一種新的吡咯多胺鎳配合物的合成及其與DNA的作用研究

1、·研究論文·一種新的吡咯多胺鎳配合物的合成及其與 DNA 的作用研究鄒敏劉叔文周春瓊*(南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 廣州 510515)摘要 合成了一種新的吡咯-多胺金屬鎳配合物, 并用質(zhì)譜、核磁、紅外、摩爾電導(dǎo)、元素分析等多種手段分析了配體和配合物的結(jié)構(gòu); 紫外、熒光和黏度等方法分析了鎳配合物與小牛胸腺 DNA (CT DNA)的作用, 發(fā)現(xiàn)配合物以插入方 式與 DNA 結(jié)合; 電泳法研究發(fā)現(xiàn)配合物在反應(yīng)溫度為 5055 間可將超螺旋 pBR 322 DNA 完全切割為缺刻產(chǎn)物; 細(xì) 胞水平抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明該鎳配合物具有一定的抗肝癌活性.關(guān)鍵詞 吡咯; 多胺; 鎳配合物; DNA;

2、 抗肝癌活性Synthesis and Studies on DNA-binding of a New Nickel Complex withPyrrole and PolyamineZhou, Chunqiong*Zou, MinLiu, Shuwen(School of Pharmaceutical Sciences, Southern Medical University, Guangzhou 510515)Abstract A new nickel complex of pyrrole-polyamine had been synthesized and its structure h

3、ad beencharacterized by MS, 1H NMR, IR, molar conductance and elementary analysis. CT DNA-binding of nickel complex had been investigated using UV spectra, fluorescent spectra and viscosity. The results have proved that the mode of binding of nickel complex to CT DNA is the intercalative mode. The c

4、omplex can com-pletely translate supercoil DNA into the nicked DNA between 50 and 55 . The complex has antitumor ac-tivity on HepG2, a liver tumor derived cell line.Keywords pyrrole; polyamine; nickel complex; DNA; antitumor activity得到重視, 有研究發(fā)現(xiàn)吡咯-多胺銅配合物4具有很好的 DNA 切割活性. 本文合成了一種新的多胺-吡咯鎳配 合物, 研究了配合物與 D

5、NA 的作用, 初步研究了鎳配合物的抗肝癌活性, 這對后期工作中設(shè)計(jì)更有效的人工 核酸酶及其抗腫瘤藥物提供了重要的研究基礎(chǔ)和參考價(jià)值.多胺化學(xué)核酸酶對新型腫瘤、抗艾滋病化學(xué)藥物的定向設(shè)計(jì)及其基因治療等方面均有重要意義和應(yīng)用前 景, 其原因在于多胺類化合物能與多種分子配位, 不僅 能在體外與 DNA 特異性結(jié)合, 而且還能穿透細(xì)胞膜、 穿過核膜, 進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)抑制基因表達(dá). 如杜俊等發(fā)現(xiàn) 的單取代大環(huán)多胺銅-鉑異核配合物具有較好的 DNA 切割活性1; 多胺類 Zn(II)配合物在 H2O2 存在下也能水 解斷裂 DNA2; 二水楊醛三乙基四胺鎂配合物可將超 螺旋 DNA 水解為線性產(chǎn)物3. 為

6、提高多胺化合物對 DNA 的特異選擇性, 將 DNA 識別體系吡咯、咪唑、吡 咯-咪唑等聚酰胺化合物與多胺類化合物結(jié)合, 合成特 異性識別 DNA 能力更高的人工核酸切割試劑的研究正1實(shí)驗(yàn)部分1.1 試劑與儀器小牛胸腺 DNA, 購自華美生物工程公司; 溴化乙 錠(EB)購自舒伯韋公司; Hep G2 肝癌細(xì)胞株由南方醫(yī)科* E-mail: huagongzhoucq163 Received September 4, 2009; revised November 9, 2009; accepted November 26, 2009.廣東省自然科學(xué)基金(No. 7300452)資助項(xiàng)目.482

