cè)定方法試驗(yàn)，分別測(cè)定丁香酚的含量。3 小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 采用浸潰提取法比揮發(fā)油提取法簡(jiǎn)便、可控和準(zhǔn)確， 可以作為該藥材的質(zhì)量檢控指標(biāo)之一。HPLC-ELSD在藥物分析中的應(yīng)用1、在天然藥物及復(fù)方成藥分析中的應(yīng)用ELSD 能夠測(cè)定沒(méi)有紫外吸收或?yàn)樽贤饽┒巳跷盏臉悠?，天然產(chǎn)物中的許多成分無(wú)疑找到了直接、準(zhǔn)確的測(cè)定方法。 ELSD 在天然產(chǎn)物及其復(fù)方成藥分析中的應(yīng)

6、用報(bào)道主要有皂苷類、 生物堿類、 萜類內(nèi)酯等。 皂苷無(wú)紫外吸收或僅為末端吸收， ELSD 能夠?qū)ζ洳唤?jīng)衍生進(jìn)行檢測(cè)，在 HPLC ELSD 的應(yīng)用中這方面的報(bào)道最多。 主要有一次性分離分析天然 人參、生脈散復(fù)方、 育精膠囊中的多種人參皂苷 ；西洋參中的人參皂苷和擬人參皂苷定量測(cè)定； 三七中的三七皂苷的含量分析；黃芪、黃芪注射液和保元湯中的黃芪皂苷、黃芪甲甙的分離和測(cè)定；麥冬中的甾體皂甙元； 天麻中的天麻甙的含量測(cè)定等。這些研究主要采用Cl8 柱、乙晴與水作流動(dòng)相，不經(jīng)衍生直接測(cè)定多組分含量，結(jié)果顯示方法靈敏度高(一般檢測(cè)限低于 3gm1)、線性關(guān)系良好。對(duì)于無(wú)紫外吸收的生物堿類成分， ELSD

7、 同樣顯示出操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。對(duì)比 HPLC UV 法測(cè)定貝母中的甾類貝母生物堿，采用 ELSD 檢測(cè)器，不但不需衍生化操作，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確度，而且可檢測(cè)出不含雙鍵的貝母甲素， 對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的生物堿類成分如河豚毒素， 無(wú)紫外吸收且安全性低， 不適合衍生化法， 可用 ELSD 法進(jìn)行檢測(cè)，獲得滿意結(jié)果。銀杏作為一種保健藥品， 其主要活性成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯， 以往銀杏中的萜類內(nèi)酯成分主要采用 HPLC UV 法和 HPLC RI 測(cè)定，但由于萜類內(nèi)酯紫外吸收差，又含少量物質(zhì)的干擾， 結(jié)果穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性較差 隨著 ELSD 的發(fā)展和普及，這些方法已經(jīng)逐漸被 ELSD 法所取代。2、 在抗

8、生素分析中的應(yīng)用HPLC ELSD 早在 20 世紀(jì)九十年代就用于天然產(chǎn)物分析， 隨著技術(shù)的發(fā)展，其應(yīng)用范圍已逐漸擴(kuò)大， 近年來(lái)屢有用 HPLC ELSD 分析抗生素類藥物的報(bào)道，HPLCELSD 分析抗生素類藥物的報(bào)道多見(jiàn)于氨基糖苷類抗生素、氨基糖苷類抗生素是臨床上常用的抗生素，可通過(guò)微生物發(fā)酵或半合成制得，是一類單組分或多組分糖基取代的氨基環(huán)醇類化合物，主要有：鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、2文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.阿米卡星、小諾霉素等。 對(duì)這一類抗生素的含量測(cè)定多采用微生物法， 但微生物法測(cè)定的是各活性組分的總量， 無(wú)法反映各組分組成。 為克服這

