第三組的香菇多糖的生產(chǎn)

1、香菇多糖的簡介v香菇多糖：從香菇中分離純化的一種葡聚糖，是以香菇多糖：從香菇中分離純化的一種葡聚糖，是以增強(qiáng)增強(qiáng)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能為主的免疫增強(qiáng)劑。與細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能為主的免疫增強(qiáng)劑。與化療或放療聯(lián)用可發(fā)揮增效減毒作用?；熁蚍暖熉?lián)用可發(fā)揮增效減毒作用。 v藥理作用：具有免疫增強(qiáng)作用，其機(jī)制在體內(nèi)雖無藥理作用：具有免疫增強(qiáng)作用，其機(jī)制在體內(nèi)雖無直接殺傷腫瘤細(xì)胞作用，但可通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫直接殺傷腫瘤細(xì)胞作用，但可通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能而發(fā)揮抗腫瘤活性。功能而發(fā)揮抗腫瘤活性。v香菇多糖通過激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞香菇多糖通過激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞毒（誘導(dǎo)的細(xì)胞毒（

2、ADDC），發(fā)揮抗腫瘤活性；此外，），發(fā)揮抗腫瘤活性；此外，香菇多糖還能使腫瘤部位的血管擴(kuò)張和出血，導(dǎo)致香菇多糖還能使腫瘤部位的血管擴(kuò)張和出血，導(dǎo)致腫瘤出血壞死和完全退化。腫瘤出血壞死和完全退化。 香菇多糖的應(yīng)用香菇多糖的應(yīng)用v1.香菇多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用香菇多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用 v香菇多糖在治療胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等方面香菇多糖在治療胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等方面具有良好療效。作為免疫輔助藥物，香菇多糖主具有良好療效。作為免疫輔助藥物，香菇多糖主要用來抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移，提高腫瘤要用來抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移，提高腫瘤對化療藥物的敏感性，改善患者的身體狀況，延對化療藥物的敏感性，改善患者的

3、身體狀況，延長其壽命。長其壽命。 2.多糖在保健食品領(lǐng)域的應(yīng)用多糖在保健食品領(lǐng)域的應(yīng)用 v香菇多糖是一種特殊的生物活性物質(zhì)，是一香菇多糖是一種特殊的生物活性物質(zhì)，是一種生物反應(yīng)增強(qiáng)劑和調(diào)節(jié)劑，它能增強(qiáng)體液免疫種生物反應(yīng)增強(qiáng)劑和調(diào)節(jié)劑，它能增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能。和細(xì)胞免疫功能。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膙1.鞏固糖類化學(xué)的知識鞏固糖類化學(xué)的知識v2.掌握多糖的提取工藝掌握多糖的提取工藝v3.掌握多糖的檢測方法掌握多糖的檢測方法二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 在組織中，多糖多與蛋白質(zhì)以共價(jià)相結(jié)合，在組織中，多糖多與蛋白質(zhì)以共價(jià)相結(jié)合，所以在生化產(chǎn)品制備工藝中，往往第一步多用酶所以在生化產(chǎn)品制備工藝中，往往第一步

4、多用酶降解蛋白質(zhì)部分或用堿使多糖降解蛋白質(zhì)部分或用堿使多糖蛋白質(zhì)間的鍵裂蛋白質(zhì)間的鍵裂開，以促進(jìn)多糖在提取時的溶解。堿性提取可避開，以促進(jìn)多糖在提取時的溶解。堿性提取可避免多糖中硫酸基團(tuán)水解而破壞?，F(xiàn)多采用堿性提免多糖中硫酸基團(tuán)水解而破壞。現(xiàn)多采用堿性提取的同時用蛋白質(zhì)水解酶處理組織。提取液中存取的同時用蛋白質(zhì)水解酶處理組織。提取液中存在的蛋白質(zhì)可用普通蛋白質(zhì)沉淀劑使之沉淀，也在的蛋白質(zhì)可用普通蛋白質(zhì)沉淀劑使之沉淀，也可用其他方法使變性沉淀，如適當(dāng)調(diào)可用其他方法使變性沉淀，如適當(dāng)調(diào)pH和加熱等。和加熱等。v香菇子實(shí)體有含量較多的脂類的物質(zhì)，可以香菇子實(shí)體有含量較多的脂類的物質(zhì)，可以用石油醚、乙

5、醚等低級性溶劑除去脂溶性雜用石油醚、乙醚等低級性溶劑除去脂溶性雜質(zhì)。質(zhì)。v因?yàn)橄愎饺赓|(zhì)太厚，萃取時氯仿很難滲透至因?yàn)橄愎饺赓|(zhì)太厚，萃取時氯仿很難滲透至其深處，則萃取物的產(chǎn)率低。熱水提取法多其深處，則萃取物的產(chǎn)率低。熱水提取法多糖在糖在260nm和和280nm波長處有較明顯的吸收波長處有較明顯的吸收峰峰 三、項(xiàng)目器材與試劑三、項(xiàng)目器材與試劑v實(shí)驗(yàn)器材：組織搗碎機(jī)、恒溫水浴鍋、循環(huán)水式真實(shí)驗(yàn)器材：組織搗碎機(jī)、恒溫水浴鍋、循環(huán)水式真空泵、冷凍離心機(jī)、凝膠柱、脫脂棉、再字夾、紫空泵、冷凍離心機(jī)、凝膠柱、脫脂棉、再字夾、紫外分光光度計(jì)、容量瓶、試管、燒杯外分光光度計(jì)、容量瓶、試管、燒杯,紫外檢測儀、紫外