7、化 學(xué) 學(xué) 報(bào)Vol. 68, 20101.2.2鎳配合物的合成和表征將上述配體(0.3044 g, 0.667 mmol)溶于 25 mL DMF 溶液中, 將 NiSO46H2O (0.178 g, 0.667 mmol)溶于 10 mL 水中, 再將其在攪拌下加入配體溶液中, 室溫?cái)?20 h, 減壓蒸餾除去溶劑, 將殘?jiān)眉状既艹? 濾液置于冰 箱中冷卻得到藍(lán)綠色固體, 過濾、水洗、干燥, 得到產(chǎn) 品 NiL. IR (KBr) : 3435.94 (OH), 3336.29 (OH),大學(xué)藥學(xué)院抗病毒研究中心保存; 其他試劑均為國產(chǎn)分析純試劑. PE-240C 元素分析儀; ZQ40

8、00 液相色譜-質(zhì)譜 聯(lián)用儀; Shimadzu FTIR-8300 紅外光譜儀, KBr 壓片;Bruker Am-300 MHz 核磁共振儀; DDS-11A 電導(dǎo)率儀; TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計(jì); RF-5301PC 熒光光譜儀 ; 烏 氏黏度計(jì) ( 毛細(xì)管內(nèi) 徑 0.5 0.6 mm); BECKMAN 34 pH 計(jì); Tanon EPS300 電泳儀; Tanon HE-90 電泳槽; Alpha Hp 3400 熒光/可見數(shù)字圖像分析儀; GENios Pro TECAN 多功能酶標(biāo)儀.1.2 配體和鎳配合物的合成及表征通過元素分析、質(zhì)譜、核磁、紅外、熔點(diǎn)測定、摩

9、 爾電導(dǎo)等多種手段表征, 配體和配合物結(jié)構(gòu)式4見圖 1.3268.10 (NH),1614.19 (CO),3124.79 (NH),1527.55 (CC),2957.21 (CH),1498.47 (CC), (CNO2, CN),1420.54 (NCH3, CN), 1311.181137.39 (CH2NH, CN), 1102.69 (CH2NH, CN),846.28 (CNO2, CN), 779.02 (NH), 750.28 (NH).FAB-MS: 639.1 (MH). Anal. calcd for C H N -18 30 8O12SNi: C 33.71, N 1

10、7.47, H 4.71; found C 33.65, N17.70, H 4.52. 比較配體與配合物的紅外光譜圖: 配合 物在 3435.94 和 3336.29 cm1 處出現(xiàn)了兩個(gè)羥基峰, 根據(jù)質(zhì)譜和元素分析結(jié)果表明配合物中存在水分子, 再結(jié) 合電導(dǎo)率儀分析結(jié)果表明兩個(gè)水分子中的氧與 Ni 發(fā)生 配位, 形成 NiO 鍵; 配體中位于 3276.46 和 3137.79cm1 處有兩個(gè)不同位點(diǎn)的氨基的伸縮振動(dòng)峰, 當(dāng)形成 配合物之后均向低頻遷移至 3268.10 和 3124.70 cm1, 這表明金屬離子與氨基上的氮原子發(fā)生了配位; 配體中位于 1655.48 cm1 處的 CO

11、的伸縮振動(dòng)峰在配合物中 向低頻遷移至 1614.19 cm1 處, 說明金屬離子與 CO 上的氧原子配位形成 NiO 鍵. 配制 1 mmol/L 的鎳配合物的水溶液, 其摩爾電導(dǎo)率為 205 Scm2mol1; 相同圖 1 配體及鎳配合物的結(jié)構(gòu)式Figure 1 Structure of ligand and nickel complex1.2.1 配體的合成和表征參考文獻(xiàn)4方法合成了配體 N1,N8-二(1-甲基-4-硝 基吡咯-2-?；?三乙基四胺. m.p. 174176 , 與文 獻(xiàn)4基本吻合. 1H NMR (DMSO, 300 MHz), : 8.42 (t, J5.82 Hz,