9、個(gè)缺點(diǎn)， 國(guó)內(nèi)外的藥典采用 HPLC 法進(jìn)行測(cè)定，但這類抗生素?zé)o紫外吸收， 只能采取衍生化法 (多為柱前衍生 )，結(jié)果易受衍生化反應(yīng)條件的影響而不夠準(zhǔn)確， ELSD 法很好地解決了這個(gè)問(wèn)題。氨基糖苷類抗生素含多個(gè)氨基，可產(chǎn)生含不同當(dāng)量無(wú)機(jī)酸鹽產(chǎn)品，對(duì)于這些副產(chǎn)物成分， ELSD 也能很好的加以測(cè)定。高效液相色譜- 熒光衍生法在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用體內(nèi)藥物分析是在大量復(fù)雜組分中進(jìn)行微量或超微量藥物及代謝產(chǎn)物的測(cè)定。體內(nèi)藥物分析最常用的檢品是血樣(血漿、血清、全血 )、尿樣、唾液及組織液 , 特殊情況下也采用乳汁、淚液、膽汁、羊水、糞便等 1 。隨著藥物的開(kāi)發(fā)研究 , 藥物的服用劑量越來(lái)越小 ,

10、體內(nèi)藥物的濃度越來(lái)越低 , 這對(duì)分析方法靈敏度和選擇性等都提出很高的要求 2 。高效液相色譜法具有準(zhǔn)確、靈敏度、專一性強(qiáng)等特點(diǎn) , 一直是體內(nèi)藥物分析的主要手段 3 。而高效液相色譜的熒光檢測(cè)器比紫外吸收檢測(cè)器靈敏度高。具有強(qiáng)紫外吸收的化合物檢測(cè)靈敏度可達(dá)ng 水平 ,而熒光衍生物一般的檢測(cè)水平為10-1210-14m ol/L, 靈敏度比紫外檢測(cè)器提高101000 倍 4 。故 H PLC 法結(jié)合熒光檢測(cè)法所具有的較高的選擇性及靈敏度以及試樣用量少的特性 , 使得對(duì)復(fù)雜生物樣品中藥物及其代謝物的測(cè)定變得更加靈敏、準(zhǔn)確、快速。但熒光檢測(cè)器要求被檢測(cè)樣品能被激發(fā)產(chǎn)生熒光. 對(duì)于不產(chǎn)生熒光或熒光較

11、弱的樣品靈敏度很低 , 甚至不能檢測(cè)。為了擴(kuò)大檢品范圍 , 提高檢測(cè)靈敏度 , 常采用熒光衍生法。 熒光衍生法是指在一定條件下利用某種試劑與樣品中待測(cè)組分相作用 , 使其產(chǎn)物具有熒光或熒光增強(qiáng)。 另外 ,熒光檢測(cè)器選擇性好 , 過(guò)量的試劑和副產(chǎn)物往往不產(chǎn)生干擾 , 衍生物亦不必純化 , 因此熒光衍生技術(shù)的采用 , 擴(kuò)大了高效液相色譜 - 熒光測(cè)定法在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用范圍 , 為藥物代謝動(dòng)力學(xué) , 臨床藥理學(xué)和毒理學(xué)等研究提供科學(xué)依據(jù)。熒光 衍生化反 應(yīng)根據(jù)衍生反 應(yīng)的場(chǎng)所 來(lái)分 , 有柱 前衍生 化 (pre-colum n derivatization), 柱上衍生化 (on-colum

12、 n derivati-zation) 和柱后衍生化 (post-colum n derivatization)三種 . 從是否與儀器聯(lián)機(jī)的角度來(lái)分有 : 在線 (on-line)、離線 (of-line) 和旁線 (at-line)( 自動(dòng)化 )三種 . 目前在 H PLC 中以離線的柱前衍生法 (簡(jiǎn)稱柱前衍生法 )與在線的柱后衍生法 (簡(jiǎn)稱柱后衍生法 )使用居多 . 旁線衍生化方法是發(fā)展方向 5 。1 衍生化試劑常用的熒光衍生化試劑有 : 熒光試劑和熒光染料熒光胺 (fluorescam ine, 又名胺熒 ) 、鄰苯二甲醛 (O-phthaldehyde) 、丹酰 氯 (dansylch

13、loride, DNS-Cl) 、 氯化 硝 基 苯 駢 氧 二 氮 茂 (NBD-chloride) 、等。熒光胺是一常用熒光衍生化3文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.試劑 , 可同伯胺及大多數(shù)氨基酸反應(yīng) , 反應(yīng)迅速 , 衍生物具有高熒光強(qiáng)度的吡咯啉酮 , 而試劑本身則迅速水解為不發(fā)熒光的產(chǎn)物 , 是一理想的柱前衍生化試劑 ;丹酰氯是應(yīng)用最廣的熒光衍生試劑 , 常用于含氨基藥物的測(cè)定 , 同伯胺和仲胺都能反應(yīng) , 還可用于含酚羥基藥物如雌激素的測(cè)定 ; 鄰苯二甲醛 , 常用于伯胺類及 - 氨基酸類化合物的熒光分析。胺類化合物的衍生試劑 還 有 熒 光 素