6、檢測儀、記錄儀、流量泵、記錄儀、流量泵、v試劑：氯仿、無水乙醇、丙酮、乙醚、試劑：氯仿、無水乙醇、丙酮、乙醚、 苯酚苯酚-硫酸試劑：苯酚硫酸試劑：苯酚3g,濃硫酸濃硫酸5mL，溶于，溶于95mL無水乙醇中。無水乙醇中。v原料原料:香菇香菇四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v1、多糖的提取、多糖的提取v 取取10g香菇，于組織搗碎機(jī)內(nèi)，加香菇，于組織搗碎機(jī)內(nèi)，加20倍量的水，倍量的水，90 水浴加熱水浴加熱30min，抽濾，得濾液加活性炭，抽濾，得濾液加活性炭（1mg/ml），攪拌吸附），攪拌吸附1h，抽濾，得濾液，用氯，抽濾，得濾液，用氯仿萃?。ǚ螺腿。?次）以除盡蛋白質(zhì)，萃余液中加無水乙次）以除盡蛋白

7、質(zhì)，萃余液中加無水乙醇使其乙醇最終濃度為醇使其乙醇最終濃度為80%，沉淀，沉淀12h后，于離心后，于離心機(jī)中離心（機(jī)中離心（4000rpm）30min，沉淀物分別用無水，沉淀物分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌乙醇、丙酮、乙醚洗滌3次，即的香菇多糖提取物。次，即的香菇多糖提取物。2、多糖純化、多糖純化 Sepadex G-100凝膠充分溶脹后裝凝膠充分溶脹后裝柱，用蒸餾水蒸餾柱，用蒸餾水蒸餾48h。取上述香菇多糖。取上述香菇多糖提取物溶于蒸餾水中，離心除去不溶物，提取物溶于蒸餾水中，離心除去不溶物，上清液上柱分離，用蒸餾水洗脫，洗脫速上清液上柱分離，用蒸餾水洗脫，洗脫速度度5ml/min，200n

8、m波長紫外檢測，收集波長紫外檢測，收集主要峰部分，冷凍干燥得白色香菇多糖，主要峰部分，冷凍干燥得白色香菇多糖，并稱重。并稱重。3、香菇多糖的分析檢測、香菇多糖的分析檢測（1）定性分析）定性分析苯酚苯酚-硫酸法硫酸法 苯酚苯酚-硫酸試劑：苯酚硫酸試劑：苯酚 3g，濃硫酸，濃硫酸5ml，溶于溶于95ml無水乙醇中，噴后，無水乙醇中，噴后，110，加，加熱幾分鐘，糖顯棕色。熱幾分鐘，糖顯棕色。（2）定量分析）定量分析分光光度法分光光度法 A、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取精密稱取60干燥恒重的甘露糖標(biāo)準(zhǔn)干燥恒重的甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品品0.1g，置于，置于100ml容量瓶中，加蒸餾水溶容量瓶中，加蒸

9、餾水溶解并稀釋至刻度，用移液管量取對照品溶液解并稀釋至刻度，用移液管量取對照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml，分別置于，分別置于50ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，再各精容量瓶中，加蒸餾水至刻度，再各精密吸取密吸取1ml，置水浴中加熱，置水浴中加熱15min，取出冷，取出冷卻至室溫，橘黃色由于濃度從小到大而逐漸卻至室溫，橘黃色由于濃度從小到大而逐漸加深，將溶液于加深，將溶液于490nm波長的可見分光光波長的可見分光光度計(jì)處測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。度計(jì)處測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。B、樣品多糖測定、樣品多糖測定 精密稱取香菇多糖精密稱取香菇多糖10.0mg，加水，加水溶解，定量轉(zhuǎn)移入溶解，定量轉(zhuǎn)移入100ml溶液瓶中，加溶液瓶中，加水至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取水至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取2.00ml，按，按上述實(shí)驗(yàn)方法顯色，測定吸光度，計(jì)算上述實(shí)驗(yàn)方法顯色，測定吸光度，計(jì)算香菇多糖含量。香菇多糖含量。萃取的操作v向待分離溶液（料液）中向待分離溶液（料液）中加入與之不相互溶解（至加入與之不相互溶解（至多是部分互溶）的萃取劑，多是部分互溶）的萃取劑，形成共存的兩個液相。利形成共存的兩個液相。利用原溶劑與萃取劑對各組用原溶劑與萃取劑對各組分的溶解度（包括經(jīng)化學(xué)分的溶解度（包括經(jīng)化學(xué)反應(yīng)后的溶解）的差別，反應(yīng)后的溶解