12、 2H, H7), 8.20 (d, J1.60 Hz, 2H, H3), 7.40 (d, J1.96 Hz, 2H, H1), 3.85 (s, 6H, H4), 3.28 (t, J6.34Hz, 4H, H8), 2.65 (t, J6.33 Hz, 4H, H9), 2.58 (s, 4H, H11), 2.01 (t, J7.10 Hz, 2H, H10), IR (KBr) : 3276.46(NH), 3137.79 (NH), 2931.3 (CH), 2839.40 (CH), 1655.48 (CO), 1558.00 (NH), 1532.03 (CC),1500.64

13、 (CC), 1422.45 (NCH3, CN), 1310.92 (C NO2, CN), 1211.63 (CONH, CN), 1144.35 (CH2 NH, CN), 1107.02 (CH2NH, CN), 852.22 (C NO2, C N), 813.63 (N H), 751.12 (N H), 707.20濃度的 NiSO4 水溶液的摩爾電導(dǎo)率為 219 Scm2mol ,1由結(jié)果分析: 鎳配合物和鎳鹽的摩爾電導(dǎo)率值很接近,鎳鹽中的鎳離子與六個(gè)水分子配位形成的配合物, 內(nèi)外 界陰陽離子個(gè)數(shù)比為 11, 因此多胺-吡咯鎳配合物內(nèi) 外界陰陽離子個(gè)數(shù)比也為 11, 說明硫酸根

14、離子未與 金屬離子配位.1.3 鎳配合物與 CTDNA 作用的實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 吸收光譜實(shí)驗(yàn)在參比池和樣品池中分別加入同樣體積的緩沖溶 液和配合物溶液, 配合物的濃度固定為 1.0 ×10 5 mol/L, 在 200400 nm 范圍內(nèi)測定配合物的吸收光譜; 然后依次向參比池和樣品池中滴加相同體積(數(shù)微升)的 CT DNA 溶液, 同上方法測定吸收光譜.1.3.2 NiL 對 DNA-EB 熒光光譜的影響實(shí)驗(yàn)固定 CT DNA 濃度為 4.05×105 mol/L, 加入一定 體積的 EB, 使 DNA 與 EB 的物質(zhì)的量的比為 11, 然 后進(jìn)行鎳配合物對 DNA-

15、EB 復(fù)合物的熒光強(qiáng)度的影響 實(shí)驗(yàn); 儀器條件為: 狹縫寬度: EXEm5 nm; 掃描速 度: 1500 nm/min; 激發(fā)波長: 520 nm; 發(fā)射譜范圍:(NO2), 597.54 (NO2). Anal. calcd forC18H26N8O6:C48.00, N 24.88, H 5.78; found C 47.96, N 28.92, H 5.82.FAB-MS: 473.0 (MNa).鄒敏等：一種新的吡咯多胺鎳配合物的合成及其與 DNA 的作用研究483No. 6540700 nm5.1.3.3 熒光 Scatchard 圖實(shí)驗(yàn)CT DNA 的濃度固定不變, 以不同物質(zhì)的

16、量濃度比c(NiL)/c(CT DNA)加入配合物, 室溫反應(yīng) 1 h, 分別用100 µg/mL 的 EB 溶液進(jìn)行滴定, 測量溶液的熒光強(qiáng)度. 儀器條件為: 激發(fā)波長: 520 nm, 狹縫寬度: EXEm10 nm, 發(fā)射譜范圍: 540700 nm. 由熒光數(shù)據(jù)算出 r 和 r/cf (r 為鍵合 EB 與總的核酸濃度的比值, cf 為游離的 EB 濃度), 根據(jù) Scatchard 方程: r/cfk(nr), 以 r/cf 對 r 作 圖, 所得直線的斜率 k 即為 EB 與 DNA 的表觀結(jié)合常數(shù), 由斜率和截距算出 n 即為每個(gè)核苷酸鍵合 EB 的位點(diǎn) 數(shù)6.1.3.