14、異硫氰酸酯(FITC)、芴代甲氧基酰氯(FMOC)、4-氯-7-硝基-2,1,3- 苯駢惡二唑( NBD-C) 、 l6- 氨喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯(AQC) 等 6 10。目前已開(kāi)發(fā)出一些醇和酸的衍生化試劑11 13。醇、酚的衍生試劑有 : 羰基氯類 (FMOC、CEOC) , 氯甲 酸芴 甲 酯(FM OC-C1); 磺酰 氯類(DNs-Cl) , 鹵代三嗪類有 :1- 乙氧基 -4- (二氯 - 三嗪 )萘 (EDTN ) ; 羧酸類化合物的衍生試劑有 : 4- 溴甲基 -7- 甲氧基香豆素 (BrM M C) , 7-N- 哌嗪 -4- 二甲氨基苯駢呋喃重氮 (DBD-Pz) 、9-

15、蒽重氮甲烷 (ADAM ) 、4- 氨甲基 -6, 7- 二甲基香豆素 (ADM C) 、9-(2- 羥乙基 )- 吖啶酮 (H EA ) 等。羰基化合物的衍生試劑有肼類 : DNs-H 、CEOC-H , 氨基類有氨基甲基芘等。另外 , 還有些化學(xué)試劑可利用化學(xué)反應(yīng)使一些自身不能產(chǎn)生熒光的化合物轉(zhuǎn)變成熒光化合物。 這可能是由于化學(xué)反應(yīng)增加了 電子共軛系統(tǒng)的長(zhǎng)度或增加分子結(jié)構(gòu)的剛性和共平面性所致。 常用的化學(xué)反應(yīng)有氧化還原反應(yīng)、 水解反應(yīng)、縮合反應(yīng)、絡(luò)合反應(yīng)、光化學(xué)反應(yīng)等。比如維生素B1 可在堿性溶液中被K3Fe(CN)6 氧化成具有熒光的硫色素 , 氨芐青霉素在酸性溶液中 (pH =2),以

16、甲醛為催化劑 , 90加熱 2 小時(shí) ,水解成強(qiáng)烈黃色熒光的化合物。2 生物樣品的前處理生物樣品中的藥物在檢測(cè)前 , 首先應(yīng)除去蛋白質(zhì)的干擾 , 保證色譜柱的柱效和壽命。去除蛋白質(zhì)常用的方法有加入沉淀劑和變性試劑, 如硫酸銨、硫酸鈉等中性鹽、強(qiáng)酸和重金屬鹽等; 加入可與水混溶的有機(jī)溶劑, 如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃等。經(jīng)有機(jī)溶劑或酸處理后的生物樣品與反相HPLC 分析相匹配。應(yīng)用反相H PLC 時(shí)生物樣品甚至可以不用有機(jī)溶劑萃取, 可將含藥的液體樣品直接進(jìn)樣或經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的去蛋白后進(jìn)樣, 操作簡(jiǎn)單 , 所以應(yīng)用前景甚為廣泛 14 。另外還有酶消化法、綴合物水解冷凍干燥等方法。生物樣品一般經(jīng)

17、預(yù)處理后 , 再進(jìn)行分離提取。提取的目的是從大量共存物中分離出需要的微量組成 - 藥物及其代謝物。常用的方法有溶劑提取和固相分離兩種。溶劑提取常用的有機(jī)溶劑有正丁醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯、正已烷等及它們的混合溶液 ; 固相分離是將具有吸附或離子交換性質(zhì)、表面積大的擔(dān)體作為填充劑 , 裝于小分離管中 ,將生物樣品中的干擾物或藥物保留在擔(dān)體上而進(jìn)行分離的方法 ,也可認(rèn)為是微型柱色譜法 2 。常用擔(dān)體有聚苯乙烯、4文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.十八烷基鍵合硅膠、活性碳及硅藻土等。還有將預(yù)處理過(guò)程與層析過(guò)程線上(on-line) 進(jìn)行的,在分析柱前加

