COC暴露及RAAS通路基因MicroRNA結(jié)合區(qū)位點(diǎn)多態(tài)與女性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)研究

1、COO露及RAAS通路基因MicroRNA結(jié)合區(qū)位點(diǎn)多態(tài)與女性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)研究復(fù)方口服避孕藥（combinedoralcontraceptive,COC是一種簡(jiǎn)便、高效的避孕節(jié)育方法，在全球應(yīng)用廣泛，據(jù)估計(jì)目前全世界有將近一億的育齡婦女青睞選擇COCS行避孕。除確切的避孕效果之外，COC還具有許多其他方面的健康益處：可以預(yù)防貧血、異位妊娠、骨質(zhì)疏松癥，治療功能失調(diào)性子宮出血、改善多囊卵巢綜合癥及高雄激素水平過(guò)高癥狀、緩解子宮內(nèi)膜異位癥、治療子宮內(nèi)膜增生及息肉等。然而人們更加關(guān)注的是COC可能產(chǎn)生的嚴(yán)重不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)：如升高血壓、增加心肌梗塞、靜脈血栓栓塞及腦卒中等心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)等

2、。腦卒中作為COC勺一種罕見(jiàn)且嚴(yán)重的不良反應(yīng)，一直為研究者所關(guān)注。在不用人群中所開(kāi)展的COC與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)研究所得到的結(jié)果不盡相同,就算是同樣使用COCK婦女也僅有一小部分發(fā)生腦卒中，這些都提示著特殊的遺傳因素能夠影響腦卒中的易感性。腎素-血管緊張素-醛固酮通路（reninangiotensinaldosteronesystem,RAAS）因其維持血管功能、調(diào)節(jié)動(dòng)脈血壓等方面的重要作用成為腦卒中分子遺傳學(xué)研究的重要候選基因通路。同時(shí)COC中的雌激素可以激活RAAS1路）如升高AGTAGTR1勺表達(dá)水平）進(jìn)而影響心血管疾病的發(fā)生。因此,RAAS通路很有可能是介導(dǎo)雌激素與腦卒中發(fā)病增加的重

3、要機(jī)制之一。研究發(fā)現(xiàn)MicroRNA （miRNA）在調(diào)控RAAS通路相關(guān)基因的表達(dá)方面起著著重要的作用,miRNA通過(guò)與靶mRNAS勺3UTRs非翻譯區(qū)）不完全互補(bǔ)配對(duì)）從而抑制翻譯或加速mRNA勺退化降解。而靶基因miRNA結(jié)合區(qū)的單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms,SNP位點(diǎn)能夠影響miRNA與靶區(qū)域的結(jié)合效率，引起miRNA調(diào)控作用發(fā)生變化，可能會(huì)誘導(dǎo)相應(yīng)的表型-疾病狀態(tài)。RAAS通路AGTR基因上的rs5186位點(diǎn)的基因突變使其與miR-155的結(jié)合效能發(fā)生改變，導(dǎo)致AGTRl的表達(dá)異常，進(jìn)而影響高血壓的發(fā)生。但目前尚無(wú)RAAS通路miRNA吉

4、合區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)與女性腦卒中關(guān)聯(lián)研究的報(bào)道。本研究以CO（暴露及RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)域位點(diǎn)多態(tài)為切入點(diǎn),采用生物信息學(xué)技術(shù),篩選RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)域的SNP位點(diǎn)，并探討這些多態(tài)位點(diǎn)與中國(guó)女性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)，以期找出中國(guó)女性人群腦卒中遺傳易感性標(biāo)志物。并進(jìn)一步分析遺傳因素之間、遺傳因素與環(huán)境因素之間的聯(lián)合作用對(duì)腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響。研究結(jié)果對(duì)于完善腦卒中防治策略、指導(dǎo)安全避孕、促進(jìn)女性健康具有重要意義。目的本研究旨在系統(tǒng)探討CO（暴露、RAAS通路基因miRNAs結(jié)合位點(diǎn)多態(tài)與中國(guó)女性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析陽(yáng)性位點(diǎn)間、COC暴露與陽(yáng)性位點(diǎn)間的聯(lián)