17、4 CT DNA 溶液黏度測定CT DNA 濃度固定為 1.4×104 mol/L, 金屬配合物 或 Ni2濃度依次增大, 溫度恒定在(25±0.1) , 反應(yīng)半2結(jié)果與討論2.1 鎳配合物與 CT DNA 的作用2.1.1吸收光譜吸收光譜是研究配合物與 DNA 相互作用的比較直 接的一種方法. 當(dāng)配合物與 DNA 以插入方式結(jié)合時(shí), 通常發(fā)生減色效應(yīng), 并伴有一定程度的紅移, 減色效應(yīng) 的程度通常與配合物和 DNA 作用的強(qiáng)弱有關(guān); 當(dāng)配合 物以其它模式與 DNA 作用時(shí), 光譜的變化相對較小. 圖 2 為加入 CT DNA 前后鎳配合物的吸收光譜變化圖, 從圖中可以看出

18、, 隨著 DNA 的加入, 配合物的吸收峰 伴隨有減色現(xiàn)象, 其減色率可達(dá)到 18%, 表明配合物與 DNA 作用較強(qiáng), 可能是以插入模式結(jié)合. 同時(shí)根據(jù)下列7,8:方程式計(jì)算了配合物與 DNA 的 結(jié)合常數(shù) KbDNA/(a f) DNA/(b f) 1/Kb(b f), 式中 DNA表示 DNA 的濃度, , 和 分別代表 A/NiL、小時(shí)后, 進(jìn)行測量, 以(/0)1/3 對 CNi/CDNA (NiL 或 Ni2a fbobsd自由鎳配合物的摩爾吸光系數(shù)和完全結(jié)合后的配合物的摩爾吸光系數(shù), 以DNA/(af)對DNA作圖, 通過 直線的斜率和截距計(jì)算得到配合物與 DNA 的結(jié)合常數(shù)與

19、CT DNA 濃度的比值)作圖, 其中 代表出現(xiàn)配合物或Ni2時(shí)的黏度, 代表 CT DNA 單獨(dú)存在時(shí)的黏度, 測0試液的相對黏度計(jì)算公式 (tt0)/t0, 其中 t0 為緩沖液流經(jīng)毛細(xì)管所需的時(shí)間, t 為 DNA 溶液(或含濃度不等的NiL-DNA 或 Ni2-DNA 溶液)流經(jīng)毛細(xì)管所需的時(shí)間.1.4 鎳配合物與 pBR322 DNA 的電泳實(shí)驗(yàn)用 5 mmol/L Tris-HCl (pH 7.50, 5 mmol/L NaCl)緩 沖溶液配制一定濃度的配合物溶液, 加入 0.7 µL 的 pBR322 DNA (0.5 µg/µL), 總體積為 20

20、 µL, 混勻后, 分 別在一定溫度下恒溫水浴反應(yīng) 5 h, 通過加入 EDTA 和 溴酚藍(lán)終止反應(yīng), 然后瓊脂糖凝膠電泳分析配合物切割 DNA 的結(jié)果.1.5 MTT 實(shí)驗(yàn)通過 MTT 法進(jìn)行鎳配合物抗肝癌活性的體外篩選. 將肝癌細(xì)胞 HepG2 以 5×104 個(gè)/mL 接種于 96 孔板中, 每孔加 200 µL, 培養(yǎng)液為含 10%的 FBS, 5000 U/L 青霉 素、5000 U/L 鏈霉素的 DMEM 培養(yǎng)基. 在 37 , 5% CO2 的條件下培養(yǎng). 將合成的配合物溶解于 DMSO 中配成10 mmol/L 母液, 用培養(yǎng)液配成終濃度分別為 6