18、上較短(4 5cm )的預(yù)柱 ,使蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)沉積在預(yù)柱上。3 熒光衍生法 - 高效液相色譜法3.1 柱前熒光衍生法 - 高效液相色譜法目前在 HP LC 中以離線的柱前衍生法(簡(jiǎn)稱柱前衍生法 )使用最多 ,柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)是 : 相對(duì)自由地選擇反應(yīng)條件 ;不存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的限制 ; 衍生化的副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理以降低或消除其干擾 ; 容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行 ; 有較多的衍生化試劑可選擇 ; 不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。缺點(diǎn)是 : 形成的副產(chǎn)物可能對(duì)色譜分離造成較大困難 ; 在衍生化過(guò)程中 ,容易引入雜質(zhì)或干擾峰 ,或使樣品損失。此方法目前在藥物分析中運(yùn)用最多。毛麗莎 15 等采用對(duì)硝基苯甲酰氯

19、柱前熒光衍生法 ,用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定人尿和血清中雌激素雙酚 A 、 4- 壬基酚、 17- 乙炔基雌二醇及雌三醇、 17- 雌二醇和 17 - 雌二醇。尿樣經(jīng)酸水解、固相萃取柱濃縮、凈化分離 ; 血清樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后 ,用乙醚萃取游離態(tài)雌激素 ,N2 氣流揮干。所研究的6 種被測(cè)物除 4- 壬基酚和雙酚 A 外, 其余 4 種化合物本身的熒光強(qiáng)度較弱 , 直接熒光檢測(cè)的靈敏度低。 故采用對(duì)硝基苯甲酰氯為熒光衍生劑 , 在無(wú)水條件下與 6 種雌激素在無(wú)水環(huán)境中發(fā)生熒光衍生化反應(yīng),生成具有強(qiáng)熒光物質(zhì)。衍生化后 , 17 - 乙炔基雌二醇、雌三醇和兩種異構(gòu)體雌二醇的熒光效率明顯提高,用高效

20、液相色譜法進(jìn)行定量。檢出限為2.7 8.3 /g L; 加標(biāo)回收率尿樣為78.0102.5%,血清樣為72.698.6%;方法精密度為1.294.52%。張慧 ,余琛 16 等 建立血清中鹽酸美西律的柱前衍生化 -液相色譜熒光檢測(cè)法。鹽酸美西律是一伯胺類化合物 ,故首先將血清樣品用丙酮液直接沉淀蛋白后 , 定量加入熒光胺丙酮溶液 ,得鹽酸美西律的熒光衍生物。 采用反相高效液相色譜法 ,熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng) (ER)為 392nm ,發(fā)射波長(zhǎng) (Em) 為 480nm 。在 0.1006.400 mg ?L-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為5g?L-1 ,(S/ N 4)。批內(nèi) 、批間 精

21、密度為 1.34 5.31%。 可滿足鹽酸美西律的臨床血藥濃度的監(jiān)測(cè)和藥代動(dòng)力學(xué)研究。葉惟泠等 17 用甘磺酰氯柱前衍生化反相高效液相色譜熒光檢測(cè)法分析了正常人和肝病患者血漿中哌啶酸的水平。 熒光胺能特異地與一級(jí)氨基酸和生物胺反應(yīng) ,其衍生物能用乙酸乙酯提取去除。 PA( 哌 啶酸 -2)等 亞胺酸也能與熒光胺反應(yīng) ,但不產(chǎn)生熒光化合物 ,且該反應(yīng)在酸性條件下是可逆的。故樣品采用熒光胺提取法 ,除去血漿中的其他氨基酸和生物胺對(duì)檢測(cè)的干擾。哌啶酸一 3 為內(nèi)標(biāo)物 ,測(cè)得平均回收率為 84% , 至少在 40pm ol 至 2nmo l 的范圍內(nèi) , 濃度與響應(yīng)的線性關(guān)系良好 兩個(gè)哌啶酸的檢測(cè)極限