5、合作用對(duì)腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響。方法在中國(guó)女性避孕藥具使用隊(duì)列研究的基礎(chǔ)上，采用病例-對(duì)照研究設(shè)計(jì)，收集隊(duì)列中確診的腦卒中新發(fā)病例共453例，并按年齡、地區(qū)匹配919例對(duì)照，收集研究對(duì)象的避孕史（COC暴露情況）、個(gè)人疾病史、生育史等流行病學(xué)資料，并采集空腹靜脈血。利用miRNA靶基因多態(tài)性位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件及SNP數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出RAAS通路基因miRNAs結(jié)合區(qū)域的多態(tài)性位點(diǎn)（AGTRlrs5186、AGTR2rs5194NR3C2rs5534AGTrs7079、AVPR1Ars11174811），采用TaqMan探針技術(shù)對(duì)篩選出的位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)分型。結(jié)果1.COC暴露、高血壓等影響因素與女性腦卒中發(fā)

6、病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)1.1COC暴露與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)COC使用者發(fā)生腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)是未使用者的1.31倍(OR=1.31,95%C:1.01-1.71),發(fā)生出血型腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)是未使用者的1.83倍(OR=1.83,95%C:1.25-2.66)，且腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)隨著COCR積使用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，趨勢(shì)性檢驗(yàn)P<0.001oCOCR積使用時(shí)間達(dá)到20年的女性發(fā)生出血型腦卒中及梗塞型腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)是未使用者的2.89倍及1.95倍。1.2腦卒中影響因素的單因素logistic回歸分析高血壓可以顯著升高女性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=12.18,95%CI:8.85-16.78),其中出血型

7、腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加6.90倍(OR=7.90,95%C:5.12-12.18)，梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增力口15.80倍(OR=16.80,95%C:10.84-26.05);高脂血癥可以使腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)則略有增加(OR=1.70,95%CI:1.35-2.16),其中梗塞型腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加0.97倍(OR=1.97,95%C:1.48-2.63)，但并不升高出血型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。2.RAAS通路基因miRNA結(jié)合區(qū)SNPs與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)2.1SNPS與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)調(diào)整年齡、地區(qū)、高血壓、高脂血癥等因素后,miR-155的靶基因AGTR1上的rS5186位點(diǎn)的多態(tài)性改變與

8、出血型腦卒中的發(fā)生成正關(guān)聯(lián),miR-539/miR-584的靶基因AGT上的rs7079位點(diǎn)的多態(tài)性改變與梗塞型腦卒中的發(fā)生成負(fù)關(guān)聯(lián)。與野生型rs5186AA基因型相比)雜合型rs5186AC及AC/CC基因型均可以增加出血型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.83,95%CI:1.10-2.97;OR=1.74,95%CI:1.06-2.87);與野生型rs7079CC基因型相比)雜合型CA及CA/AA基因型可以降低梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.62,95%CI:0.43-0.90;OR=0.58,95%CI:0.56-0.85)o2.2RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)位點(diǎn)多態(tài)與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的

9、分層分析對(duì)rs5186位點(diǎn)的基因型與出血型及梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了分層分析，發(fā)現(xiàn)在年齡55歲及BMI<24的人群中，攜帶rs5186AC/CC基因型可以升高出血型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.93,95%CI:1.02-3.646;OR=1.88,95%CI1.01-3.52);BMI<24的女性攜帶rs5186AC/CC基因型可以升高梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.94,95%CI:1.11-3.38)。對(duì)rs7079位點(diǎn)的基因型與出血型及梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了分層分析，在年齡55歲、患有高血壓或高脂血癥的人群中，攜帶AGT基因的rs7079CA/AA

10、基因型可以顯著降低塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.54,95%C:0.35-0.83;OR=0.62,95%C:I0.42-0.91;OR=0.60,95%C:I0.38-0.93)。3.聯(lián)合作用分析3.1rs5186位點(diǎn)和rs7079位點(diǎn)的聯(lián)合作用與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)rs5186位點(diǎn)和rs7079位點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)等位基因的聯(lián)合作用可以升高女性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(趨勢(shì)性檢驗(yàn)P=0.0037),隨著攜帶風(fēng)險(xiǎn)等位基因個(gè)數(shù)的增加，腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，尤其是梗塞型腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。3.2COC暴露和基因多態(tài)性的聯(lián)合作用與腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)與攜帶rs5186AA基因型且不使用COC勺個(gè)體相比,攜帶rs5186AA基因型且使用COC勺女性發(fā)生出血型腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加0.71倍(OR=1.71,95%C:1.18-2.48),而使用COC同時(shí)攜帶rs5186AC/CC基因型的女性發(fā)生出血型腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加1.81倍(OR=2.81,95%CI:1.45-5.64)o結(jié)論COC暴露、高血壓、高脂血癥是中國(guó)女性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素；miR-15