21、.3, 12.5,25, 50, 100, 200, 400, 800 µmol/L 的加藥培養(yǎng)基. 細(xì)胞在96 孔板中培養(yǎng) 24 h 后, 吸去上清, 換成各濃度的加藥培 養(yǎng)基, 繼續(xù)培養(yǎng) 72 h. 棄培養(yǎng)基, 每孔加入 100 µL 含 0.5 mg/mL MTT 的培養(yǎng)液, 再孵育 3 h. 棄上清, 每孔加 100µL DMSO, 充分混勻, 在酶標(biāo)儀上測 570 nm 處的吸光 值. 陽性對照藥物采用順鉑(Cisplatin) 和 5- 氟尿嘧啶 (5-FU). 實(shí)驗(yàn)至少重復(fù) 2 次, 抑制率(%)(1T/C)×100%, 其中 T, C 分

22、別表示實(shí)驗(yàn)孔和空白對照孔的吸光 值, 采用 CalcuSyn 軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50).51Kb 為 2.18×10 (Lmol ).圖 2 不同濃度 CT DNA 條件下 NiL 的作用的吸收光譜Figure 2 Absorption spectra of NiL in the presence of various concentration of CT DNA(1) c(DNA)/c(NiL)0; (2) c(DNA)/c(NiL)0.04; (3) c(DNA)/c(NiL)0.12;(4) c(DNA)/c(NiL)0.2; (5) c(DNA)/c(NiL)0.2

23、7484化 學(xué) 學(xué) 報(bào)Vol. 68, 20102.1.2NiL 對 DNA-EB 熒光光譜的影響圖 3 為配合物與 DNA-EB 體系作用的熒光光譜圖, 從圖 中可以看出 : 隨著配合 物濃度的不 斷增加 , DNA-EB 復(fù)合物的熒光明顯發(fā)生淬滅. EB 能專一性地插 入 DNA 雙螺旋或二螺旋內(nèi)部的堿基對之間, 使熒光顯 著增強(qiáng), 當(dāng) EB 從堿基對中被擠出來或雙螺旋減少時(shí), 熒光發(fā)生淬滅, 因而可用作結(jié)構(gòu)探針. 根據(jù)圖 3 說明配 合物與 DNA 在溶液中靠近時(shí), 可能是吡咯環(huán)插入到 DNA 雙鏈之間而擠出一部分 EB, 從而導(dǎo)致熒光淬滅, 由此說明配合物可能是以插入方式與 DNA 結(jié)

24、合. 由于 導(dǎo)致熒光淬滅的原因較多, 是否確實(shí)是因?yàn)殒嚺浜衔锊?入 DNA 后而影響了 DNA-EB 體系的熒光淬滅, 還需用 熒光 Scatchard 圖作進(jìn)一步地驗(yàn)證.圖 4 不同濃度 NiL 條件下 EB 與 DNA 作用的熒光 scatchard圖Figure 4 Fluorescence satchard plots for binding of EB to DNAin the presence of various concentration NiL(1) c(NiL)/c(DNA)0; (2) c(NiL)/c(DNA) 0.025; (3) c(NiL)/c(DNA) 0.12

25、52.1.4粘度實(shí)驗(yàn)粘度測定一般被認(rèn)為是確定鍵合模式最有力的證 據(jù)之一, 粘度對分子長度變化非常敏感, 當(dāng)小分子配合 物以插入模式與 DNA 作用時(shí), DNA 相鄰堿基對的距離 會(huì)增大以容納插入的配體, 導(dǎo)致螺旋伸長, DNA 溶液的 粘度增加; 當(dāng)配合物以靜電或溝面結(jié)合等非插入模式與 DNA 作用時(shí), DNA 溶液的粘度無明顯變化; 而以部分 插入方式與 DNA 作用時(shí), 則可能使 DNA 的雙螺旋扭NiL 的作用的圖 3 不同濃度 NiL 條件下 DNA-EB 復(fù)合物體系熒光發(fā)射光 譜Figure 3 Fluorescence emission spectra of DNA-EB comp