22、分別 2.0和 2.5pmo l。5文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.魏字峰18 建立測(cè)定血漿中賴諾普利濃度的方法,靈敏度高,操作步驟簡(jiǎn)單。首先將血漿樣品經(jīng)固相萃取 , 然后與熒光用 Hy persilODS 柱 ,流動(dòng)相為 20 mm o /l L KH2 P04 緩沖液 (pH3 .0)- 甲醇 (35:65, V/ V), 流速為 1.0 ml/ mi n; 進(jìn)樣量為 20l; 熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)為 383nm , 發(fā)射波長(zhǎng)為 477 nm 。賴諾普利濃度在 2 200 n/g ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 (r=0.9978) ,工作曲線穩(wěn)定 ,平均絕對(duì)

23、回收率為 68.55% (n=l5) ,日內(nèi)與日間精密度均小于 3% , 最低檢測(cè)限為ln/g ml ; 且內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定。徐智儒、蔣曄 19 建立生物樣品中阿德福韋的反相高效液相色譜分析方法。方法是先將大鼠血漿、組織經(jīng)沉淀蛋白處理后,分別加入氯乙醛 (0.32mo ?lL-1)及乙酸鈉 (4m o?lL -1)50l,混勻 ,95水浴加熱 30 mi n 進(jìn)行衍生化反應(yīng) ,用Inter-silC18 反相柱 (150 mm× 4.6 mm, 5 m) , 乙腈 -10 mm o l?L-1 磷酸鹽緩沖液 (2 m mo ?lL-1 氫氧化四丁基銨 ,氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 為

24、 7.0)(10:90)為流動(dòng)相 ,流速 1.5m L?mi n-1 , 熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為ex309nm 和 me425nm 。測(cè)定血藥 濃度的線性范 圍為 0.020- 7.9g?mL - 1 ,其相關(guān)系數(shù)為 (r=0.9993) ,最低檢測(cè)限為 5?gL-1 。方法回收率為 95.199.0% 。汪震、劉東等 20 建 立測(cè)定血漿加巴噴丁濃度的高效液相色譜法。方法 : 待測(cè)血漿中加入內(nèi)標(biāo)替米沙坦后 , 用乙腈沉淀蛋白 ,鄰苯二甲醛衍生化 ,進(jìn)行高效液相熒光檢測(cè)。 色譜柱為 Symm etryC18 柱 ,流動(dòng)相為 0.05mo l?L-1 磷酸二氫鉀溶液 - 乙腈 (57:43) ,pH 3

25、.6。流速 0.8 m l?mi n-1, 激發(fā)波長(zhǎng) 330 nm ,發(fā)射波長(zhǎng) 440 nm 。結(jié)果 : 線性范圍為 0.02716.35 m g?L-1, r=0.9973 , 低、中、高三種濃度的平均回收率分別為91.9%,99.2%, 9 6.0%,最低檢測(cè)限為0.027mg ?L-1。潘保良21 建立了一種綿羊血漿中阿維菌素(AVM)熒光高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)法。用甲醇提取綿羊血漿中的AVM并用ODS-C18 固相萃取法進(jìn)行純化 ,純化后的 AVM 經(jīng)干燥處理后 ,用三氟乙酸酐和 N- 甲基咪唑?qū)ζ溥M(jìn)行熒光衍生化 ,用熒光 HP LC 進(jìn)行檢測(cè)。本方法的最低檢測(cè)限為 0.1 n/

26、g ml 。在血漿 AVM 含量 2.550.0 /g ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 ,該方法靈敏度高 ,干擾少 ,重復(fù)性好。張曉萍、王國(guó)民 22 將 血漿中兒茶酚胺類化合物 (CAs) 與二苯基硼酸 -2- 氨基乙醇在堿性條件下生成配合物 ,用正辛醇將從正庚醇中提取后 ,與 1,2- 二苯基乙二胺 (DPE)在適宜的條件下發(fā)生衍生化反應(yīng) ,生成相應(yīng)的二苯基喹喔啉衍生物。這些衍生物在島律 Shim -Pack CLC-ODS 柱上 ,用甲醇 -0.50mo l/L Tris- H Cl 緩沖液等度洗脫 , 16m in 能完全分離 ; 在 W atersNova-pack C18 柱上 ,用甲醇

27、0.01 mo 1/LTris-HC l 緩沖液等度洗脫 ,10mi n 能完全分離 ; 熒光檢測(cè)波長(zhǎng) : 6文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word 版本可編輯 .歡迎下載支持.xe350nm ,me480nm- 去甲腎上腺素 (NB) 檢測(cè)限為 10fmo l/100 l、腎上腺素(E)和多巴胺 (DA) 的檢測(cè)限分別為 10fm ol/100 l 和 12.5fmo I/100l。毛葉萌 23 建立一種高效液相色譜法 (HP LC) 用于測(cè)定血漿中的威替米星含量。方法 : 樣品采用乙腈蛋白沉淀法 ,并以奈替米星作為內(nèi)標(biāo) , 將威替米星與氯甲酸芴甲酯 (FM OC-C1)衍生化后在反相 C1

28、8 柱上達(dá)到分離 ,以熒光檢測(cè)器檢測(cè)反應(yīng)生成的衍生物。 試驗(yàn)中對(duì)不同衍生化條件進(jìn)行了考察。 流動(dòng)相為乙腈 - 水 (95:5) ,熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng) 263 nm , 發(fā)射波長(zhǎng) 315nm 。結(jié)果 : 威替米星線性范圍是 0.02 45 mg ?L-1, 定量限為 0.02 mg ?L-1 。血漿中的相對(duì)平均回收率為99.84%。 重現(xiàn)性好 ,靈敏度高。3.2 柱后衍生 - 高效液相色譜法柱后衍生法是樣品經(jīng)色譜柱分離后,在洗脫液中加入衍生試劑,使進(jìn)行反應(yīng)后 ,檢測(cè)衍生物。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是 : 可以自動(dòng)連續(xù)進(jìn)行 , 操作簡(jiǎn)便 ,產(chǎn)物不需要高的穩(wěn)定性 ,只需有好的重復(fù)性 , 能定量進(jìn)行即可 ; 且被

29、分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離 ,容易選用已有的分析方法。缺點(diǎn)是 : 柱后衍生化是洗脫液同試劑混合后經(jīng)反應(yīng)器到達(dá)檢測(cè)器,可造成峰展寬 ,降低分辨率 ; 衍生反應(yīng)最好在2mi n 內(nèi)完成,對(duì)于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時(shí)間來(lái)說(shuō), 可供選擇的反應(yīng)有限;需要額外的設(shè)備 ( 柱后衍生化反應(yīng)器 );避免過(guò)量的試劑造成干擾。堡二里、陳青俊等 24 研 究柱后光化學(xué)衍生熒光檢測(cè)高效液相色譜分離測(cè)定豬肝中維生紊B1 的方法。采用C18 柱 ,以含有 2% 乙腈的 pH 4.0 磷酸鹽緩沖液 (0.1m ol/L) 作流動(dòng)相反相分離 ,豬肝中的維生素 B1 可與其它雜質(zhì)達(dá)到完全分離。色譜流出液在柱后與 0.75

30、% Na2SO3-4% NaOH 的混合試劑溶液在線匯合后流經(jīng)一聚四氟乙烯 (PTFE)細(xì)管制成的光化學(xué)反應(yīng)器時(shí) ,維生素 B1 轉(zhuǎn)化為強(qiáng)熒光產(chǎn)物 ,由熒光檢測(cè)器測(cè)定。在最佳條件下 ,進(jìn)樣 20 l,檢測(cè)限為 3.8g/L,工作曲線的線性范圍為0.03310mg /L ,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)為 1.8% , 標(biāo)準(zhǔn)加入回收率為97102%。姜莉 ,趙守成 25 用 柱后衍生一熒光檢測(cè)高效液相色譜法快速測(cè)定牛奶中鏈霉素殘留量 , 牛奶樣品經(jīng)磷酸溶液提取, 提取液用苯磺酸陽(yáng)離子交換柱和C18固相萃取柱凈化,鏈霉素殘留液用甲醇從C18 固相萃取柱上洗脫,經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸干 , 殘?jiān)?0.01mo /l L 庚烷磺酸鈉溶液溶解,用氫氧化鈉溶液為衍生試劑,柱后衍生一高效液相色譜熒光檢測(cè)器在激發(fā)波長(zhǎng)263 nm 和發(fā)射波長(zhǎng)435 nm 測(cè)定。方法線性范圍為0.01 0.10 m g/ kg; 在 0.01 0.10 mg / kg 范圍 ,三個(gè)添加水平的回收率為78.380.2% , 變異系數(shù) (CV) 為 7.4% 12.4%,方法檢出限為0.005 mg / kg。7文檔來(lái)源為 :從網(wǎng)絡(luò)收集整理.word