26、lex in various concentration of NiL(1) No NiL; (2) 1 µmol/L NiL; (3) 2 µmol/L NiL; (4) 5 mol/L NiL; (5) 10mol/L NiL; (6) 20 mol/L NiL; (7) 25 mol/L NiL7結(jié), 使其分子粘度減小 . 從圖 5 可以看出, 鎳離子加入CT DNA 溶液中, 隨著離子濃度的增大, DNA 粘度值逐 漸減小, 可能是水合鎳離子物部分插入同時(shí)伴有靜電結(jié)合方式與 DNA 作用的結(jié)果; 鎳配合物加入 CT DNA 溶 液中, 隨著配合物濃度的增大, DNA

27、 粘度值逐漸增加,據(jù)此排除了配合物中可能殘留的金屬離子對 DNA 粘度 變化的影響, 由此可確定配合物是以插入方式與 DNA2.1.3熒光 Scatchard 圖熒光 Scatchard 圖是研究配合物與 DNA 作用方式的 一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法, 參考文獻(xiàn)6, 以 r/cf 對 r 作 圖, 繪制出熒光 Scatchard 圖 4. 通常當(dāng)藥物以插入方式 與 DNA 鍵合時(shí), 藥物與 EB 對 DNA 上同一位點(diǎn)的結(jié)合 是競爭性的, 則 k 值變化, n 值不變; 當(dāng)藥物以靜電方式 與 DNA 結(jié)合時(shí), 藥物與 EB 對 DNA 上不同位點(diǎn)的結(jié)合 是非競爭性的, 則 n 值變化, k 值不

28、變; 當(dāng)藥物與 DNA 的結(jié)合存在插入和非插入兩種方式時(shí), k 和 n 都變化9. 從圖 4 可以看出, 隨著 DNA 溶液中配合物濃度的增大, k 值逐漸減小, 計(jì)算得到 n 值在 0.190 附近, 變化不大, 這說明配合物是以競爭方式來抑制 EB 與 DNA 的結(jié)合, 即配合物以插入方式與 DNA 結(jié)合.作用的,此結(jié)論與吸收光譜、熒光光譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致.圖5 NiL或Ni2對DNA黏度的影響Effect of NiL or Ni2 on the relative viscosity ofFigure 5DNA鄒 敏等：一種新的吡咯多胺鎳配合物的合成及其與 DNA 的作用研究485No. 6

29、2.2 鎳配合物與 pBR322 DNA 的作用瓊脂糖凝膠電泳研究了反應(yīng)溫度在 3755 之間 配合物切割 pBR322 DNA 的情況如圖 6, 反應(yīng)溫度超過55 的情況沒有顯示在圖中, 因 DNA 在該條件下將發(fā) 生熱變性而沉淀在膠孔中. 由電泳圖分析, 反應(yīng)溫度低 于 50 時(shí), DNA 切割效果不佳; 當(dāng)反應(yīng)溫度在 5055之間時(shí) CCC 帶(超螺旋 DNA)可以完全切割為 OC 帶 (缺刻 DNA), 由此說明配合物切割 DNA 合適的反應(yīng)溫 度范圍在 5055 之間. 在上述研究的基礎(chǔ)上, 進(jìn)一步研究 50 時(shí)不同濃度配合物切割 pBR322 DNA 的情 況如圖 7, 發(fā)現(xiàn)隨著配

30、合物濃度的不斷增大, CCC 帶的 量逐漸減少, OC 帶的量逐漸增加, 當(dāng)配合物濃度達(dá)到0.5 mmol/L 時(shí), 可將大部分 CCC 帶切割為 OC 帶. 由此 說明配合物在較低的濃度下, 表現(xiàn)出較好的切割 DNA 的活性, 是一種較好的化學(xué)核酸酶.細(xì)胞的體外抑制活性. 與陽性對照藥物 Cisplatin 和 5FU對比, 配合物對 HepG2 肝癌細(xì)胞的體外抑制活性強(qiáng)于5FU, 而弱于 Cisplatin, 說明鎳配合物具有一定的抗肝 癌活性.圖 8 鎳配合物對 HepG2 肝癌細(xì)胞的體外活性Figure 8 Cytotoxicity against HepG2 liver-cancer

31、 cell of nickel complex表 1 藥物對 HepG2 肝癌細(xì)胞的 IC50 測定值Table 1IC50 measurementsof drugsagainstHepG2liver-cancer cellIC50Drug/(µmolL1)24 h48 h72 h圖 6 不同溫度下 NiL 對 pBR322 DNA 切割的瓊脂糖凝膠電泳圖Figure 6 Agarose gel electrophoresis patterns for the cleavage of pBR322 DNA by NiL at various temperatureLane 1: DN

32、A 37 ; Lane 2: DNANiL 37 ; Lane 3: DNANiL 45 ;Lane 4: DNANiL 50 ; Lane 5: DNANiL 55 ; CCC: supercoiled; OC: nicked; cleavage condition: 0.60 mmol/L NiLNi-LCisplatin5FU32870.91040039028.8550020339.9540與陽性對照藥物對比,分析鎳配合物抗腫瘤活性的可能機(jī)理如下. 5FU 可抑制胸腺嘧啶核苷合成酶, 從而干擾 DNA 的生物合成, 還主要?dú)缂?xì)胞增值周期中的 S 期, 但不是典型的細(xì)胞周期特異性藥物;

33、而 Cisplatin 在體內(nèi)先將氯解離, 然后與 DNA 上的堿基共價(jià)結(jié)合, 形成雙鏈間的交叉聯(lián)接或單鏈內(nèi)兩點(diǎn)的聯(lián)結(jié)而破壞 DNA 的結(jié)構(gòu)和功能, 屬細(xì)胞周期非特異性藥物. 電泳實(shí) 驗(yàn)表明鎳配合物可以使超螺旋 DNA 斷裂成缺刻產(chǎn)物, 從而直接破壞 DNA 的結(jié)構(gòu), 其作用機(jī)理可能類似于 Cisplatin, 屬細(xì)胞周期非特異性藥物. Cisplatin 是目前實(shí) 體腫瘤的一線治療藥物, 在腫瘤的化學(xué)治療上被廣泛使 用, 因此進(jìn)一步優(yōu)化鎳配合物的結(jié)構(gòu), 將可能獲得更好 的抗腫瘤活性, 成為類似 Cisplatin 的抗腫瘤藥物, 用于 實(shí)體腫瘤的化學(xué)治療.圖 7 50 不同濃度 NiL 對

34、pBR322 DNA 切割的瓊脂糖凝膠電泳圖Figure 7 Agarose gel electrophoresis patterns for the cleavage of pBR322 DNA by various temperature NiL at 50 Lane 1: no NiL; Lane 2: 0.05 mmol/L NiL; Lane 3: 0.10 mmol/L NiL; Lane 4:0.25 mmol/L NiL; Lane 5: 0.50 mmol/L NiL; CCC: supercoiled; OC: nicked2.3 配合物抗肝癌活性通過 MTT 法測定了不同

35、濃度的鎳配合物在不同的 作用時(shí)間下對 HepG2 肝癌細(xì)胞的抑制效果, 來確定配 合物的體外抗肝癌活性, 測定結(jié)果見圖 8 和表 1. 結(jié)果 顯示: 在低濃度時(shí)鎳配合物對 HepG2 肝癌細(xì)胞的增殖 沒有表現(xiàn)出明顯的抑制作用; 進(jìn)一步增大配合物濃度, 體外抑制活性逐漸增強(qiáng), 當(dāng)藥物作用時(shí)間分別為 24, 48 和 72 h 時(shí), 其 IC50 測定值分別為 328, 390 和 203 µmol/L, 說明恰當(dāng)延長作用時(shí)間可以提高配合物對 HepG2 肝癌3結(jié)論合成了一種新的三乙基四胺-吡咯鎳金屬配合物,通過多種手段對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征. 紫外、熒光、黏度 等方法對其與 CT DNA 的作用方式進(jìn)行了研究, 發(fā)現(xiàn) CT DNA 的加入使配合物吸收光譜發(fā)生減色效應(yīng); 配合 物的加入導(dǎo)致EB-DNA 發(fā)生熒光淬滅; 隨著配合